Patch Clamp Opnamen van Mouse Retinal Neuronen in een donker aangepaste Slice Voorbereiding
Summary
Hier beschrijven we een procedure voor het genereren van donker aangepaste plakjes van de muis netvlies voor elektrofysiologische opnames.
Abstract
Onze visuele ervaring wordt gestart wanneer de visuele pigment in ons netvlies fotoreceptoren fotonen van licht energie absorbeert en initieert een cascade van intracellulaire gebeurtenissen die leiden tot sluiting van cyclisch-nucleotide-gated kanalen in het celmembraan. De resulterende verandering in de membraanpotentiaal leidt weer tot vermindering van de hoeveelheid van de neurotransmitter release van zowel de staafjes en kegeltjes synaptische terminals. Om te meten hoe het licht opgewekte verandering in fotoreceptor membraanpotentiaal leidt tot downstream activiteiten in het netvlies, hebben wetenschappers gemaakt elektrofysiologische opnames van het netvlies slice de voorbereidingen voor tientallen jaren 1,2. In het verleden zijn deze schijfjes zijn hand gesneden met een scheermesje op het netvlies weefsel dat wordt gehecht aan papieren filter, in de afgelopen jaren een andere methode van in plakken snijden is ontwikkeld, waarbij het netvlies weefsel is ingebed in een lage temperatuur gelering agar en in plakjes gesneden op een koele oplossing met een trillende microtoom 3,4. Deze voorbereiding maakt het netvlies plakken met minder beschadiging van het oppervlak en zeer robuust licht-geëvoceerde responsen. Hier hebben we document hoe deze procedure kan worden gedaan onder infrarood licht om te voorkomen dat het bleken van de visuele pigment.
Protocol
Discussion
Snijd de opname van gewervelde netvliezen zijn gemaakt voor tientallen jaren 1,2, en zijn redelijk succesvol in het verstrekken van een dieper begrip van hoe de retinale circuits codeert invallende licht. De voordelen van het snijden met een trillende microtoom in plaats van rechtstreeks met een scheermesje is dat het netvlies plakken minder schade aan het oppervlak oplopen. Met een zuigkracht pipet is het gemakkelijk te verwijderen deze schade en doel gezonde cellen net onder de oppervlakte die hun connectiv…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Dit werk werd ondersteund door NIH Grant EY17606 (APS).
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Micropipette Puller | Sutter Instruments | P-97 | ||
| Borosilicate glass | Sutter Instruments | B120-69-10 | ||
| Polyethylene tubing | Intramedic | PE205 | ||
| Agar | Sigma | A7002 | ||
| Low gelling temp agarose | Sigma | A0701 | ||
| Ames’ Medium | Sigma | A1420 | ||
| Penicillin-Streptomycin | Sigma | P0781 |
References
- Weblin, F. Transmission along and between rods in the tiger salamander retina. J Physiol. 280, 449-470 (1978).
- Wu, S. M. Synaptic connections among retina neurons in living slices. J Neurosci Methods. 20, 139-149 (1987).
- Rieke, F. Temporal contrast adaptation in salamander bipolar cell. J Neurosci. 21, 9445-9454 (2001).
- Armstrong-Gold, C., &, R. i. e. k. e., F, . Bandpass filtering at the rod to second-order cell synapse in salamander (Ambystoma tigrinum) retina. J Neurosci. 23, 3796-3806 (2003).
- Masland, R. H. The fundamental plan of the retina. Nat Neurosci. 4, 877-886 (2001).
- Wassle, H. Parallel processing in the mammalian retina. Nat Rev Neurosci. 5, 747-757 (2004).
