Выделение и характеристика нейтрофилов с Противоопухолевые свойства

Нейтрофилы вначале были охарактеризованы как врожденных иммунных клеток, которые служат в качестве первого линия обороны против вторжения микроорганизмов. Сегодня известно, что нейтрофилы имеют более далеко идущие функции, будучи вовлеченным в монтаже адаптивного иммунного ответа против чужеродных антигенов ^1,2, регулирующих кроветворение ^{3, 4} и ангиогенез ранозаживляющее ^5. Кроме того, нейтрофилы могут повлиять на рост опухоли и метастазов прогрессирование в силу своих сторонников и противоопухолевых деятельности ^6,7. Нейтрофилы характеризуются полиморфной сегментированные ядра (следовательно, называют полиморфно (PMN лейкоцитов)) и содержат по крайней мере три различных подклассов гранул, а также секреторные везикулы ⁸ (1А-C).

Нейтрофилы обладают высокой фагоцитарной способности и высокой активности НАДФН-оксидазы критической для устранения микробной и секретируют широкий спектр важных хемокинов, по крайнейтяги дополнительных нейтрофилов и других иммунных клеток к месту воспаления ^8,9. Нейтрофилы характеризуются экспрессии большого количества поверхностных рецепторов, включая Toll-подобных рецепторов (TLR,), С-типа рецепторов лектинов (Clrs), дополняют рецептор 3 (CD11b / CD18) и другие адгезивные молекулы (например, L-селектина, LFA-1, VLA-4 и карциноэмбриональный антиген-связанных молекулы клеточной адгезии 3 (CEACAM3 / CD66b)), рецепторы хемокинов (например, CXCR1, CXCR2, CCR1, CCR2), хемоаттрактант рецепторы (например, PAFR, LTB ₄ R и C5aR) , рецепторов цитокинов (например, G-ЧСФР, ИЛ-1R, IL-4R, IL-12R, IL-18R, ФНО), формил-пептид рецепторов (например, FPR1-3), и Fc рецепторы (например, CD16 (FcγRIII ), CD32 (FcγRII) и CD64 (FcγRI) ^10. У мышей, нейтрофилов, как правило, определены как CD11b ⁺ Ly6G ^+, тогда как нейтрофилы человека, идентифицируют с использованием лейкоцитов маркеры CD11b, CD15, CD16 и CD66b, Также общепринятым для окрашивания для миелопероксидазы белков гранул (МРО) и эластазы нейтрофилов (NE) для обнаружения нейтрофилов в тканях.

Он по-прежнему неясно, будет ли разнообразные функции нейтрофилов при посредничестве той же клетке или отдельных клеток субпопуляций. Накопление данные позволяют предположить, на наличие гетерогенной популяции нейтрофилов, который проявляет высокую степень пластичности, пострадавших от провоспалительных стимулов и микросреды ^11,12. Фридлендер и др. ¹³ грубо разделить нейтрофилов в рак в двух основных групп населения называют N1 с противоопухолевыми свойствами и N2 со свойствами про-опухолей. При раке, а также при хроническом воспалении, имеется дополнительный субпопуляция состоит из гранулоцитарного миелоидных полученных клеток-супрессоров (G-MDSCs), которые подавляют Т-клеточные ответы ^14. G-MDSCs считаются незрелые миелоидные клетки характеризуются CD11b ⁺ Ly6C^низкий Ly6G ^привет фенотип у мышей ^15, имея CD15 ⁺ CD16 / ^низкий фенотип человека ^16. Г-MDSCs выразить более высокие уровни аргиназой и миелопероксидазы, а более низкие уровни цитокинов и хемокинов, чем нормальных циркулирующих нейтрофилов. Они меньше фагоцитарной и миграционной, но дают более высокие уровни АФК ^15,17,18. В настоящей работе мы опишем некоторые основные методики выделения и характеристики нейтрофилов с противоопухолевыми свойствами.

