Summary

عزل وتوصيف العدلات مع خصائص مضادة للورم

Published: June 19, 2015
doi:

Summary

Neutrophils play an important role not only in host defense against invading microorganisms, but are also involved in the immune surveillance of tumor cells. Here, we describe techniques related to the isolation of neutrophils with anti-tumor properties and methods for monitoring anti-tumor neutrophil function in vitro and in vivo.

Abstract

العدلات، والأكثر وفرة من كل خلايا الدم البيضاء في الدورة الدموية البشري، ولعب دورا هاما في الدفاع المضيف ضد الميكروبات الغازية. بالإضافة إلى ذلك، العدلات تلعب دورا مركزيا في المراقبة المناعية للخلايا السرطانية. لديهم القدرة على التعرف على الخلايا السرطانية واستحثاث موت الخلايا السرطانية إما من خلال آلية تعتمد على الاتصال الخلية التي تنطوي على بيروكسيد الهيدروجين أو من خلال بوساطة الخلايا السمية الخلوية التي تعتمد على الأجسام المضادة (ADCC). العدلات مع النشاط المضادة للورم يمكن عزلها من الدم المحيطي من مرضى السرطان والفئران الحاملة للورم. وتسمى هذه العدلات العدلات-مجرور الورم (TEN) لتمييزها عن العدلات من الأصحاء أو الفئران السذاجة التي لا تظهر أي نشاط كبير الورم السامة للخلايا. مقارنة مع خلايا الدم البيضاء الأخرى، تظهر العدلات الطفو مختلفة مما يجعل من الممكن الحصول على> 98٪ سكان العدلة نقية عندما تتعرض لزيادة الكثافة. ومع ذلك، بالإضافةإلى عالية الكثافة الطبيعي سكان العدلة (HDN)، في المرضى الذين يعانون من السرطان في الفئران الحاملة للورم، وكذلك في ظل ظروف التهابات مزمنة، تظهر السكان منخفض الكثافة العدلات متميز (LDN) في الدورة الدموية. LDN شارك في تنقية مع الكسر وحيدات النوى ويمكن فصلها عن الخلايا وحيدة النواة باستخدام استراتيجيات إيجابية أو سلبية الاختيار. مرة واحدة يتم تحديد نقاء العدلات معزولة عن طريق التدفق الخلوي، ويمكن استخدامها لفي المختبر وفي الجسم الحي المقايسات الفنية. وصفنا التقنيات لرصد النشاط المضادة للورم من العدلات، وقدرتهم على الهجرة، وإنتاج أنواع الاكسجين التفاعلية، فضلا عن رصد قدرتها أكلة خارج الحي. نحن أيضا وصف أساليب لتسمية العدلات في الجسم الحي تتبع، وتحديد قدراتها المضادة للالمنتشر في الجسم الحي. كل هذه التقنيات ضرورية لفهم كيفية الحصول على وتميز العدلات مع المضادة للورموظيفة.

Introduction

تميزت في البداية العدلات كما الخلايا المناعية الفطرية التي تكون بمثابة خط الدفاع الأول ضد الميكروبات الغازية. اليوم أنه من المعروف أن العدلات وظائف بعيدة المدى أكثر من ذلك، بالتورط في تصاعد الاستجابات المناعية التكيفية ضد المستضدات الأجنبية 1،2، تنظم تكون الدم 3، 4 الأوعية الدموية والتئام الجروح 5. بالإضافة إلى ذلك، قد العدلات يؤثر على نمو الورم النقيلي والتقدم بحكم المؤيدة والمضادة للورم أنشطتها 6،7. وتتميز العدلات من قبل نواة مجزأة متعددة الأشكال (ومن هنا وصف النوى (PMN) الكريات البيض)، وتحتوي على الأقل ثلاثة أقسام فرعية متميزة من حبيبات فضلا عن حويصلات إفرازية 8 (الشكل 1A-C).

