この記事では、我々はヒト肝癌細胞を標的とするための最も効率的なベクターとしてアデノ随伴ウイルス3型(AAV3)の識別について説明します。
非病原性ヒトパルボウイルスに基づいて組換えベクターは、アデノ随伴ウイルス2(AAV2)を開発し、遺伝子治療臨床試験の数で現在使用されていますされています。さらに最近では、追加のAAV血清型の数も様々な大小の動物モデル1で組織親和性選択を示すことが示されている、単離されている。 10の最も一般的に使用されるAAV血清型のうち、AAV3は群を抜いて試験管内でだけでなく、in vivoでの細胞や組織を形質導入における最も効率的です。
AAV3がバインディングの共受容体の細胞としてのヒト肝細胞増殖因子受容体を使用しているため非常に効率的に細胞株 – 肝芽腫(HB)と肝細胞癌(HCC) – しかし、私たちの最近発表された研究で、我々はAAV3ベクターはヒト肝癌を伝達することが文書化されているこれらの細胞2,3のとエントリー。
この記事では、レポーター遺伝子を有する組換えAAV3ベクターによるヒト肝癌細胞の高効率伝達を達成するために必要な手順を説明します。治療用遺伝子を有する組換えAAV3ベクターの使用は、最終的にヒトの肝癌の潜在的な遺伝子治療につながる可能性があります。
非病原性ヒトパルボウイルス、アデノ随伴ウイルス(AAV)に基づいて組換えベクターを開発し、遺伝子治療臨床試験5の数で現在使用されていますされています。以前は、10の最も一般的に使用されるAAV血清型の、一般的にAAV3ベクトルの導入効率は、in vitroおよび in vivo 1 の両方、特に低いことが報告されている。しかし、我々の最近非常によくAAV3ベクトル形質導入ヒト肝癌細胞株は、のようなフローサイトメトリー2で定量的に決定した観察、とAAV3はこれらの結合とエントリの細胞共受容体としてのヒト肝細胞増殖因子受容体(hHGFR)を利用しているセル3は 、強く、特に一般的にヒト肝細胞、およびヒト肝癌細胞に対してAAV3の選択的な組織親和性を示唆している。しかし、AAV3ベクターはまた、効率的に2正常ヒト肝細胞を形質導入するので、in vivoでのがんの遺伝子治療のアプリケーションでそれらの潜在的な利用に悪影響を及ぼす可能になります。この潜在的な問題を回避する一つの可能な戦略は選択的に腫瘍ではなく、正常な肝細胞によって産生される遺伝子産物を識別することによって癌細胞の転写標的を伴います。例えば、以前の研究は、正常な肝細胞は一般に非常に少量のを生成するのでα-フェトプロテイン(AFP)の血清レベルは、特定の存在を追跡するためのマーカー、進行、および/または肝臓癌の特定の種類の再発として使用されていることが示されているこのタンパク質。実際、我々は肝癌細胞ではなく、正常な肝細胞2、および研究において導入遺伝子の発現を標的とするAFPプロモーターを含むAAV3ベクトルを使用している現在、肝癌のマウス異種移植モデルでは、このアプローチの有効性をテストするために進行中です。私たちのさらなる研究では、我々は様々なAAVの血清型のベクターの導入効率が大幅に6月14日ウイルスキャプシドの表面に露出したチロシン残基の部位特異的突然変異誘発により増強することができることを観察した。 6 7の表面に露出したチロシンもAAV3に保存されているので、我々はこれらの残基の部位特異的突然変異誘発を実施し、チロシンに変異がAAV3ベクトルの導入効率が大幅にヒト肝癌細胞(未発表データ)に増強されることを観察した。研究はまた、ヒト肝と肝細胞癌のためのマウス異種移植モデルにおけるチロシン変異AAV3ベクトルの安全性と有効性を評価するために現在進行中であり、そして成功した場合、最適なチロシン変異AAV3の血清型のベクターは、ヒトの肝臓を標的とするために有用であることが証明されるかもしれない潜在的な遺伝子治療のためのがん。
The authors have nothing to disclose.
我々は、博士に感謝する。寛大Hep293TT細胞を提供するための組換えAAV3とAAV – EGFPプラスミド、それぞれ、博士ゲイルトムリンソンの彼らの親切なギフトのためのR.ジュードSamulskiとシャオシャオ。この研究は国立衛生研究所からの公衆衛生サービス助成金助成金R01 HL – 076901、R01 HL – 097088、およびP01 DK – 058327(プロジェクト1)(ASの)によって部分的にサポートされていました。
Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
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DMEM | Cellgro | 10-0170CM | ||
PEI | Polysciences | 23966 | ||
Benzonase | Novagen | 70664-3 | ||
HiTrap Q HP column | GE Healthcare | 17-1154-01 | ||
Salmon sperm DNA | Fisher | NC9753983 | ||
Iodixanol gradient | OptiPrep | 1114542 | ||
G-50 Columns | GE Healthcare | 27-5330-01 |