نضوب بالسكان خلية معينة من قبل استنفاد تكملة

عملية تنقية للسكان الخلية هو إجراء المشتركة اللازمة لدراسة وظائفها. نحن هنا وصف طريقة سريعة وفعالة للأوزون السكان الخلية باستخدام مستضد محددة الأضداد ونقص المتممة. لا يمكن أن يتحقق استنفاد أية مجموعة من السكان الخلية إذا كان الضد – تكمل تفعيل متاح للعلامة محددة النسب. وأعرب بروتين هنا أثبتنا استنفاد الخلايا التائية باستخدام خريطة موقع لThy1 محددة ، وذلك أساسا جميع السكان الخلايا التائية. المنضب لدينا أكثر من 95 ٪ من الخلايا التائية αβ وزيدت splenocytes المتبقية من 68 ٪ إلى 98 ٪. هذا المستوى من النقاء الخلية استراتيجيات مماثلة لتنقية الأخرى بما في ذلك نظام مراقبة الأصول الميدانية والانفصال حبة المغناطيسي. نضوب تكمل هي تقنية السريعة التي يمكن أن يؤديها في 1.5 ساعة مرة واحدة يتم الحصول على السكان خلية البداية. ميزة أخرى لاستنفاد تكملة هو أن أي مختبر يمكن أن تؤدي هذه التقنية لأنها لا تتطلب معدات باهظة الثمن والكواشف. القطع الكبير الوحيد المعدات المطلوبة هي حمام الماء وأجهزة الطرد المركزي ملف. يمكن شراؤها يكمل الأرنب من مجموعة متنوعة من الباعة بتكلفة معقولة (انظر الجدول الكواشف) ويمكن شراؤها من العديد من خريطة موقع ATTC والمنتجة محليا للسيطرة على التكاليف. في المقابل ، FACS يتطلب تدفق عداد الكريات مع قدرة على فرز الخلية التي ستكلف في الأرقام الستة ومكلفة خريطة موقع الموسومة fluorescently. الفصل المغناطيسي هو حبة بأسعار معتدلة ، ولكن يتطلب شراء المغناطيس والخرز المغناطيسي ، والتي يمكن أن تكون مكلفة. بالإضافة إلى ذلك ، بعض استراتيجيات الفصل المغناطيسي حبة يتطلب أيضا شراء من الأعمدة.

وحجر العثرة الاساسي هو لاستخدام تكملة لنضوب الخلية هو توافر تكمل تفعيل خريطة موقع مع خصوصية المستضد اللازمة. على الرغم من أن الإنسان ، والفأر والجرذان الأضداد جميعا القدرة على استكمال الإصلاح ، وبعض isotypes هي أفضل من غيرها. على الرغم من الغلوبولين المناعي من جميع الأنواع الثلاثة هي فعالة للغاية في تحديد تكمل isotypes مفتش تختلف. يجب أولا ومن ثم يتم اختبار كل خريطة موقع في دراسة تجريبية لتحديد مدى فعاليته. عن الأجسام المضادة التي ليست ذات كفاءة عالية ، يمكن إجراء جولتين من استنفاد تكملة دون التأثير على سلامة السكان الخلايا المتبقية. كما وفورات في التكاليف ، ينبغي معاير الأجسام المضادة للفعالية المثلى. بالإضافة إلى ذلك ، أن الأجسام المضادة المستخدمة لا تحتاج إلى تنقية. supernatants ورم هجين واستسقاء السوائل فقط العمل بشكل فعال ، وهو أمر مريح خصوصا للأضداد الغلوبولين المناعي ، والتي هي صعبة لتنقية. كما هو الحال مع الأضداد ، فمن المحتم أن يكون مكملا معاير في الدراسة التجريبية. وهناك تركيز عال جدا يؤدي الى فقدان قابلية للسكان الخلية غير المستهدفة. المهم أيضا هو أن فترة حضانة لا تتجاوز 60 دقيقة.

في بروتوكول لدينا ، فقد شاركنا في احتضان هذه الأضداد وتكمل معا. ومع ذلك ، يمكن أن توصف الخلايا مع الأجسام المضادة لل15-30 دقيقة ويغسل قبل إضافة متممة. عند استخدام هذه الاستراتيجية ، للتأكد من تنفيذ حضانات الأضداد على الجليد لمنع فقدان الخلية المستضد على سطح الخلية ، كما يحدث مع بعض البروتينات التي ترميم وتغطية أو استيعاب مستقبلة. على الرغم من كفاءة عالية ، والعيب الرئيسي لاستكمال استنزاف بالمقارنة مع الأساليب الأخرى هو أنه لا يمكن استخدامها لاختيار ايجابية. وبالتالي فمن الصعب الحصول على مجموعات سكانية فرعية من الخلايا. على سبيل المثال ، سيكون من الصعب تطهير المنطقة الهامشية خلايا من خلايا B B الجريبي ، والتي من الأفضل أن يقوم به نظام مراقبة الأصول الميدانية. في هذه الحالة ، يمكن أن تستخدم لتنشيط تكملة تستنفد خلايا تي للحد من عدد الخلايا التي تم فرزها. وهذه الاستراتيجية تقليل الوقت الفرز ، التي من شأنها توفير المال وستكون أقل قسوة على الخلايا.

منذ تنقية خلية معينة من السكان هو مطلب مشترك وضعت عددا من الاستراتيجيات. المزايا الرئيسية للاستراتيجية مكملة لها القدرة على تحمل التكاليف ونضوب ، بساطة التقنية وتوفير الوقت.