العدلات تمتلك القدرة أكلة عالية وNADPH عالية النشاط أوكسيديز حاسم للقضاء على الجراثيم، وتفرز مجموعة واسعة من كيموكينات هامة لفيالجر العدلات إضافية والخلايا المناعية الأخرى إلى موقع الالتهاب 8،9. وتتميز العدلات عن طريق التعبير عن كمية كبيرة من المستقبلات السطحية بما في ذلك تول مثل مستقبلات (TLRs)، C-نوع كتين المستقبلات (CLRs)، تكمل مستقبلات 3 (CD11b / CD18) وجزيئات الالتصاق الأخرى (على سبيل المثال، L-selectin، LFA-1، VLA-4 و سرطاني مضغي المتعلقة مستضد التصاق الخلايا جزيء 3 (CEACAM3 / CD66b))، مستقبلات chemokine (على سبيل المثال، CXCR1، CXCR2، CCR1، CCR2)، مستقبلات جاذب كيميائي (على سبيل المثال، PAFR، LTB 4 R وC5aR) ، مستقبلات خلوى (على سبيل المثال، G-CSFR، IL-1R، IL-4R، IL-12R، IL-18R، TNFR)، فورميل الببتيد مستقبلات (على سبيل المثال، FPR1-3)، ومستقبلات التيسير (على سبيل المثال، CD16 (FcγRIII )، CD32 (FcγRII)، وCD64 (FcγRI) (10). وفي الفئران، وعادة ما حددت العدلات كما CD11b + + Ly6G، في حين يتم تحديد العدلات الإنسان باستخدام CD11b، CD15، CD16 و CD66b علامات الكريات البيض. ومن المتفق عليه إلى وصمة عار لالميلوبيروكسيداز البروتينات الحبيبية (MPO) والإيلاستاز العدلات (NE) للكشف عن العدلات في الأنسجة.

فإنه لا يزال من غير الواضح ما إذا كانت تتوسط وظائف متنوعة من العدلات من قبل الخلية نفسها أو عن طريق متميز خلية الفرعية من السكان. وتشير البيانات المتراكمة عن وجود سكان العدلة غيروي المنشأ الذي يظهر درجة عالية من المرونة المتضررين من المحفزات الموالية للالتهابات والمكروية 11،12. Fridlender وآخرون 13 قسمت بشكل صارخ العدلات في السرطان إلى اثنين من السكان الفرعي رئيسي يسمى N1 مع خصائص مضادة للورم وN2 مع خصائص الموالية للورم. في السرطان، وكذلك في الالتهابات المزمنة، هناك إضافي السكان الفرعية يتألف من خلايا المحببات المستمدة النخاعي القامع (G-MDSCs) التي تقمع T استجابات الخلايا 14. تعتبر G-MDSCs أن تكون خلايا الدم النخاعي غير ناضجة تتميز CD11b + Ly6Cانخفاض Ly6G النمط الظاهري مرحبا في الفئران 15، في حين وجود CD15 + / CD16 النمط الظاهري انخفاض في الإنسان 16. G-MDSCs تعبير عن مستويات أعلى من أرجيناز والميلوبيروكسيداز، في حين انخفضت مستويات السيتوكينات وكيموكينات من العدلات تعميم العادية. فهي أقل أكلة والمهاجرة، ولكن إنتاج مستويات أعلى من ROS 15،17،18. في هذه الورقة سنقوم بشرح بعض المنهجيات الأساسية لعزل وتوصيف العدلات مع خصائص مضادة للورم.

