Isolierung und Charakterisierung von Neutrophilen mit Anti-Tumor-Eigenschaften
Summary
Neutrophils play an important role not only in host defense against invading microorganisms, but are also involved in the immune surveillance of tumor cells. Here, we describe techniques related to the isolation of neutrophils with anti-tumor properties and methods for monitoring anti-tumor neutrophil function in vitro and in vivo.
Abstract
Neutrophile, die häufigste aller weißen Blutzellen im menschlichen Kreislauf, spielen eine wichtige Rolle bei der Verteidigung des Wirts gegen eindringende Mikroorganismen. Außerdem spielen die Neutrophilen eine zentrale Rolle bei der Immunüberwachung von Tumorzellen. Sie haben die Fähigkeit, Tumorzellen entweder durch eine Zelle kontaktabhängige Mechanismus mit Wasserstoffperoxid oder durch antikörperabhängige zellvermittelte Zytotoxizität (ADCC) zu erkennen und zu induzieren Tumorzelltod. Neutrophilen mit Antitumor-Aktivität können aus dem peripheren Blut von Krebspatienten und von Tumor-tragenden Mäusen isoliert werden. Diese Neutrophilen werden als tumor mitgerissen Neutrophilen (TEN), um sie von Neutrophilen von gesunden Probanden oder naiven Mäusen, die keine signifikante Tumor zytotoxische Aktivität zeigen, zu unterscheiden. Verglichen mit anderen weißen Blutzellen, Neutrophilen zeigen unterschiedliche Auftriebs macht es möglich, eine> 98% rein neutrophilen Population, wenn sie einer Dichtegradientenzentrifugation unterworfen erhalten. Jedoch zusätzlichzum normalen hoher Dichte neutrophilen Population (HDN), bei Krebspatienten, in Tumor-tragenden Mäusen, wie auch unter chronischen Entzündungsbedingungen, deutlich niedriger Dichte neutrophile Populationen (LDN) sind in den Kreislauf. LDN Co-Reinigung mit der einkernigen Fraktion und von mononukleären Zellen mit entweder positiven oder negativen Selektionsstrategien getrennt werden. Sobald die Reinheit der isolierten Neutrophile durch Durchflusszytometrie bestimmt sind, können sie für die in vitro und in vivo funktionelle Assays verwendet werden. Wir beschreiben Methoden zur Überwachung der anti-Tumor-Aktivität von Neutrophilen, ihre Fähigkeit zu wandern und reaktive Sauerstoffspezies zu erzeugen, sowie die Überwachung ihrer phagozytischen Kapazität ex vivo. Wir beschreiben weitere Techniken, um die Neutrophile in vivo-Tracking zu kennzeichnen und ihre anti-metastatischen Kapazität in vivo zu bestimmen. Alle diese Techniken sind für das Verständnis, wie man zu erhalten und zu charakterisieren Neutrophilen mit Anti-Tumor-Funktion.
Introduction
Neutrophile wurden zunächst als die angeborene Immunzellen, die als erste Verteidigungslinie gegen eindringende Mikroorganismen dienen gekennzeichnet. Heute ist bekannt, dass Neutrophile haben weiterreichende Funktionen, die in Montage adaptive Immunantwort gegen fremde Antigene 1,2, Regulierung der Hämatopoese 3, 4 Angiogenese und Wundheilung 5 beteiligt. Zusätzlich kann Neutrophilen Tumorwachstum und Metastasen Progression beeinflussen aufgrund ihres pro- und anti-Tumor-Aktivitäten 6,7. Neutrophile werden durch einen polymorphen segmentierten Kern gekennzeichnet (daher bezeichnet polymorphkernigen (PMN) Leukozyten) und enthalten mindestens drei verschiedene Unterklassen von Granulat sowie Sekretvesikel 8 (1A-C).
