プロテオーム解析のための人間の硝子体の要素の解剖

1。前眼部の解剖。 角膜は、最初の15 °のブレード（図1）を用いて前房に角膜輪部で切開することによって除去される。その後、湾曲した角膜強膜はさみの一方のブレードは、前房に挿入されます。円周カットは、角膜輪部にちょうど前方、角膜に作られています。 0.12コリブリ鉗子とウェストコットの鋏は、毛様体の円周方向に前方アイリスを切り取るために使用されています。 レンズ核は0.12コリブリ鉗子または15 °刃（supersharp）とピンセットを用い、皮質およびカプセルで削除されます。 2。硝子体コア吸引。 5 ccシリンジで23ゲージの針が挿入されます半ば硝子体（図1）。 約硝子体コアを1 mL以上を静かに吸引される。 次に、試料を遠心管にし、液体窒素中に配置されます。 3。前部硝子体の解剖。 前部硝子体は、ガチョウの首の顕微鏡の光源からの入射光を調整することによって、半透明のリングとして見られている。硝子体コアの前の吸引は、簡単に識別するために他の構造体から前方の硝子体を分離する。 弾性組織のシートは慎重にコリブリまたは麦粒鉗子と毛様体から離れて引っ張られ、Vannasのはさみでカットされます。この操作が繰り返されます。 次に、試料を遠心管にし、液体窒素中に配置されます。 4。硝子体ベースの解剖。 アイカップを安定させるために0.12鉗子を使用して、ウェストコットのはさみは、視神経乳頭に向かって毛様体からの4つの等間隔のストレス解消になるの削減を行うことによって"花"の目に使用されます。 毛様体（図2）の同価のplicataはウェストコットのはさみを使用して、象限のそれぞれから削除されます。 硝子体のベースは、毛様扁平と網膜（図2）上の鉗子と鋸状縁のどちら側でも把握している。 硝子体ベース上で連続的な牽引力は鉗子で適用されます。ウェストコットのはさみを持つシーケンシャル切削は、それを摘出されている外観"真珠の数珠"と半透明の組織を抽出する。 次に、試料を遠心管にし、液体窒素中に配置されます。 5。硝子体皮質除去。 パルスプラナは鋸状縁（図2）の後、約3 mmのリーフレットをカットしてウェストコットのはさみと象限の各々から切り出される。 組織のリーフレットとの間で、硝子体皮質が、半透明フィルムとして可視化される。 弾性膜はどちら0.12鉗子で把持またはベックリキセル手術用スポンジへの遵守が保有しています。硝子体皮質は、その後離れて網膜から引っ張られ、ウェストコットハサミ（図1）で切り出しています。 サンプルは、マイクロ遠心チューブにして、液体窒素内に配置されます。実験のために利用されるまで、すべてのサンプルは-80℃で保存されています。 6。代表的な結果組織サンプルは、特定の実験のための様々な方法で処理することができます。私たちのケースでは、サンプルはSDS – PAGE（図3）によってタンパク質分析のために提出された。 図1。硝子体の別の部分構造を描いた人間の眼の断面図。最前硝子体は薄いコラーゲン層前部硝子体と呼ばれる。硝子体コアは、硝子体の全体の中央領域を含む。硝子体のこの部分には、鉗子で把持するのに十分な粘性であり、しっかりと基礎と毛様体と網膜に接続されているガラスベースとは対照的に、より多くの水です。硝子体コアを包含する硝子体皮質と呼ばれる非常に薄いコラーゲンのシェルです。 図2。硝子体の基本解剖学は。硝子体基部には毛様体や網膜を分離する境界線である鋸状縁（白矢印）、に沿って位置硝子体の半透明の部分構造である。硝子体基部の前縁には毛様体の毛様扁平（白い線）にわたって広がっている。硝子体基部の後縁は、ORAのコナラ（白ダッシュ）の後2〜3 mmを拡張します。消費税​​に硝子体基部には、鉗子は、組織を把握し、基盤となる毛様体および網膜からそれを引き離すために使用されます。一度上昇、ウェストコットはさみ、ベースに沿って切断するために使用されます。 図3。硝子体の要素の一次元SDS – PAGE。前部硝子体、硝子体ベース、VITの総タンパク質濃度reousコア、および硝子体皮質はそれぞれ11.24、20.1、16.61、14.24 mg / mLのであった。ゲル電気泳動は、45分間、200kVで行ったフラミンゴ（Bio – Rad社）で染色し、そしてVersaDocイメージングシステム（Bio – Rad）を用いて可視化した。異なる組織のプロファイルは、差動ローカライズされた蛋白質を示し、（アスタリスク）保存やタンパク質の相互汚染だけでなく、ユニークなバンドのいずれかを示す、いくつかの同様のバンドを示す。