في حين تشكل العدلات أكبر عدد من السكان من جميع خلايا الدم البيضاء في الدورة الدموية البشري (45-70٪، 1800 – 6000 / ميكرولتر)، في الفئران، في ظل ظروف طبيعية، فهي قليلة نسبيا (10-15٪؛ 300-500 / ميكرولتر ). يزيد عدد العدلات باطراد على الالتهاب وأحيانا في مرض السرطان، وهو ما يمثل حالة من التهاب مزمن 7. العدلات من تطوير متعددة القدرات السلائف النخاعي المشترك (CMP) مLLS في نخاع العظم، من خلال عملية التمايز اجتياز مراحل myeloblasts (MB)، promyelocytes (PM)، myelocytes (MC)، metamyelocytes (MM) والخلايا الفرقة (BC) 8. قد تبقى ناضجة، العدلات بعد الإنقسامية داخل نخاع العظام ل4-7 أيام قبل أن يتم الإفراج عنهم لتداول 8. دوران العدلات في الدم عادة ما يكون سريعا بمعدل نصف عمر 6-12 ساعة، والتي قد تطول في ظل ظروف التهابات. العدلات Unstimulated محدودة النشاط المضادة للمكون للأورام، وهي الميزة التي يمكن الحصول عليها من خلال تعريض العدلات ساذجة إلى كيموكينات IL-8 (CXCL2)، CCL2، CCL5 وCXCL5 6،19 أو مصطنع، من خلال تعريضهم لphorbol phorbol استر 12 -myristate 13-خلات (PMA) 6.

وقصيرة العمر النصفي للالعدلات الدم جنبا إلى جنب مع انخفاض عدد العدلات (~ 3-5 × 10 5) تحققت من 1 ملليتر دم من السذاجة 6-8 الاسبوع الماوس القديم، جعلت منصعوبة في استكشاف وظيفة تعميم الماوس العدلات في المختبر. للتغلب على هذه الصعوبة، وقد تم استخدام مصادر أخرى. على سبيل المثال، يمكن الحصول على أعداد كبيرة من العدلات من نخاع العظم 20 أو الصفاق بعد تحريض التهاب عقيم (على سبيل المثال، بعد الحقن داخل الصفاق من thioglycollate مرق أو زيموزان A). تجدر الإشارة إلى أن العدلات تم الحصول عليها من التجويف البريتوني لا تمارس أي نشاط مضاد للمكون للأورام (المراقبة غير منشورة).

. غرانوت آخرون 6 وحظ أن الفئران BALB / ج تلقيح orthotopically مع الماوس 4T1 الثدي خط خلية سرطان تطوير العدلات الذي تفاقم مع ورم تقدم 6 (الشكل 2A)، بحيث 20-40000000 العدلات الدم يمكن عزلها من 1 ملليتر دم 3-4 أسابيع بعد ورم التلقيح. وقد اكتسبت هذه العدلات الأنشطة المضادة للورم، وكانت وفقا لذلك لجنة المحيط الهنديالعدلات NED-مجرور الورم (TEN)، وذلك لتمييزها عن العدلات ساذجة 6 (الشكل 2B). في حين العدلات عالية الكثافة (HDN، الشكل 1A) هي غاية المضادة للمكون للأورام، العدلات منخفض الكثافة (LDN، الشكل 1B) ولدت في سياق السرطان ليست 21. أيضا، العدلات عالية الكثافة من نخاع العظم والطحال من الفئران الحاملة للورم لديها النشاط المضاد للورم (بيانات غير منشورة). وتجدر الإشارة إلى أنه مع تطور الورم يصبح الطحال تدريجيا (تضخم الطحال)، مع كميات متزايدة من العدلات.

تجدر الإشارة إلى أن TEN يتم إنشاؤها أيضا في نماذج أخرى من السرطان بما في ذلك كل من العفوية (MMTV-PyMT وMMTV-Wnt1 الأورام الثديية وك رأس أورام الرئة مدفوعة) وحقن (AT-3 (MMTV-PyMT) وسرطان الثدي E0771 الخلايا، LLC ويس خلايا سرطان الرئة وخلايا سرطان الجلد B16-F10). ومع ذلك، فإن مدى تعبئة العدلات في هذه تومأو نماذج أقل بكثير من الفئران 4T1 تلقيح، تصل إلى 5-10 × 10 6 العدلات في 1 ملليتر دم بعد 3 أسابيع.