Neutrophile besitzen eine hohe phagozytische Kapazität und NADPH-Oxidase-Aktivität kritisch für Mikrobenentfernung und sezernieren eine Vielzahl von Chemokinen wichtig für zuminTraktions zusätzlicher Neutrophilen und anderen Immunzellen an den Ort der Entzündung 8,9. Neutrophile werden durch die Expression einer großen Menge von Oberflächenrezeptoren einschließlich Toll-like Rezeptoren (TLR), dadurch gekennzeichnet, C-Typ-Lektin-Rezeptoren (CLRs), Komplement-Rezeptor 3 (CD11b / CD18) und anderen Adhäsionsmolekülen (zB L-Selectin, LFA-1, VLA-4 und carcinoembryonales Antigen bezogenen Zelladhäsionsmolekül 3 (CEACAM3 / CD66b)), Chemokinrezeptoren (beispielsweise CXCR1, CXCR2, CCR1, CCR2) Chemoattraktans-Rezeptoren (zB PAFR LTB 4 R und C5aR) Zytokin-Rezeptoren (zB G-CSFR, IL-1R, IL-4R, IL-12R, IL-18R, TNFR), Formyl-Peptid-Rezeptoren (zB FPR1-3) und Fc-Rezeptoren (zB CD16 (FcyRIII ), CD32 (FcyRII) und CD64 (FcyRI) 10. Bei Mäusen sind Neutrophile in der Regel als CD11b + Ly6G + identifiziert, wohingegen menschlichen Neutrophilen werden mit den CD11b, CD15, CD16 und CD66b Leukozyten-Marker identifiziert. Es ist auch allgemein akzeptiert, um die Granulat Proteine Myeloperoxidase (MPO) und Neutrophilen-Elastase (NE) zum Nachweis von Neutrophilen im Gewebe zu färben.
Es ist noch unklar, ob die verschiedenen Funktionen der Neutrophilen von der gleichen Zelle oder mit verschiedenen Zellunterpopulationen vermittelt. Akkumulieren Daten deuten auf die Anwesenheit eines heterogenen Neutrophilen-Population, die ein hohes Maß an Plastizität durch proinflammatorische Stimuli und der Mikroumgebung 11,12 betroffen aufweist. Fridlender et al. 13 haben grob unterteilt die Neutrophilen in Krebs in zwei große Teilpopulationen genannt N1 mit Anti-Tumor-Eigenschaften und N2 mit pro-Tumor-Eigenschaften. Bei Krebs, wie auch bei chronischen Entzündungen, gibt es einen zusätzlichen Subpopulation granulocytic myeloische-Suppressorzellen (G-MDSC), die T-Zellreaktionen zu unterdrücken 14 zusammengesetzt ist. G-MDSCs gelten als unreifen myeloischen Zellen, gekennzeichnet durch eine CD11b + Ly6C seinNieder Ly6G hallo Phänotyp bei Mäusen 15, während mit einem CD15 + / CD16 niedrig Phänotyp in humanen 16. G-MDSCs auszudrücken höhere Arginase und Myeloperoxidase, während niedrigere Zytokine und Chemokine als normal zirkulierenden Neutrophilen. Sie sind weniger phagozytischen und Zugvögel, aber produzieren höheren ROS 15,17,18. In der vorliegenden Arbeit werden wir einige grundlegende Methoden zur Isolierung und Charakterisierung von Neutrophilen mit Anti-Tumor-Eigenschaften zu beschreiben.
