Dissection של גוף האדם אלמנטים הזגוגיות לניתוח proteomic
Summary
וידאו זה מראה טכניקה יעילה עבור מבדל ו בניתוח שונות שקוף למחצה מבנים בגוף האדם זגוגי בעיניים פוסט מורטם.
Abstract
זגוגי הוא ברור אופטית, תאי מטריקס collagenous הממלא את פנים העין overlies הרשתית. 1,2 אינטראקציות בין חריגה substructures הזגוגית לבין הרשתית ביסוד vitreoretinal מחלות שונות, כולל דמעה התנתקות הרשתית, כווץ מקולרי, חור מקולרי, גיל ניוון מקולרי הקשור, המתיחה vitreomacular, vitreoretinopathy שגשוג, רטינופתיה סוכרתית שגשוג, ו vitreoretinopathies בירושה. 1,2 ההרכב המולקולרי של substructures זגוגי אינו ידוע. מאז הגוף הזגוגי הוא שקוף עם גישה כירורגית מוגבל, זה כבר קשה ללמוד substructures שלה ברמה המולקולרית. פיתחנו שיטה להפריד ולשמר את הרקמות הללו לניתוח proteomic וביוכימיים. הטכניקה לנתיחה בסרטון זה ניסיוני מראה כיצד לבודד בסיס זגוגי, hyaloid הקדמי, הליבה זגוגי, ואת קליפת זגוגי מהעיניים שלאחר המוות האנושי. אחת ממדי SDS-PAGE מנתח של כל רכיב זגוגי הראו כי טכניקת לנתיחה שלנו הביא ארבעה פרופילים חלבון ייחודי המתאים מסד כל הגוף הזגוגי האדם. זיהוי של חלבונים מידור דיפרנציאלי יגלה מולקולות המועמד שבבסיס מחלות vitreoretinal שונים.
Protocol
Discussion
הגוף הזגוגי הוא ג'ל שקוף למחצה, אשר ההרכב המולקולרי הוא הבין היטב, במיוחד ברמה של substructures שלה: הבסיס זגוגי, הליבה, קליפה, ו hyaloid הקדמי. ליבת זגוגי מכיל collagens השנייה, החמישי, התשיעי, XI, יחד עם כונדרואיטין סולפט proteoglycans, proteoglycans heparan סולפט ו hyaluronan. 1,2 סמנים חלבון הליבה זגוגי נקשרו מחלות כגון רטינופתיה סוכרתית. 3-5 איך חלבונים אלה באים לידי ביטוי באופן דיפרנציאלי בכל substructures, ובמקרים רבים את זהותם חלבון מסוים, אינם ידועים. פרטים אלה עשויים לתת תובנה למקורו של חלבונים הקשורים למחלות vitreoretinal ספציפיים לעזור בעתיד טיפולים היעד. למרות שלאחר אופטימלית מורטם מרווח לנתיחה רקמות טרם נקבע, פירוק חלבונים עלול להשפיע הניסויים במורד הזרם. לדוגמה, אימונוהיסטוכימיה מושפע ב 12 שעות שלאחר המוות בעיניים וכמה פעילות אנזים מסוים עשוי לרדת תוך מספר שעות (תצפית לא פורסם). כל הרקמות במחקר זה נאספו בין 2 ל 8 שעות של מוות ללא שינויים משמעותיים ביטוי חלבון או התאמה analsyis proteomics. חנקן נוזלי מקפיא שיטת שימור נבחר על קיבעון על מנת למנוע שינויים קטנים במבנה החלבון נגרם על ידי מקבע לחצות קישור, אשר הודגמה ברקמות אחרות באמצעות LC-MS/MS. 6 מחקרים proteomic יהיה תלוי ביכולת במדויק לנתח את תאים שונים של הזגוגית, כפי שמודגם בניסוי הווידאו הזאת. יש לנו תוקף את טכניקת הניתוח באמצעות 1-ממדי SDS-PAGE. כאשר התוצאות שלנו מראים, יש ביטוי דיפרנציאלי חלבונים substructures הגוף השונים זגוגי. זיהוי החלבונים האלה יספקו הבנה מפורטת יותר של מידור זגוגי.
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
המימון ניתן על ידי להילחם עבור Sight. רקמות התקבלו מבנק העין איווה האריות.
Materials
| Name | Company | Catalog Number |
| 0.12 forceps | Storz Ophthalmics | E1502 |
| 5-cc syringe | Becton-Dickinson | 309603 |
| Straight Dressing Forceps With Serrations | Storz Ophthalmics | E1400 |
| 23 gauge needle | Becton-Dickinson | 305145 |
| Colibri forceps | Storz Ophthalmics | 2/132 |
| Castroviejo angled corneal scissors | Storz Ophthalmics | E3223 |
| Vannas Curved Capsulotomy Scissors | Storz Ophthalmics | E3387 |
| Weck-Cel surgical spears | Medtronic | 0008680 |
| Westcott Curved Tenotomy Scissors | Storz Ophthalmics | E3320 |
References
- Bishop, P. N. Structural macromolecules and supramolecular organisation of the vitreous gel. Prog Retin Eye Res. 19, 323-344 (2000).
- Sebag, J. Molecular biology of pharmacologic vitreolysis. Trans Am Ophthalmol Soc. 103, 473-494 (2005).
- Yoshimura, T. Comprehensive analysis of inflammatory immune mediators in vitreoretinal diseases. PLoS One. 4, e8158-e8158 (2009).
- Gao, B. B., Chen, X., Timothy, N., Aiello, L. P., Feener, E. P. Characterization of the vitreous proteome in diabetes without diabetic retinopathy and diabetes with proliferative diabetic retinopathy. J Proteome Res. 7, 2516-2525 (2008).
- Izuta, H. Extracellular SOD and VEGF are increased in vitreous bodies from proliferative diabetic retinopathy patients. Mol Vis. 15, 2663-2672 (2009).
- Azimzadeh, O. Formalin-fixed paraffin-embedded (FFPE) proteome analysis using gel-free and gel-based proteomics. J Proteome Res. 9, 4710-4720 (2010).