Protocol

ويتم شراء 5-7 أسابيع من العمر BALB / ج الفئران من هارلان (إسرائيل): الحيوانات. وتمت الموافقة على جميع التجارب التي تنطوي على الحيوانات من قبل لجنة الجامعة العبرية المؤسسي رعاية الحيوان واستخدام (IACUC). العينات البشرية: جمع الدم من مرضى السرطان والمتطوعين الأصحاء وافق عليها …

Representative Results

في دراسة حديثة حددنا وظيفة مضادة للالمتنقل للالعدلات 6. العدلات من الفئران الحاملة للورم تكتسب النمط الظاهري السامة للخلايا ولها القدرة على قتل الخلايا السرطانية 6. هذا هو على النقيض من العدلات من الفئران السذاجة التي ليس لها تأثير مضاد للورم كبير 6….

Discussion

العدلات هي الأكثر وفرة من كل خلايا الدم البيضاء وهي أول المستجيبين في حالات العدوى والالتهابات. على هذا النحو، فهي حساسة للغاية لمنبهات خارجية ويتم تفعيلها بسهولة. بالإضافة إلى ذلك، العدلات لها قصيرة جدا نصف العمر ودوران سريع. معا، وهذه الخصائص تثير عدة صعوبات في ال?…

Divulgations

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

ويدعم ZG من المنح المقدمة من برنامج I-CORE من مؤسسة العلوم إسرائيل (منحة رقم 41/11)، ومؤسسة Abisch-فرنكل، والثقة Rosetrees، ومؤسسة أبحاث السرطان إسرائيل (ICRF – جائزة التطوير المهني للبحوث) و قلق المؤسسة. ويدعم ZGF من المنح المقدمة من مؤسسة إسرائيل لأبحاث السرطان (ICRF – جائزة التطوير المهني للبحوث)، كبير العلماء في وزارة الصحة الإسرائيلية وجمعية الرئة إسرائيل.