Während Neutrophile bilden die größte Bevölkerung aller weißen Blutkörperchen im menschlichen Kreislauf (45 – 70%; 1800 – 6000 / ul), bei Mäusen, unter normalen Bedingungen, sie sind eher spärlich (10-15%; 300-500 / ul ). Die Erhöhungen Neutrophilenzahl fest auf Entzündung und gelegentlich bei Krebs, die eine chronische Entzündung 7 stellt. Neutrophile entwickeln sich aus multipotenten myeloischen Vorläufer gemeinsamen (CMP) cells im Knochenmark, durch einen Differenzierungsprozess vorbei an den Stufen der Myeloblasten (MB), Promyelozyten (PM), Myelozyten (MC), Metamyelozyten (MM) und Bandzellen (BC) 8. Die reifen, post-mitotischen Neutrophile innerhalb des Knochenmarks für 4 bleiben – 7 Tage, bevor sie in den Kreislauf 8 freigegeben. Neutrophilen-Umsatz im Blut ist in der Regel eine schnelle mit einer mittleren Halbwertszeit von 6 bis 12 Stunden, die unter entzündlichen Bedingungen verlängert werden kann. Nicht-stimulierten Neutrophilen haben anti-tumorigene Aktivität, eine Funktion, die durch Aussetzen der naiven Neutrophilen an der Chemokine IL-8 (CXCL2), CCL2, CCL5 und CXCL5 6,19 oder künstlich erworben werden können, indem sie an den Phorbolester Phorbol 12 begrenzt -myristat-13-acetat (PMA) 6.
Die kurze Halbwertszeit von Blut Neutrophilen zusammen mit der geringen Zahl der neutrophilen Granulozyten (~ 3-5 x 10 5) von 1 ml Blut eines naiven 6 erreicht – 8 Wochen alten Maus, haben es geschafftschwierig, die Funktion der zirkulierenden Neutrophilen Maus in vitro zu erforschen. Um diese Schwierigkeit zu überwinden, sind andere Quellen verwendet. Zum Beispiel kann eine große Anzahl von Neutrophilen aus dem Knochenmark 20 oder das Peritoneum nach der Induktion der Entzündung steril erhalten werden (beispielsweise nach intraperitonealer Injektion von Thioglykolat-Bouillon oder Zymosan A). Es sei darauf hingewiesen, daß Neutrophile von der Peritonealhöhle erhalten keine anti-tumorigene Aktivität (unveröffentlichte Beobachtung) auszuüben.
. Granot et al 6 beobachtet, dass BALB / c Mäusen orthotop mit der Maus 4T1-Brustkarzinom-Zelllinie beimpft entwickeln Neutrophilie der mit Tumorprogression 6 (2A) verschärft, so dass 20-40000000 Blutneutrophilen leicht von 1 ml Blut isoliert werden 3-4 Wochen nach der Tumor-Inokulation. Diese Neutrophilen haben Anti-Tumor-Aktivitäten erworben und wurden entsprechend coi gewesenNed tumor mitgerissen Neutrophilen (TEN), um sie einem naiven Neutrophilen 6 (2B) unterscheiden. Während hoher Dichte Neutrophilen (HDN, 1A) sind hoch anti-tumorigenen niedriger Dichte Neutrophilen (LDN, 1B) im Rahmen von Krebs erzeugt nicht 21. Auch hoher Dichte Neutrophile aus dem Knochenmark und der Milz von Tumor-tragenden Mäusen anti-Tumor-Aktivität (unveröffentlichte Daten). Es sollte beachtet werden, dass bei der Tumorprogression die Milz allmählich vergrößert (Splenomegalie) mit steigenden Mengen an Neutrophilen.
Es sollte beachtet werden, dass TEN werden auch in anderen Modellen von Krebs, einschließlich sowohl spontane (MMTV-PyMT und MMTV-Wnt1 Brusttumoren und K-ras angetrieben Lungentumoren) erzeugt und injiziert (AT-3 (MMTV-PyMT) und E0771 Mammakarzinom werden Zellen, LLC Lewis-Lungenkarzinom-Zellen und B16-F10-Melanomzellen). Allerdings ist der Umfang der Neutrophilen-Mobilisierung in diese tumoder Modelle ist weit weniger als der 4T1-inokulierten Mäusen erreichte 5-10 x 10 6 Neutrophile in 1 ml Blut nach 3 Wochen.
