Péptido: Enriquecimento tetrâmero com base MHC das células T específicas para epitopos

Uma necessidade básica para os investigadores que estudam a imunidade adaptativa com modelos experimentais in vivo é a capacidade de identificar as células T com base no seu receptor de células T de antigénio (TCR) especificidade. Muitos métodos indirectos estão disponíveis em que uma população a granel de células T é estimulada in vitro com um antigénio específico e células T específicas do epítopo são identificadas através da medição de uma resposta funcional, como a proliferação, a produção de citocinas, ou a expressão de marcadores de activação ^1. No entanto, estes métodos apenas identificar as células T específicas para epitopo que exibem uma de muitas possíveis funções, e eles não são suficientemente sensíveis para detectar epítopos específicos de células T naive em frequências precursoras. Uma alternativa popular é o TCR transgénico modelo de transferência adoptiva, em que as células T monoclonais a partir de um ratinho transgénico TCR são semeadas em hospedeiros histocompatibilidade para criar um precursor população grande de células T específicas para epitopos que podem ser easily rastreados com o uso de um anticorpo marcador Congênicos ^2,3. Embora poderoso, este método sofre de artefactos experimentais associados não fisiológicas da frequência de células T com especificidade para um único epítopo ^4,5. Além disso, este sistema não pode ser utilizado para investigar a heterogeneidade funcional do epítopo específicos clones de células T dentro de uma população policlonal.

A forma ideal para o estudo da imunidade adaptativa deve envolver a detecção directa do epítopo de células T específicas a partir do repertório de células T endógeno, utilizando um método que diferencie a especificidade TCR unicamente pela sua ligação ao péptido cognato: (pMHC) do MHC complexos. O uso de tetrâmeros pMHC e citometria de fluxo realiza esta ^6, mas está limitado à detecção de populações de alta frequência de células T específicas para epitopo apenas encontrados a expansão induzida pelo antigénio seguinte clonal. Neste protocolo, descrevemos um método que coordena o uso de tetrâmeros pMHC e magnetic tecnologia de enriquecimento de células para permitir a detecção de frequências extremamente baixas células epítopo T específicas de tecidos de camundongos linfóides ^3,7. Com esta técnica, pode-se rastrear exaustivamente inteiras epitopo-populações específicas de células T endógenas em ratinhos em todas as fases da resposta imune.