补消耗的特定细胞群的枯竭

纯化的细胞群，是研究其职能所需的一个共同的过程。在这里，我们描述了一个快速和有效的方法消耗使用抗原特异性抗体和补体消耗的细胞群。的补充，激活抗体，如果是一个宗族的特定标记，可以实现任何细胞人口枯竭。在这里，我们展示了Thy1使用一个mAb特异性T细胞耗竭，基本上所有的T细胞群所表达的蛋白质。我们耗尽αβT细胞超过95％，余下的脾细胞从68％提高到98％。这种细胞纯度水平是相似的其它净化策略，包括流式细胞仪和磁珠分离。补枯竭是一种快速的技术，可在1.5小时内进行一次起始细胞群。补充枯竭的另一个优点是，任何实验室都可以执行的技术，因为它不需要昂贵的设备和试剂。唯一的主要件装备需要水浴和离心机。兔补充，可从不同厂商购买，以合理的成本（见试剂表）和许多单克隆抗体可以购买从美洲热带金枪鱼委员会和当地种植，以控制成本。相比之下，流式细胞仪需要与流式细胞仪检测细胞的分拣能力，将成本的六个数字和昂贵的荧光标记单克隆抗体。磁珠分离是价格适中，但需要购买一块磁铁和磁珠，这可能是昂贵的的。此外，一些磁珠分离战略，也需要购买的列。

补体细胞耗竭使用的主要绊脚石是所需的抗原特异性的单克隆抗体激活补体的可用性。虽然人类，大鼠和小鼠抗体所有有能力修正补充，一些亚型比别人做得更好。虽然从所有三个品种的IgM是高度有效地固定补充的IgG亚型有所不同。因此，每一个单克隆抗体，必须先在试点研究测试，以确定其有效性。对于不高效的抗体，，可以进行两轮补充枯竭，而不影响其余的细胞群的生存能力。由于节约了成本，抗体滴定为达到最佳效果。此外，使用的抗体并不需要得到净化。杂交瘤细胞培养上清和腹水的工作一样有效，这是特别方便的IgM抗体，这是很难净化。与抗体，它必须在一项试验研究滴定的补充。的浓度过高会导致非目标细胞群的生存能力损失。同样重要的是，孵化时间不超过60分钟。

在我们的协议，我们共同孵育抗体和补在一起。然而，细胞可以标记抗体为15-30分钟，冲前补此外。当使用此策略，确保执行冰，以防止损失的细胞在细胞表面的抗原抗体孵化，与某些蛋白质发生修补和上限或受体的内化。虽然高效，与其他方法相比，以补充枯竭的主要缺点是，它不能为正选择使用。因此，它是很难获得的细胞亚群。例如，将难以净化边缘区B细胞滤泡B细胞，最好是用流式细胞仪做。在这种情况下，激活补体可用于消耗性T细胞，以减少细胞被排序。该战略将减少排序的时间，这将节省的钱，将在不太苛刻的细胞。

由于特定的细胞群的净化，是一种常见的要求，已开发的战略。补充枯竭战略的主要优点是其经济承受能力，技术简单和节省时间。