Protocol
Representative Results
Discussion
Neutrophile sind die häufigsten aller weißen Blutzellen und die Ersthelfer bei Infektionen und Entzündungen. Als solche sind sie sehr empfindlich für externe Signale sind und leicht aktiviert. Darüber hinaus haben Neutrophilen eine sehr kurze Halbwertszeit und einen schnellen Umsatz. Zusammen bilden diese Merkmale heben einige Schwierigkeiten in der Arbeit mit Neutrophilen, so dass einzigartige experimentelle Strategien erforderlich sind. Beispielsweise gibt es mehrere Neutrophilen Reinigungsstrategien, die jeweils…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
ZG wird durch Zuschüsse aus dem I-CORE-Programm der Israel Science Foundation (Grant No 41/11) unterstützt, die Abisch-Frenkel-Stiftung, die Rosetrees Trust, die Israel Cancer Research Foundation (ICRF – Forschung Career Development Award) und die CONCERN Fundament. ZGF wird durch Zuschüsse aus dem Israel Cancer Research Foundation (ICRF – Forschung Career Development Award) unterstützt, Chief Scientist des israelischen Gesundheitsministerium und dem Israel Lung Association.
Materials
| CELL LINES | |||
| Mouse 4T1 breast carcinoma cells | ADCC | CRL-2539 | Growth medium: DMEM + 10 % heat-inactivated FBS |
| PLASTIC WARES AND EQUIPMENTS | |||
| 24-well Tissue Culture Plate | Falcon | 353047 | Sterile |
| 100 mm Tissue Culture Plate | Corning | 430167 | Sterile |
| 25 cm2 Tissue Culture Flask | Nunc | 156340 | Sterile |
| 90 mm Bacterial Grade Culture Dish | Miniplast, Ein Shemer, Israel | 20090-01-017 | Sterile |
| 15 ml Sterile Conical Centrifuge Tube | Miniplast, Ein Shemer, Israel | 835015-40-111 | Sterile |
| 50 ml Sterile Conical Centrifuge Tube | Miniplast, Ein Shemer, Israel | 835050-21-111 | Sterile |
| Falcon 12×75 mm Round-Bottom Polystyrene Tube | Becton Dickinson | 352058 | Sterile |
| Millicell 24 Migration Plate with a pore size of 5μm | Merck Millipore | PSMT010R1 | Sterile |
| White 96-Flat-Bottom Well Plate | Costar | 3917 | Sterile |
| Cell Strainer (40 mm) | BD Falcon | 352340 | Sterile |
| 20G 1.5" Needle | BD Microlance 3 | 301300 | Sterile |
| 23G 1" Needle | BD Microlance 4 | 300800 | Sterile |
| 25Gx5/8" Needle | BD Microlance 5 | 300600 | Sterile |
| 0.3 ml Syringe with a 30Gx8mm Needle | BD Micro-Fine Plus Demi | 320829 | Sterile |
| 9 mm Clips | BD, AutoClip | 427631 | Sterile |
| EasySep Magnet | STEMCELL Technologies | 18000 | |
| MACS LS Separation Column | Miltenyi Biotech | 130-042-201 | Sterile |
| MidiMACS Separator Magnet | Miltenyi Biotech | 130-042-302 | |
| MACS MultiStand | Miltenyi Biotech | 130-042-303 | |
| Microscope Glass Slide | Menzel-Gläser Superfrost Plus Thermo | J1800AMNZ | |
| Orbital Shaker | Sky line, ELMI | S-3.02.10L | |
| Plate Reader | TECAN | InfiniteF200Pro | |
| POWDER | |||
| Bovine serum albumin (BSA), fraction V | Sigma | A7906 | |
| Bromodeoxyuridine (BrdU) | BD Pharmingen | 550891 | Sterile |
