Modelos de mouse de leucomalácia periventricular

Procedimentos detalhados de criação de lesão cerebral neonatal em ratos P6: Pós-natal do dia 6 (P6) ratos são anestesiados com refrigeração indireta sobre o gelo ao ponto de insensibilidade ao estímulo nocivo (anestesia profunda). Após a limpeza da pele com álcool, uma incisão mediana ventral é feita no pescoço anterior. Sob um microscópio de dissecação, a bifurcação da artéria carótida comum direita é abordado por gentilmente retrair os músculos omo-hióideo e esternocleidomastóideo. A fascia em torno da bainha carotídea é removido, eo ramo proximal interna isolada do nervo vago nas proximidades e gânglios simpáticos com um gancho. A artéria carótida interna é então cauterizados com uma ponta de cauterização. Após a cauterização, a incisão na pele é suturada, eo animal é mantido quente até que esteja completamente desperto e depois voltou para a represa. Uma hora após a ligadura, o animal é colocado em uma câmara selada infundido com nitrogênio, até um nível de 6,0% O 2 é atingido. O animal é então exposto a 35 min de hipóxia. Após a exposição a hipóxia, o mouse se recupera em uma almofada de aquecimento (33 ° C) por 30 min e depois é devolvido à represa. Para a criação de lesão cerebral com hipóxia combinado / isquemia e infecção / inflamação, o animal é então injetado intraperitonealmente com 0,015 ml de lipopolissacarídeo (LPS, 1 mg / kg). Quatro dias post-hypoxia/ischemia, os ratos são anestesiados com refrigeração indireta sobre o gelo até o ponto de indiferença a estímulos nocivos, então perfundidos com solução salina e, em seguida, paraformaldeído 4%. Cérebros são removidos e cryoprotected. Figura 1. Caracterização de lesão cerebral no modelo do rato hipóxica / isquêmica com coloração H & E. Há necrose focal (setas) na substância branca cerebral ipsilateral (A) para a ligadura de carótida, em comparação com a matéria cerebral contralateral branco (B). Necrose focal ipsilateral e microinfartos são observadas no hipocampo (C) eo tálamo (D) no cérebro com lesão da substância branca cerebral ipsilateral. Resultados representante e números: Modelos do rato do PVL com hipóxia / isquemia e / ou infecção / inflamação são alcançados pela ligadura de carótida unilateral seguido pela exposição à hipóxia e injeção de LPS. Estamos definindo os modelos novo mouse como adequados modelos LPV. O estudo neuropatológico de cortes coronais corados com hematoxilina e eosina (H & E) através da parte frontal do cérebro inteiro revela necrose focal na questão central branca do hemisfério cerebral ipsilateral à ligadura de carótida (Fig. 1A), com relativa preservação dos neurônios no o córtex cerebral sobrejacente comparação com a matéria cerebral contralateral branco (Figura 1B). Em matéria de necrose focal branco, existe um marcado aumento da celularidade composto de macrófagos e astrócitos reativos, como é característico de LPV focal humana. Na questão central contralateral branca, os núcleos são organizados em oligodendroglial fascicular-como feixes, essa arquitetura é completamente interrompido pela necrose focal no lado ipsilateral. De nota, também observamos necrose ipsilateral no hipocampo (Fig. 1C) eo tálamo (microinfartos focal) (Figura 1D) no cérebro com lesão da substância branca cerebral ipsilateral. PVL humana também não ocorre em completo isolamento que acompanham lesões massa cinzenta. A marca da PVL é o relativo, embora não seja completa, poupando do córtex cerebral que cobre o assunto feridos branco – um recurso que nós acreditamos que está presente em nossos modelos de mouse. Figura 2. Escala de pontuação de 0-5 para avaliar lesão da substância branca pelo PAM ou O1 em modelos do rato de leucomalácia periventricular. Nossos modelos de rato mostram características de PVL, tanto a nível fenotípico e molecular. Temos usado a detecção imunocitoquímica da proteína básica da mielina (MBP) ou O1 antígeno para avaliar lesão, criaram uma escala padrão 0-5 para marcar a lesão da substância branca (Fig. 2), e caracterizaram a substância branca patologia (Fig . 3). Mais recentemente, um ensaio não-tendenciosa estereológica foi implementado para substituir o método semi-quantitativo inicial. Além disso, para testar efeitos correlatos de lesão da substância branca nos resultados funcionais, temos realizado testes comportamentais para a função motora. Temos demonstrado que os ratos apresentam déficits motores atacando P10-21 hipóxia seguintes / isquemia mais LPS em P6. Nós estabelecemos critérios de pontuação com uma escala de 0-4 para definir disfunção membro contralateral em ratos feridos no P10-21. Normalmente, os ratos normais pode scamper uma inclinação de 30 º (nota 4) e subir a 45 ° inclinação sem deslizar (escore de 3). Camundongos feridos têm notas mais baixas em correlação com os graus de lesão da substância branca. Figura 3. Caracterização de lesão da substância branca pelo PAM ou O1 coloração e estrutura da mielina por microscopia eletrônica (EM). MBP e coloração O1 mostrar a perda de mielina na substância branca cerebral ipsilateral à ligadura, em comparação com substância branca contralateral. EM exame mostra axônios mielinizados na massa branca cerebral contralateral à ligadura e degenerou tecido na substância branca ipsilateral. Prevemos que o estabelecimento dos modelos novo mouse da LPV nos permitirá estudar mecanismos específicos de PVL-like lesão no cérebro imaturo. Iremos abordar patogênese usando linhagens de camundongos transgênicos para examinar o papel de moléculas individuais de interesse e avaliar as metas de neuroproteção.