Патч зажим Recordings от мыши нейронов сетчатки в темно-адаптированной фрагмент подготовка
Summary
Здесь мы опишем процедуру для получения темно-адаптированных ломтиками мыши сетчатки для электрофизиологических записей.
Abstract
Наш визуальный опыт начинается, когда зрительного пигмента сетчатки в нашей фоторецепторов поглощает фотоны света энергию и инициирует каскад внутриклеточных событий, приведших к закрытию циклических нуклеотидов закрытых каналов в клеточной мембране. В результате изменения мембранного потенциала, в свою очередь приводит к сокращению количества нейромедиаторов релиз с обеих палочек и колбочек синаптических терминалов. Чтобы определить, насколько световых вызвало изменение мембранного потенциала фоторецептора приводит к течению активность в сетчатке, ученые сделали электрофизиологических записей из сетчатки подготовки ломтик за 1,2 лет. В прошлом эти кусочки были вырезаны вручную с лезвием на ткани сетчатки, который прилагается к фильтровальной бумаге, а в последние годы один метод нарезки была разработана котором ткани сетчатки встраивается в странах с низким агар температуры гелеобразования и нарезанный в прохладном растворе с вибрирующий микротома 3,4. Этот препарат производит сетчатки ломтики меньше повреждений поверхности и очень надежные световых вызвали ответы. Здесь документ как эта процедура может быть сделано при инфракрасном свете, чтобы избежать обесцвечивания зрительного пигмента.
Protocol
Discussion
Фрагмент записи с сетчатки позвоночных были сделаны десятилетиями 1,2, и были весьма успешны в обеспечении более глубокого понимания того, как схема сетчатки кодирует падающего света. Преимущества резки с вибрирующим микротома, а не непосредственно с лезвием в том, что сетчатки л?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Эта работа была поддержана NIH Грант EY17606 (APS).
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Micropipette Puller | Sutter Instruments | P-97 | ||
| Borosilicate glass | Sutter Instruments | B120-69-10 | ||
| Polyethylene tubing | Intramedic | PE205 | ||
| Agar | Sigma | A7002 | ||
| Low gelling temp agarose | Sigma | A0701 | ||
| Ames’ Medium | Sigma | A1420 | ||
| Penicillin-Streptomycin | Sigma | P0781 |
References
- Weblin, F. Transmission along and between rods in the tiger salamander retina. J Physiol. 280, 449-470 (1978).
- Wu, S. M. Synaptic connections among retina neurons in living slices. J Neurosci Methods. 20, 139-149 (1987).
- Rieke, F. Temporal contrast adaptation in salamander bipolar cell. J Neurosci. 21, 9445-9454 (2001).
- Armstrong-Gold, C., &, R. i. e. k. e., F, . Bandpass filtering at the rod to second-order cell synapse in salamander (Ambystoma tigrinum) retina. J Neurosci. 23, 3796-3806 (2003).
- Masland, R. H. The fundamental plan of the retina. Nat Neurosci. 4, 877-886 (2001).
- Wassle, H. Parallel processing in the mammalian retina. Nat Rev Neurosci. 5, 747-757 (2004).