| CFSE (5-(and 6-)-Carboxyfluorescein diacetate, succinimidyl ester) | Molecular Probes | C1157 | |
| Dextran T500 | Sigma | 31392 | |
| Heparin sodium salt from porcine intestinal mucosa | Sigma | H3149 | |
| Sodium azide (NaN3) | Sigma | S8032 | Highly toxic, handle with care |
| Thioglycollate powder | Difco | 225650 | |
| Zymosan A | Sigma | Z4250 | |
| MEDIA AND SUPPLEMENTS | |||
| Dulbecco's modified Eagle medium (DMEM) | Sigma | D5796 | Sterile |
| Opti-MEM® I reduced serum medium | Life Technologies | 31985062 | Sterile |
| Roswell Park Memorial Institute (RPMI)-1640 medium | Sigma | R8758 | Sterile |
| Foetal bovine serum (FBS), heat-inactivated | Sigma | F9665 | Sterile |
| L-Glutamine | Biological Industries, Beth HaEmek, Israel | 03-020-1A | Sterile |
| Sodium pyruvate | Biological Industries, Beth HaEmek, Israel | 03-042-1B | Sterile |
| Penicillin Streptomycin x1000 solution | Biological Industries, Beth HaEmek, Israel | 03-031-5 | Sterile |
| Phosphate buffered saline (PBS) without Mg2+ and Ca2+ | Biological Industries, Beth HaEmek, Israel | 02-023-1 | Sterile |
| PBSx10 without Ca2+ and Mg2+ | Biological Industries, Beth HaEmek, Israel | 02-023-5A | Sterile |
| HPLC grade water | J.T. Baker | 4218-03 | Autoclave |
| SOLUTIONS | |||
| ACK – Ammonium-Chloride-Potassium | Life Technologies | A10492-01 | |
| Bromodeoxyuridine (BrdU) solution (10 mg/ml) in PBS | Dissolve 10 mg of BrdU in 1 ml PBS and sterile filter. | ||
| CFSE, 5 mM in DMSO | Dissolve 2.8 mg of CFSE in 1 ml DMSO. Divide into 10 ml aliquots in sterile 200 ml tubes and store in the dark at -20oC. | ||
| Eosin Y solution | Sigma | HT110-2-32 | |
| Hanks' balanced salt solution | Biological Industries, Beth HaEmek, Israel | 02-016-1A | Sterile |
| Heparin, 20 mg/ml in PBS | Dissolve 100 mg Heparin in 5 ml sterile PBS, and sterile filter through a 0.2 mm filter. | ||
| Histopaque-1119 | Sigma | 11191 | Sterile filter through a 0.2 mm filter. |
| Histopaque-1077 | Sigma | 10771 | Sterile filter through a 0.2 mm filter. |
| Luciferase cell culture lysis buffer x5 | Promega | E153A | Dilute 1:5 in sterile water just before use. |
| Luciferase assay solution | Promega | E1501 | Contains luciferase assay substrate powder (E151A) and luciferase assay buffer (E152A) |
| Mayer's Hematoxylin solution | Sigma | MHS-32 | |
| PBS+0.5% BSA | Dissolve 2.5g BSA in 500 ml PBS, and sterile filter through a 0.2 mm filter. | ||
| PBS+1% BSA | Dissolve 1g BSA in 100 ml PBS, and sterile filter through a 0.2 mm filter. | ||
| 5x PBS with 2.5% BSA | Dissolve 12.5g BSA in a mixture of 250 ml sterile HPLC-grade water and 250 ml PBSx10, and sterile filter through a 0.2 mm filter. | ||
| PBS containing 0.5% BSA and 2 mM EDTA | Dissolve 250 mg BSA in 50 ml sterile PBS and add 200 ml of 0.5M EDTA pH 8.0, sterile filter through a 0.2 mm filter. | ||
