Patch Clamp Messungen von Mouse Netzhautneuronen in einem Dark-Scheiben angepasst Vorbereitung
Summary
Hier beschreiben wir ein Verfahren zur Erzeugung von dunkeladaptierten Scheiben der Maus Netzhaut elektrophysiologischen Ableitungen.
Abstract
Unser visuelles Erlebnis wird eingeleitet, wenn die visuelle Pigment in unserer Netzhaut Photonen des Lichts absorbiert und löst eine Kaskade von intrazellulären Ereignissen, die Schließung von zyklisch-Nukleotid-gesteuerte Kanäle in der Zellmembran führt. Die daraus resultierende Veränderung des Membranpotentials führt wiederum zu Kürzungen in Höhe von Neurotransmittern aus beiden Stäbchen und Zapfen synaptischen Terminals. Um zu messen, wie das Licht hervorgerufene Veränderung der Photorezeptor Membranpotentials führt zu nachgelagerten Aktivitäten in der Netzhaut, haben Wissenschaftler elektrophysiologischen Ableitungen von Netzhaut-Scheibe Vorbereitungen für Jahrzehnte 1,2 gemacht. In der Vergangenheit waren diese Scheiben wurden von Hand mit einer Rasierklinge auf die retinale Gewebe, das auf Filterpapier befestigt wird geschnitten, in den letzten Jahren eine andere Methode des Schneidens wurde entwickelt, wobei Netzhautgewebe in niedrigen Geliertemperatur Agar eingebettet ist und in Scheiben geschnitten in coole Lösung mit einem vibrierenden Mikrotom 3,4. Dieses Präparat produziert Netzhaut Scheiben mit weniger Beschädigung der Oberfläche und sehr robust Licht hervorgerufenen Reaktionen. Hier dokumentieren wir, wie dieses Verfahren unter Infrarot-Licht zu vermeiden, Bleichen der Sehpigment getan werden kann.
Protocol
Discussion
Slice-Aufnahme von Wirbeltieren Netzhaut seit Jahrzehnten 1,2 gemacht und waren recht erfolgreich bei der Bereitstellung ein tieferes Verständnis davon, wie die Netzhaut Schaltung kodiert einfallenden Lichts. Die Vorteile des Schneidens mit einem vibrierenden Mikrotom anstatt direkt mit einer Rasierklinge ist, dass die Netzhaut Scheiben weniger Schaden an der Oberfläche entstehen. Mit einer Saugpipette ist es leicht, diese Schäden und Ziel gesunde Zellen direkt unter der Oberfläche, dass ihre Verbindung i…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Diese Arbeit wurde vom NIH Grant EY17606 (APS) unterstützt.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Micropipette Puller | Sutter Instruments | P-97 | ||
| Borosilicate glass | Sutter Instruments | B120-69-10 | ||
| Polyethylene tubing | Intramedic | PE205 | ||
| Agar | Sigma | A7002 | ||
| Low gelling temp agarose | Sigma | A0701 | ||
| Ames’ Medium | Sigma | A1420 | ||
| Penicillin-Streptomycin | Sigma | P0781 |
References
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