Summary

Remendo Recordings Grampo de neurônios da retina do rato em um Preparação Slice Dark-adaptados

Published: September 12, 2010
doi:

Summary

Aqui nós descrevemos um procedimento para a geração de adaptação ao escuro fatias da retina do rato para gravações eletrofisiológicas.

Abstract

Nossa experiência visual é iniciada quando o pigmento visual em nossa fotorreceptores da retina absorve fótons de energia luminosa e inicia uma cascata de eventos intracelulares que levam ao encerramento do cíclica de nucleotídeo-gated canais na membrana da célula. A mudança resultante no potencial da membrana leva, por sua vez a redução na quantidade de liberação de neurotransmissores dos dois rod e terminais de cone sináptica. Para medir o quanto a mudança de luz evocada em fotorreceptoras potencial de membrana leva a atividade a jusante na retina, os cientistas fizeram gravações eletrofisiológicas das preparações fatia da retina para 1,2 décadas. No passado, essas fatias foram cortadas manualmente com uma lâmina de barbear no tecido da retina que é anexado ao papel de filtro; nos últimos anos um outro método de corte tem sido desenvolvida através do qual o tecido da retina é incorporado em agar baixa temperatura de gelificação e cortados em solução legal com um vibrando micrótomo 3,4. Esta preparação produz fatias da retina com menos danos superficiais e muito robusto respostas luz evocado. Aqui nós documento como esse procedimento pode ser feito sob a luz infravermelha para evitar a descoloração do pigmento visual.

Protocol

1. Eletrodos preparar Preparar os eletrodos de registro e referência por imersão-los tanto em NaCl 1M e dirigir 15V entre eles usando uma onda senoidal 1 Hz ~ 20 para s. Fazer a gravação usando eletrodos de um puxador de micropipeta (Sutter Instruments P-97). Para patch-pipetas usar um vidro de borosilicato com um diâmetro exterior de 1,2 mm e um diâmetro interno de 0,69 mm (Sutter Instruments, Cat # B120-69-10). Medir a resistência em série com a ponta do eletrodo. Com base no tamanho das c…

Discussion

Gravação fatia de retinas vertebrados têm sido feitas há décadas 1,2, e têm sido bastante bem sucedidos em fornecer uma compreensão mais profunda de como o circuito da retina codifica luz incidente. As vantagens do corte em micrótomo vibrando em vez de diretamente com uma lâmina de barbear é que as fatias da retina incorrer menos danos na superfície. Com uma pipeta de sucção é fácil de remover esse dano e células-alvo saudável logo abaixo da superfície que possuem conectividade no circuito d…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Este trabalho foi financiado pelo NIH Grant EY17606 (APS).

Materials

Material Name Type Company Catalogue Number Comment
Micropipette Puller   Sutter Instruments P-97  
Borosilicate glass   Sutter Instruments B120-69-10  
Polyethylene tubing   Intramedic PE205  
Agar   Sigma A7002  
Low gelling temp agarose   Sigma A0701  
Ames’ Medium   Sigma A1420  
Penicillin-Streptomycin   Sigma P0781  

References

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Cite This Article
Arman, A. C., Sampath, A. P. Patch Clamp Recordings from Mouse Retinal Neurons in a Dark-adapted Slice Preparation. J. Vis. Exp. (43), e2107, doi:10.3791/2107 (2010).

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