Mausmodellen periventrikuläre Leukomalazie

Detaillierte Verfahren zu schaffen, Neugeborenen-Hirn-Trauma in P6 Mäusen: Postnatalen Tag 6 (P6) Mäuse anästhesiert mit indirekter Kühlung auf Eis bis hin zur Teilnahmslosigkeit auf schädliche Stimulation (tiefe Narkose). Nach der Reinigung der Haut mit Alkohol, ist eine Mittellinie ventral Einschnitt in der vorderen Hals. Unter einem Binokular ist der Bifurkation der rechten Arteria carotis communis durch leichtes Zurückziehen des M. omohyoideus und sternocleidomastoideus näherte. Die Blende rund um die Karotisscheide wird entfernt und der proximalen inneren Ast aus dem nahe gelegenen Vagusnerv und sympathischen Ganglien mit einem Haken isoliert. Die A. carotis interna wird dann geätzt mit einer ätzenden Spitze. Nach Verätzungen, wird der Hautschnitt vernäht, und das Tier warm gehalten, bis sie vollständig wach und kehrte dann nach der Staumauer. Eine Stunde nach der Ligation wird das Tier in einer geschlossenen Kammer mit Stickstoff bis zu einem Niveau von 6,0% O 2 erreicht ist infundiert platziert. Das Tier wird dann 35 min Hypoxie ausgesetzt. Nach Hypoxie Exposition, erholt sich der Mauszeiger auf einem Heizkissen (33 ° C) für 30 min und dann ist es, den Damm zurück. Zur Erstellung von Hirn-Trauma mit kombinierter Hypoxie / Ischämie und Infektion / Entzündung, ist das Tier dann intraperitoneal mit 0,015 ml Lipopolysaccharid (LPS, 1 mg / kg) injiziert. Vier Tage post-hypoxia/ischemia sind Mäuse mit indirekter Kühlung auf Eis bis zu dem Punkt der Reaktion auf Schmerzreize, dann mit Kochsalzlösung und dann 4% Paraformaldehyd perfundiert. Brains entfernt und cryoprotected. Abbildung 1. Charakterisierung von Hirn-Trauma in der hypoxisch / ischämischen Mausmodell mit H & E Färbung. Es ist eine fokale Nekrose (Pfeile) in der weißen Hirnsubstanz ipsilateral (A) zu der Carotis-Ligation, im Vergleich zu der kontralateralen zerebralen weißen Substanz (B). Ipsilateral Nekrose und Schwerpunkte Mikroinfarkten sind im Hippocampus (C) und Thalamus (D) in den Gehirnen mit ipsilateralen zerebralen weißen Substanz Verletzungen beobachtet. Repräsentative Ergebnisse und Fakten: Mausmodelle von PVL mit Hypoxie / Ischämie und / oder Infektion / Entzündung durch einseitige carotis Ligation durch die Exposition gegenüber Hypoxie und Injektion von LPS gefolgt erreicht. Wir definieren die neue Maus-Modelle als geeignete PVL-Modelle. Neuropathologische Untersuchung des koronalen Abschnitte mit Hämatoxylin-und Eosin (H & E) durch das ganze Vorderhirn Kirchenfenster zeigt fokale Nekrosen in der zentralen weißen Substanz des zerebralen Hemisphäre ipsilateral zur Carotis-Ligation (Abb. 1A), mit relativer Aussparung von Neuronen in der darüber liegenden Großhirnrinde zur kontralateralen zerebralen weißen Substanz (Abb. 1B) verglichen. In den Mittelpunkt nekrotischen weißen Substanz, gibt es Zunahme der Zelldichte, bestehend aus Makrophagen und reaktiven Astrozyten markiert, wie es charakteristisch für die menschliche Mittelpunkt PVL. In der kontralateralen zentralen weißen Substanz, die oligodendroglialen Kerne in faszikulären-like Bündeln angeordnet; dieser Architektur ist vollständig durch die fokale Nekrosen auf der ipsilateralen Seite gestört. Zu beachten ist, beobachten wir auch ipsilateral Nekrose im Hippocampus (Abb. 1C) und Thalamus (Schwerpunkt Mikroinfarkten) (Abb. 1D) in den Gehirnen mit ipsilateralen zerebralen weißen Substanz Verletzungen. Menschliche PVL auch nicht in völliger Isolation auftreten, von begleitenden grauen Substanz Läsionen. Das Markenzeichen von PVL ist die relative, wenn auch nicht vollständig, Schonung der Hirnrinde, die über dem verletzten weißen Substanz – ein Feature, das wir glauben, ist in unseren Mausmodellen. Abbildung 2. Scoring Skala von 0-5 für die Beurteilung der weißen Substanz Verletzungen durch MBP oder O1 in Mausmodellen der periventrikuläre Leukomalazie. Unsere Maus-Modellen zeigen, Merkmale von PVL sowohl auf phänotypischer und molekularer Ebene. Wir haben immunzytochemische Nachweis von Myelin basisches Protein (MBP) oder O1-Antigen verwendet werden, um Verletzungen zu bewerten, haben festgestellt, eine Standard-Skala von 0 bis 5, um die weiße Substanz Verletzungen (Abb. 2) Gäste, und haben aus der weißen Substanz Pathologie (Abb. . 3). In jüngerer Zeit hat eine nicht vorgespannte stereologische Assay wurde implementiert, um für die erste semi-quantitative Methode zu ersetzen. Darüber hinaus testen für korrelative Auswirkungen der weißen Substanz Verletzungen auf funktionelle Ergebnisse haben wir Verhaltenstests für Motorik durchgeführt. Wir haben gezeigt, dass die Mäuse auffällige motorische Defizite aufweisen bei P10-21 nach Hypoxie / Ischämie und LPS auf P6. Wir haben Bewertungskriterien mit einer Skala von 0-4 gegründet, um kontralateralen Extremität Dysfunktion bei verletzten Mäuse definieren auf P10-21. In der Regel können normale Mäuse huschen bis 30 ° Neigung (Score von 4) und erklimmen einen 45 ° Neigung ohne zu gleiten (score of 3). Verletzte Mäuse haben niedrigere Werte in Korrelation mit dem Grad der weißen Substanz Verletzungen. Abbildung 3. Charakterisierung der weißen Substanz Verletzungen durch MBP oder O1 Färbung und der Myelin-Struktur durch elektronenmikroskopische (EM). MBP und O1 Färbung zeigen Myelinverlust in weißen Hirnsubstanz ipsilateral zur Ligation, im Vergleich zu kontralateralen weißen Substanz. EM Untersuchung zeigt myelinisierte Axone in weißen Hirnsubstanz kontralateral zur Ligation und entartete Gewebe in ipsilateralen weißen Substanz. Wir gehen davon aus, dass die Errichtung der neuen Maus-Modellen der PVL wird uns erlauben, spezifische Mechanismen der PVL-wie Verletzungen der unreifen Gehirn zu studieren. Wir werden uns mit Pathogenese Verwendung von transgenen Mauslinien, die Rolle einzelner Moleküle von Interesse zu untersuchen und zu bewerten Ziele der Neuroprotektion.