Materials

CELL LINES
Mouse 4T1 breast carcinoma cells ADCC CRL-2539 Growth medium: DMEM + 10 % heat-inactivated FBS
PLASTIC WARES AND EQUIPMENTS
24-well Tissue Culture Plate  Falcon 353047 Sterile
100 mm Tissue Culture Plate  Corning 430167 Sterile
25 cm2 Tissue Culture Flask Nunc 156340 Sterile
90 mm Bacterial Grade Culture Dish  Miniplast, Ein Shemer, Israel 20090-01-017 Sterile
15 ml Sterile Conical Centrifuge Tube  Miniplast, Ein Shemer, Israel 835015-40-111 Sterile
50 ml Sterile Conical Centrifuge Tube  Miniplast, Ein Shemer, Israel 835050-21-111 Sterile
Falcon 12×75 mm Round-Bottom Polystyrene Tube  Becton Dickinson 352058 Sterile
Millicell 24 Migration Plate with a pore size of 5μm  Merck Millipore PSMT010R1 Sterile
White 96-Flat-Bottom Well Plate  Costar 3917 Sterile
Cell Strainer (40 mm)  BD Falcon 352340 Sterile
20G 1.5" Needle BD Microlance 3  301300 Sterile
23G 1" Needle  BD Microlance 4 300800 Sterile
25Gx5/8" Needle  BD Microlance 5 300600 Sterile
0.3 ml Syringe with a 30Gx8mm Needle BD Micro-Fine Plus Demi 320829 Sterile
9 mm Clips  BD, AutoClip  427631 Sterile
EasySep Magnet  STEMCELL Technologies 18000
MACS LS Separation Column  Miltenyi Biotech 130-042-201 Sterile
MidiMACS Separator Magnet Miltenyi Biotech 130-042-302
MACS MultiStand Miltenyi Biotech 130-042-303
Microscope Glass Slide  Menzel-Gläser Superfrost  Plus Thermo J1800AMNZ
Orbital Shaker  Sky line, ELMI S-3.02.10L
Plate Reader  TECAN InfiniteF200Pro
POWDER
Bovine serum albumin (BSA), fraction V Sigma A7906
Bromodeoxyuridine (BrdU)  BD Pharmingen 550891 Sterile
CFSE (5-(and 6-)-Carboxyfluorescein diacetate, succinimidyl ester) Molecular Probes C1157
Dextran T500 Sigma 31392
Heparin sodium salt from porcine intestinal mucosa  Sigma H3149
Sodium azide (NaN3) Sigma S8032 Highly toxic, handle with care
Thioglycollate powder  Difco 225650
Zymosan A Sigma Z4250
MEDIA AND SUPPLEMENTS
Dulbecco's modified Eagle medium (DMEM) Sigma D5796 Sterile
Opti-MEM® I reduced serum medium  Life Technologies 31985062 Sterile
Roswell Park Memorial Institute (RPMI)-1640 medium Sigma R8758 Sterile
Foetal bovine serum (FBS), heat-inactivated Sigma F9665 Sterile
L-Glutamine Biological Industries, Beth HaEmek, Israel 03-020-1A Sterile
Sodium pyruvate Biological Industries, Beth HaEmek, Israel 03-042-1B Sterile
Penicillin Streptomycin x1000 solution Biological Industries, Beth HaEmek, Israel 03-031-5 Sterile
Phosphate buffered saline (PBS) without Mg2+ and Ca2+  Biological Industries, Beth HaEmek, Israel 02-023-1 Sterile
PBSx10 without Ca2+ and Mg2+  Biological Industries, Beth HaEmek, Israel 02-023-5A Sterile
HPLC grade water  J.T. Baker 4218-03 Autoclave
SOLUTIONS
ACK – Ammonium-Chloride-Potassium Life Technologies  A10492-01
Bromodeoxyuridine (BrdU) solution (10 mg/ml) in PBS Dissolve 10 mg of BrdU in 1 ml PBS and sterile filter.
CFSE, 5 mM in DMSO Dissolve 2.8 mg of CFSE in 1 ml DMSO. Divide into 10 ml aliquots in sterile 200 ml tubes and store in the dark at -20oC.
Eosin Y solution Sigma HT110-2-32
Hanks' balanced salt solution Biological Industries, Beth HaEmek, Israel 02-016-1A Sterile
Heparin, 20 mg/ml in PBS Dissolve 100 mg Heparin in 5 ml sterile PBS, and sterile filter through a 0.2 mm filter. 
Histopaque-1119  Sigma 11191 Sterile filter through a 0.2 mm filter.
Histopaque-1077  Sigma 10771 Sterile filter through a 0.2 mm filter.
