تشريح الإنسان عناصر الجسم الزجاجي لتحليل البروتين
Summary
هذا الفيديو يظهر تقنية فعالة للتمييز وتشريح مختلف هياكل شبه شفافة من الجسم الزجاجي في العين البشرية بعد الوفاة.
Abstract
والزجاجي هو ، كولاجيني واضحة بصريا المصفوفة خارج الخلية التي تملأ داخل العين ويعتلي الشبكية. الشاذ 1،2 التفاعلات بين الأساسات الزجاجي والشبكية وراء أمراض الشبكية عدة ، بما في ذلك المسيل للدموع وانفصال الشبكية ، تجعد البقعة الصفراء ، الثقب البقعي ، سن المتصلة تحلل البقعة الصفراء vitreomacular الجر ، vitreoretinopathy التكاثري ، اعتلال الشبكية السكري التكاثري ، وvitreoretinopathies الموروثة ، 1،2 ولا يعرف التركيب الجزيئي للالأساسات الزجاجي. لأن الجسم الزجاجي شفافا مع وصول جراحية محدودة ، فقد كان من الصعب دراسة الأساسات على المستوى الجزيئي. طورنا طريقة لفصل والحفاظ على هذه الأنسجة للتحليل البروتين والبيوكيميائية. تقنية التشريح في هذا الفيديو التجريبية تبين كيفية عزل القاعدة الزجاجية ، الزجاجية الأمامية ، الزجاجي الأساسية ، والقشرة الزجاجية من عيني بعد الوفاة الإنسان. وأظهر أحد الأبعاد SDS – PAGE تحليل كل عنصر زجاجي أن أسلوبنا تشريح أدى في أربعة ملامح البروتين فريد المقابلة لكل طيدة من الجسم الزجاجي الإنسان. سوف تحديد البروتينات مجزأة تفاضليا تكشف مرشح جزيئات الأمراض الكامنة الشبكية المختلفة.
Protocol
Discussion
الجسم الزجاجي هو مادة هلامية شبه شفافة الجزيئية التي يتم تكوينها غير مفهومة ، لا سيما على مستوى الأساسات وهي : قاعدة الزجاجي ، الأساسية ، والقشرة ، والزجاجية الأمامية. جوهر زجاجي يحتوي collagens الثاني والخامس والتاسع ، والحادي عشر ، جنبا إلى جنب مع البروتيوغليكان كبريتات شوندروتن ، والبروتيوغليكان كبريتات heparan وhyaluronan. بروتين 1،2 المؤشرات الحيوية الأساسية في الجسم الزجاجي ارتبطت بأمراض مثل اعتلال الشبكية السكري. 3-5 كيف يتم التعبير عن هذه البروتينات بشكل مختلف في كل من الأساسات ، وفي كثير من الحالات لا يعرف هويات بروتين معين. قد تعطي هذه التفاصيل البصيرة إلى الأصل من البروتينات المرتبطة بالأمراض الشبكية محددة ومساعدة في المستقبل العلاجات المستهدفة. على الرغم من أنه لم يكن الفاصل الزمني الأمثل لتشريح الجثة بعد الوفاة تحديد الأنسجة ، قد تدهور البروتين يؤثر على التجارب المصب. على سبيل المثال ، يتأثر المناعية في العيون بعد الوفاة لمدة 12 ساعة ويمكن تخفيض بعض الأنشطة انزيم معين في غضون ساعات قليلة (المراقبة غير منشورة). وقد جمعت جميع الأنسجة في هذه الدراسة ما بين 2 و 8 ساعات من وفاة دون تغييرات كبيرة في التعبير عن البروتين أو صلاحيتها للanalsyis البروتيوميات. يتم اختيار تجميد النيتروجين السائل أكثر من طريقة لتثبيت الحفظ من أجل منع إجراء تغييرات صغيرة في بنية البروتينات التي تسببها عبر ربط تثبيتي ، والذي تجلى في الأنسجة الأخرى التي LC-MS/MS. 6 والدراسات البروتين تعتمد على القدرة على الدقة تشريح المقصورات مختلفة من الجسم الزجاجي ، كما تجلى في هذه التجربة الفيديو. لقد قمنا التحقق باستخدام تقنية تشريح 1 الابعاد SDS – PAGE. كما تشير نتائجنا ، وهناك وأعرب تفاضلي البروتينات في الجسم الزجاجي الأساسات المختلفة. وسوف تحدد هذه البروتينات توفير فهم أكثر تفصيلا من التقسيم الزجاجي.
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
وقدم التمويل من جانب النضال من أجل البصر. تم الحصول على أنسجة العين من ولاية ايوا البنك الليونز.
Materials
| Name | Company | Catalog Number |
| 0.12 forceps | Storz Ophthalmics | E1502 |
| 5-cc syringe | Becton-Dickinson | 309603 |
| Straight Dressing Forceps With Serrations | Storz Ophthalmics | E1400 |
| 23 gauge needle | Becton-Dickinson | 305145 |
| Colibri forceps | Storz Ophthalmics | 2/132 |
| Castroviejo angled corneal scissors | Storz Ophthalmics | E3223 |
| Vannas Curved Capsulotomy Scissors | Storz Ophthalmics | E3387 |
| Weck-Cel surgical spears | Medtronic | 0008680 |
| Westcott Curved Tenotomy Scissors | Storz Ophthalmics | E3320 |
References
- Bishop, P. N. Structural macromolecules and supramolecular organisation of the vitreous gel. Prog Retin Eye Res. 19, 323-344 (2000).
- Sebag, J. Molecular biology of pharmacologic vitreolysis. Trans Am Ophthalmol Soc. 103, 473-494 (2005).
- Yoshimura, T. Comprehensive analysis of inflammatory immune mediators in vitreoretinal diseases. PLoS One. 4, e8158-e8158 (2009).
- Gao, B. B., Chen, X., Timothy, N., Aiello, L. P., Feener, E. P. Characterization of the vitreous proteome in diabetes without diabetic retinopathy and diabetes with proliferative diabetic retinopathy. J Proteome Res. 7, 2516-2525 (2008).
- Izuta, H. Extracellular SOD and VEGF are increased in vitreous bodies from proliferative diabetic retinopathy patients. Mol Vis. 15, 2663-2672 (2009).
- Azimzadeh, O. Formalin-fixed paraffin-embedded (FFPE) proteome analysis using gel-free and gel-based proteomics. J Proteome Res. 9, 4710-4720 (2010).