В то время как нейтрофилы составляют самое многочисленное население всех белых кровяных клеток в кровотоке человека (45 – 70%; 1800 – 6000 / мкл), у мышей, при нормальных условиях, они довольно редкие (10 – 15%; 300 – 500 / мкл ). Число нейтрофилов увеличивается неуклонно Upon воспаления, а иногда и в рак, который представляет собой состояние хронического воспаления ^7. Нейтрофилы развиваются из общего миелоидного мультипотентны предшественника (CMP) CEзаполняет в костном мозге, с помощью процесса, дифференциации, проходящие этапы миелобласты (МБ), промиелоциты (ТЧ), миелоциты (MC), метамиелоцитов (мм) и диапазона ячеек (BC) ^8. Зрелые, постмитотические нейтрофилы могут оставаться в костном мозге в течение 4 – 7 дней, прежде чем они будут освобождены в обращении ^8. Оборот нейтрофилов в крови, как правило, быстрое со средним периодом полураспада 6 – 12 часов, который может быть продлен при воспалительных процессах. Нестимулированные нейтрофилы имеют ограниченный анти-онкогенного активности, особенность, которая может быть приобретена подвергая наивные нейтрофилов к хемокинов IL-8 (CXCL2), CCL2, CCL5 и CXCL5 ^6,19 или искусственно, подвергая их к форбол эфира форбол 12 -myristate 13-ацетата (РМА) ^6.

Короткий период полувыведения из крови нейтрофилов вместе с низким числом нейтрофилов (~ 3 – 5 х 10 ⁵⁾ достигается с 1 мл крови наивного 6 – 8 недель старой мыши, сделали этотрудно исследовать функцию циркулирующих нейтрофилов мыши в пробирке. Чтобы преодолеть эту трудность, другие источники были использованы. Например, большое число нейтрофилов, могут быть получены из костного мозга ²⁰ или брюшины после индукции стерильного воспаления (например, после внутрибрюшинного введения тиогликолевой бульон или Зимозан А). Следует отметить, что нейтрофилы, полученные из брюшной полости не оказывает какого-либо анти-онкогенного активностью (неопубликованное наблюдение).

. Granot др ⁶ отмечено, что линии BALB / C мышей, инокулированных ортотопически с помощью мыши 4T1 молочной клеточной линии карциномы разработки нейтрофилию что усугубляет прогрессированию опухоли ⁶ (Фигура 2А), так что 20 – 40 миллионов нейтрофилов крови можно легко выделить из 1 мл крови 3 – 4 недели после прививки опухоли. Эти нейтрофилы приобрели противоопухолевой активностью, и, соответственно, был ИСПNED опухолевые захваченных нейтрофилы (ДЕСЯТЬ), для того, чтобы отличить их от наивных нейтрофилов ⁶ (рис 2b). В то время как нейтрофилы высокой плотности (СЗР, 1А) обладают высокой анти-онкогенными, нейтрофилы низкой плотности (LDN, рис 1б), генерируемые в контексте рака не ^21. Кроме того, высокой плотности нейтрофилы из костного мозга и селезенки мышей с опухолями имеют противоопухолевую активность (неопубликованные данные). Следует отметить, что прогрессированию опухоли селезенки становится постепенно увеличена (спленомегалия), с увеличением количества нейтрофилов.

Следует отметить, что десять также генерируются в других моделях рака, включая как спонтанных (MMTV-PyMT и MMTV-Wnt1 опухолей молочной железы и K-Ras приводом опухолей легких) и вводили (АТ-3 (MMTV-PyMT) и E0771 карциномы молочной железы клетки, ООО карциномы легкого Льюиса клетки и В16-F10, клетки меланомы). Тем не менее, степень мобилизации нейтрофилов в этих свою очередьили модели гораздо меньше, чем от 4T1-инокулированных мышей, достигая 5 – 10 х 10 ⁶ нейтрофилы в 1 мл крови через 3 недели.