Препарирование прав Стекловидное Элементы орган для анализа протеомных

1. Передняя Dissection сегмента. Роговицы удаляется первый принятия разрез лимба в переднюю камеру использованием 15 ° лезвия (рис. 1). Тогда один лезвие кривизны роговицы, склеры ножницы вставляется в переднюю камеру. Окружная разрезы делаются в роговице, только впереди лимба. 0,12 Colibri щипцы и ножницы Уэсткотт используются для сокращения диафрагмы окружности впереди цилиарного тела. Объектив ядра удаляется с 0,12 щипцы Колибри или 15 ° лезвия (сверхкоротких) и коре головного мозга и капсулу с пинцета. 2. Стекловидное Стремление Core. 23-иглы на 5-мл шприца вводится в середине стекловидного (рис. 1). Примерно в 1 мл или более стекловидное ядро ​​мягко наддува. Затем образец помещают в микроцентрифужную трубки, а затем в жидком азоте. 3. Передняя Dissection гиалоидная. Передняя гиалоидная рассматривается как полупрозрачные кольца, регулируя падающего света от световой микроскоп шеи гуся. Предыдущая стремление стекловидное ядро ​​отделяет передние гиалоидная от других структур для облегчения идентификации. Лист эластичной ткани, тщательно оторвался от цилиарного тела с Колибри или соус щипцы и вырезать ножницами Vannas. Этот маневр повторяется. Затем образец помещают в микроцентрифужную трубки, а затем в жидком азоте. 4. Стекловидное Dissection Base. Использование 0,12 щипцы для стабилизации наглазник, Уэсткотт ножницы используются для «цветок» глаза, сделав четыре равномерно расположенных снятия стресса порезы от цилиарного тела к головке зрительного нерва. Plicata Парс из цилиарного тела (рис. 2) удаляется от каждого из квадрантов использованием Уэсткотт ножницами. Стекловидного база, то понял по обе стороны от ора Серрата щипцами за Парс Плана и сетчатки (рис. 2). Непрерывная тяга на стекловидного базы применяется с щипцами. Последовательная резки с Уэсткотт ножницы экстракты полупрозрачной ткани с "нитка жемчуга" внешний вид, как это вырезали. Затем образец помещают в микроцентрифужную трубки, а затем в жидком азоте. 5. Стекловидное Удаление Cortex. Парс Плана иссекается от каждого из квадрантов с ножницами Уэсткотт, сокращая листовки около 3-мм кзади от ора Серрата (рис. 2). Между ткани листовки, стекловидное коры себе как полупрозрачные пленки. Эластичную пленку, либо захватили с 0,12 щипцов или находящиеся в приверженности Weck-Cel хирургической губки. Стекловидной коры, затем оторвался от сетчатки и вырезали ножницами с Уэсткотт (рис. 1). Образец помещается в микроцентрифуге трубки, а затем в жидком азоте. Все образцы хранятся при температуре -80 ° C до использовались для экспериментов. 6. Представитель Результаты Образцы тканей могут быть обработаны различными методами для конкретных экспериментов. В нашем случае, образцы были переданы для анализа белков с помощью ДСН-ПААГ (рис. 3). Рисунок 1. Кросс-разрез глаз человека изображающие различные подструктуры стекловидного тела. Самой передней стекловидного представляет собой тонкий слой коллагеновых называют передней гиалоидная. Стекловидное ядро ​​включает в себя всю центральную область стекловидного тела. Эта часть стекловидного более водный, в отличие от стекловидного базы, которая является достаточно вязкой, чтобы быть охваченным щипцов и прочно прикрепляются к базовому цилиарного тела и сетчатки. Охватывая стекловидное ядро ​​очень тонкие коллагеновые оболочки называется стекловидным коры головного мозга. Рисунок 2. Стекловидное анатомии базы. Стекловидного база полупрозрачные подструктура стекловидного тела, расположенных вдоль ора Серрата (белые стрелки), который является разделительной линией разделения цилиарного тела и сетчатки. Переднему краю стекловидного базы распространяется на Парс-Плана (белая линия) цилиарного тела. Заднему краю стекловидного базы распространяется 2-3-мм кзади от ора Серрата (белый тире). Для акцизного стекловидного базы, щипцы используются для понимания ткани и потяните его от основной цилиарного тела и сетчатки. Как только повышается, Уэсткотт ножницы для резки вдоль основания. Рисунок 3. Одномерный SDS-PAGE стекловидного Элементы органа. Общие концентрации белка для передних гиалоидная, стекловидное базы, витreous ядро, и стекловидного коры 11,24, 20,1, 16,61, 14,24 мг / мл, соответственно. Гель-электрофорез проводили при 200 кВ в течение 45 минут, окрашивали Фламинго (Bio-Rad), а также визуализировать использованием VersaDoc Система визуализации (Bio-Rad). Профили для различных тканей показать несколько подобных групп, указывающие либо сохраняется или перекрестного загрязнения белков, а также уникальные полос (звездочка), что указывает на дифференциально локализованы белки.