 Luciferase cell culture lysis buffer x5 Promega E153A Dilute 1:5 in sterile water just before use.
Luciferase assay solution Promega E1501 Contains luciferase assay substrate powder (E151A) and luciferase assay buffer (E152A)
Mayer's Hematoxylin solution  Sigma MHS-32
PBS+0.5% BSA Dissolve 2.5g BSA in 500 ml PBS, and sterile filter through a 0.2 mm filter.
PBS+1% BSA Dissolve 1g BSA in 100 ml PBS, and sterile filter through a 0.2 mm filter.
5x PBS with 2.5% BSA                Dissolve 12.5g BSA in a mixture of 250 ml sterile HPLC-grade water                     and 250 ml PBSx10, and sterile filter through a 0.2 mm filter.
PBS containing 0.5% BSA and 2 mM EDTA         Dissolve 250 mg BSA in 50 ml sterile PBS  and add 200 ml of 0.5M EDTA pH 8.0, sterile filter through a 0.2 mm filter.
FACS buffer (PBS containing 0.5% BSA, 2 mM EDTA and 0.02% NaN3)              Dissolve 250 mg BSA in 50 ml sterile PBS  and add 200 ml of 0.5M EDTA pH 8.0 and 500 ml of 2% NaN3, sterile filter through a 0.2 mm filter.
Saline (0.9% NaCl) Dissolve 9 g NaCl in 1000 ml ddw, autoclave
0.2% NaCl solution Dissolve 2 g NaCl in 1000 ml ddw, autoclave
1.6% NaCl solution Dissolve 16 g NaCl in 1000 ml ddw, autoclave
2 % Sodium azide Dissolve 1g sodium azide in 50 ml sterile ddw, keep at 4oC. Highly toxic.
3% Thioglycollate solution                                        Dissolve 3 g of thioglycollate powder in 100 ml ddw.                                        Boil until solution becomes yellow and autoclave.
Trypan blue solution (0.4%) Sigma T8154 Dilute 1:10 in PBS to get a 0.04% solution.
Trypsin solution B  Biological Industries, Beth HaEmek, Israel 03-046-1 Sterile
1 mg/ml Zymosan A                    Resuspend 1 mg Zymosan A  in 1 ml sterile PBS in an Eppendorf tube.                            Vortex vigorously and incubate the tube at 37 oC for 30 min. Do not autoclave.            Prepare the solution freshly before use. 
KITS
EasySep PE selection kit STEMCELL Technologies 18557
EasySep PE selection cocktail  STEMCELL Technologies 18151
the EasySep magnetic nanoparticles  STEMCELL Technologies 18150
Anti-Ly6G mouse MicroBead Kit Miltenyi Biotec 130-092-332
EasySep Mouse Neutrophil Enrichment Kit STEMCELL Technologies 19762
EasySep Human Neutrophil Enrichment Kit STEMCELL Technologies 19257
FITC BrdU flow kit BD Pharmingen  559619
MACS Neutrophil isolation kit Miltenyi Biotec 130-097-658
Phagocytosis Assay Kit  Cayman Chemical Company  500290
ANTIBODIES
FcR blocking antibody  Biolegend 101302
Purified rat anti-Ly6G antibody  BD Pharmingen  551459 Clone 1A8
PE-conjugated rat anti-mouse Ly6G antibody  Biolegend 127608 Clone 1A8
FITC-conjugated rat anti-mouse Ly6G BD Pharmingen  551460 Clone 1A8
PerCP-Cy5.5 rat anti-mouse Ly6G  TONBO Biosciences 65-1276 Clone 1A8
violetFluor 450-conjugated rat anti-mouse Ly6G  TONBO Biosciences 75-1276 Clone 1A8
FITC-conjugated rat anti-mouse CD11b BD Pharmingen  553310 Clone M1/70
FITC-conjugated rat anti-mouse Ly-6G and Ly-6C (GR-1) BD Pharmingen  553127 Clone RB6-8C5
PE-conjugated rat anti-mouse CD45 BD Pharmingen  553081 Clone 30-F11
FITC-conjugated rat anti-mouse F4/80  Abcam ab60343 Clone BM8
FITC-conjugated mouse anti-human CD66b  Biolegend 305103 Clone G10F5
Purified rat isotype control antibody (IgG2a, k)  BD Pharmingen  553927 Clone R35-95
LEAF purified Armenian hamster anti-mouse CD3e antibody BioLegend 100314 Clone 145-2C11