| FACS buffer (PBS containing 0.5% BSA, 2 mM EDTA and 0.02% NaN3) | Dissolve 250 mg BSA in 50 ml sterile PBS and add 200 ml of 0.5M EDTA pH 8.0 and 500 ml of 2% NaN3, sterile filter through a 0.2 mm filter. | ||
| Saline (0.9% NaCl) | Dissolve 9 g NaCl in 1000 ml ddw, autoclave | ||
| 0.2% NaCl solution | Dissolve 2 g NaCl in 1000 ml ddw, autoclave | ||
| 1.6% NaCl solution | Dissolve 16 g NaCl in 1000 ml ddw, autoclave | ||
| 2 % Sodium azide | Dissolve 1g sodium azide in 50 ml sterile ddw, keep at 4oC. Highly toxic. | ||
| 3% Thioglycollate solution | Dissolve 3 g of thioglycollate powder in 100 ml ddw. Boil until solution becomes yellow and autoclave. | ||
| Trypan blue solution (0.4%) | Sigma | T8154 | Dilute 1:10 in PBS to get a 0.04% solution. |
| Trypsin solution B | Biological Industries, Beth HaEmek, Israel | 03-046-1 | Sterile |
| 1 mg/ml Zymosan A | Resuspend 1 mg Zymosan A in 1 ml sterile PBS in an Eppendorf tube. Vortex vigorously and incubate the tube at 37 oC for 30 min. Do not autoclave. Prepare the solution freshly before use. | ||
| KITS | |||
| EasySep PE selection kit | STEMCELL Technologies | 18557 | |
| EasySep PE selection cocktail | STEMCELL Technologies | 18151 | |
| the EasySep magnetic nanoparticles | STEMCELL Technologies | 18150 | |
| Anti-Ly6G mouse MicroBead Kit | Miltenyi Biotec | 130-092-332 | |
| EasySep Mouse Neutrophil Enrichment Kit | STEMCELL Technologies | 19762 | |
| EasySep Human Neutrophil Enrichment Kit | STEMCELL Technologies | 19257 | |
| FITC BrdU flow kit | BD Pharmingen | 559619 | |
| MACS Neutrophil isolation kit | Miltenyi Biotec | 130-097-658 | |
| Phagocytosis Assay Kit | Cayman Chemical Company | 500290 | |
| ANTIBODIES | |||
| FcR blocking antibody | Biolegend | 101302 | |
| Purified rat anti-Ly6G antibody | BD Pharmingen | 551459 | Clone 1A8 |
| PE-conjugated rat anti-mouse Ly6G antibody | Biolegend | 127608 | Clone 1A8 |
| FITC-conjugated rat anti-mouse Ly6G | BD Pharmingen | 551460 | Clone 1A8 |
| PerCP-Cy5.5 rat anti-mouse Ly6G | TONBO Biosciences | 65-1276 | Clone 1A8 |
| violetFluor 450-conjugated rat anti-mouse Ly6G | TONBO Biosciences | 75-1276 | Clone 1A8 |
| FITC-conjugated rat anti-mouse CD11b | BD Pharmingen | 553310 | Clone M1/70 |
| FITC-conjugated rat anti-mouse Ly-6G and Ly-6C (GR-1) | BD Pharmingen | 553127 | Clone RB6-8C5 |
| PE-conjugated rat anti-mouse CD45 | BD Pharmingen | 553081 | Clone 30-F11 |
| FITC-conjugated rat anti-mouse F4/80 | Abcam | ab60343 | Clone BM8 |
| FITC-conjugated mouse anti-human CD66b | Biolegend | 305103 | Clone G10F5 |
| Purified rat isotype control antibody (IgG2a, k) | BD Pharmingen | 553927 | Clone R35-95 |
| LEAF purified Armenian hamster anti-mouse CD3e antibody | BioLegend | 100314 | Clone 145-2C11 |
References
- Tangye, S. G., Brink, R. A helping hand from neutrophils in T cell-independent antibody responses. Nat Immunol. 13, 111-113 (2012).