References

  1. Tangye, S. G., Brink, R. A helping hand from neutrophils in T cell-independent antibody responses. Nat Immunol. 13, 111-113 (2012).
  2. Mantovani, A., Cassatella, M. A., Costantini, C., Jaillon, S. Neutrophils in the activation and regulation of innate and adaptive immunity. Nat Rev Immunol. 11, 519-531 (2011).
  3. Pruijt, J. F., et al. Neutrophils are indispensable for hematopoietic stem cell mobilization induced by interleukin-8 in mice. Proc Natl Acad Sci U S A. 99, 6228-6233 (2002).
  4. Tecchio, C., Cassatella, M. A. Neutrophil-derived cytokines involved in physiological and pathological angiogenesis. Chem Immunol Allergy. 99, 123-137 (2014).
  5. Liu, M., et al. Formylpeptide receptors mediate rapid neutrophil mobilization to accelerate wound healing. PloS one. 9, e90613 (2014).
  6. Granot, Z., et al. Tumor entrained neutrophils inhibit seeding in the premetastatic lung. Cancer Cell. 20, 300-314 (2011).
  7. Sionov, R. V., Fridlender, Z. G., Granot, Z. The Multifaceted Roles Neutrophils Play in the Tumor Microenvironment. Cancer Microenviron. , (2014).
  8. Borregaard, N. Neutrophils, from marrow to microbes. Immunity. 33, 657-670 (2010).
  9. Yamashiro, S., et al. Phenotypic and functional change of cytokine-activated neutrophils: inflammatory neutrophils are heterogeneous and enhance adaptive immune responses. J Leukoc Biol. 69, 698-704 (2001).
  10. Futosi, K., Fodor, S., Mocsai, A. Neutrophil cell surface receptors and their intracellular signal transduction pathways. Int Immunopharmacol. 17, 638-650 (2013).
  11. Scapini, P., Cassatella, M. A. Social networking of human neutrophils within the immune system. Blood. 124, 710-719 (2014).
  12. Fridlender, Z. G., et al. Transcriptomic analysis comparing tumor-associated neutrophils with granulocytic myeloid-derived suppressor cells and normal neutrophils. PloS one. 7, e31524 (2012).
  13. Fridlender, Z. G., et al. Polarization of tumor-associated neutrophil phenotype by TGF-beta: ‘N1’ versus ‘N2. TAN. Cancer Cell. 16, 183-194 (2009).
  14. Talmadge, J. E., Gabrilovich, D. I. History of myeloid-derived suppressor cells. Nat Rev Cancer. 13, 739-752 (2013).
  15. Youn, J. I., Nagaraj, S., Collazo, M., Gabrilovich, D. I. Subsets of myeloid-derived suppressor cells in tumor-bearing mice. J Immunol. 181, 5791-5802 (2008).
  16. Choi, J., et al. CD15+/CD16low human granulocytes from terminal cancer patients: granulocytic myeloid-derived suppressor cells that have suppressive function. Tumour Biol. 33, 121-129 (2012).
  17. Brandau, S., et al. Myeloid-derived suppressor cells in the peripheral blood of cancer patients contain a subset of immature neutrophils with impaired migratory properties. J Leukoc Biol. 89, 311-317 (2011).
  18. Pillay, J., Tak, T., Kamp, V. M., Koenderman, L. Immune suppression by neutrophils and granulocytic myeloid-derived suppressor cells: similarities and differences. Cell Mol Life Sci. 70, 3813-3827 (2013).
  19. Lopez-Lago, M. A., et al. Neutrophil chemokines secreted by tumor cells mount a lung antimetastatic response during renal cell carcinoma progression. Oncogene. 32, 1752-1760 (2013).
  20. Boxio, R., Bossenmeyer-Pourie, C., Steinckwich, N., Dournon, C., Nusse, O. Mouse bone marrow contains large numbers of functionally competent neutrophils. J Leukoc Biol. 75, 604-611 (2004).
  21. Sagiv, J., et al. Phenotypic Diversity and Plasticity in Circulating Neutrophil Subpopulations in Cancer. Cell Reports. , (2015).

Play Video

Citer Cet Article
Sionov, R. V., Assi, S., Gershkovitz, M., Sagiv, J. Y., Polyansky, L., Mishalian, I., Fridlender, Z. G., Granot, Z. Isolation and Characterization of Neutrophils with Anti-Tumor Properties. J. Vis. Exp. (100), e52933, doi:10.3791/52933 (2015).

View Video