- Mantovani, A., Cassatella, M. A., Costantini, C., Jaillon, S. Neutrophils in the activation and regulation of innate and adaptive immunity. Nat Rev Immunol. 11, 519-531 (2011).
- Pruijt, J. F., et al. Neutrophils are indispensable for hematopoietic stem cell mobilization induced by interleukin-8 in mice. Proc Natl Acad Sci U S A. 99, 6228-6233 (2002).
- Tecchio, C., Cassatella, M. A. Neutrophil-derived cytokines involved in physiological and pathological angiogenesis. Chem Immunol Allergy. 99, 123-137 (2014).
- Liu, M., et al. Formylpeptide receptors mediate rapid neutrophil mobilization to accelerate wound healing. PloS one. 9, e90613 (2014).
- Granot, Z., et al. Tumor entrained neutrophils inhibit seeding in the premetastatic lung. Cancer Cell. 20, 300-314 (2011).
- Sionov, R. V., Fridlender, Z. G., Granot, Z. The Multifaceted Roles Neutrophils Play in the Tumor Microenvironment. Cancer Microenviron. , (2014).
- Borregaard, N. Neutrophils, from marrow to microbes. Immunity. 33, 657-670 (2010).
- Yamashiro, S., et al. Phenotypic and functional change of cytokine-activated neutrophils: inflammatory neutrophils are heterogeneous and enhance adaptive immune responses. J Leukoc Biol. 69, 698-704 (2001).
- Futosi, K., Fodor, S., Mocsai, A. Neutrophil cell surface receptors and their intracellular signal transduction pathways. Int Immunopharmacol. 17, 638-650 (2013).
- Scapini, P., Cassatella, M. A. Social networking of human neutrophils within the immune system. Blood. 124, 710-719 (2014).
- Fridlender, Z. G., et al. Transcriptomic analysis comparing tumor-associated neutrophils with granulocytic myeloid-derived suppressor cells and normal neutrophils. PloS one. 7, e31524 (2012).
- Fridlender, Z. G., et al. Polarization of tumor-associated neutrophil phenotype by TGF-beta: ‘N1’ versus ‘N2. TAN. Cancer Cell. 16, 183-194 (2009).
- Talmadge, J. E., Gabrilovich, D. I. History of myeloid-derived suppressor cells. Nat Rev Cancer. 13, 739-752 (2013).
- Youn, J. I., Nagaraj, S., Collazo, M., Gabrilovich, D. I. Subsets of myeloid-derived suppressor cells in tumor-bearing mice. J Immunol. 181, 5791-5802 (2008).
- Choi, J., et al. CD15+/CD16low human granulocytes from terminal cancer patients: granulocytic myeloid-derived suppressor cells that have suppressive function. Tumour Biol. 33, 121-129 (2012).
- Brandau, S., et al. Myeloid-derived suppressor cells in the peripheral blood of cancer patients contain a subset of immature neutrophils with impaired migratory properties. J Leukoc Biol. 89, 311-317 (2011).
- Pillay, J., Tak, T., Kamp, V. M., Koenderman, L. Immune suppression by neutrophils and granulocytic myeloid-derived suppressor cells: similarities and differences. Cell Mol Life Sci. 70, 3813-3827 (2013).
- Lopez-Lago, M. A., et al. Neutrophil chemokines secreted by tumor cells mount a lung antimetastatic response during renal cell carcinoma progression. Oncogene. 32, 1752-1760 (2013).
- Boxio, R., Bossenmeyer-Pourie, C., Steinckwich, N., Dournon, C., Nusse, O. Mouse bone marrow contains large numbers of functionally competent neutrophils. J Leukoc Biol. 75, 604-611 (2004).
- Sagiv, J., et al. Phenotypic Diversity and Plasticity in Circulating Neutrophil Subpopulations in Cancer. Cell Reports. , (2015).
