הצמד תיקון הקלטות מתא עצב עכבר רשתית בהכנת Dark המותאמות פרוסה
Summary
כאן אנו מתארים את הליך להפקת כהה מותאם פרוסות של הרשתית העכבר על הקלטות אלקטרו.
Abstract
החוויה החזותית שלנו היא יזמה כאשר הפיגמנט חזותית קולטני האור ברשתית שלנו סופג אנרגיה של פוטונים אור יוזם מפל של אירועים תאיים שמובילים סגירת מחזורית-נוקלאוטיד-מגודרת תעלות בקרום התא. השינוי וכתוצאה מכך פוטנציאל קרום מוביל בתורו להפחתה בסכום של שחרור הנוירוטרנסמיטר מן המוט וגם מסופי חרוט הסינפטי. כדי למדוד כיצד לשנות אור עורר בפוטנציאל הממברנה photoreceptor מוביל פעילות הזרם ברשתית, הצליחו המדענים הקלטות אלקטרו מן ההכנות פרוסה רשתית עבור 1,2 עשורים. בעבר פרוסות אלה קוצצו באופן ידני בסכין גילוח על רקמת הרשתית המצורפת נייר מסנן: בשנים האחרונות שיטה אחרת של חיתוך פותחה לפיה רקמת הרשתית מוטבע אגר gelling נמוך הטמפרטורה פרוס פתרון מגניב עם רוטט microtome 3,4. הכנה זו מייצרת פרוסות רשתית עם נזק משטח פחות ותגובות אור עורר מאוד חזקים. כאן אנו מסמך כיצד הליך זה יכול להתבצע תחת אור אינפרא אדום, כדי למנוע הלבנת הפיגמנט חזותית.
Protocol
Discussion
הקלטה פורסים מן הרשתית חוליות נעשו במשך עשרות שנים 1,2, ואת כבר די מוצלח במתן הבנה עמוקה יותר של האופן שבו המעגלים רשתית מקודד אור התקרית. היתרונות של חיתוך עם microtome רוטט ולא ישירות עם סכין גילוח היא פרוסות רשתית להיגרם נזק פחות על פני השטח. עם טפטפת יניקה קל להסיר …
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
עבודה זו נתמכה על ידי NIH גרנט EY17606 (APS).
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Micropipette Puller | Sutter Instruments | P-97 | ||
| Borosilicate glass | Sutter Instruments | B120-69-10 | ||
| Polyethylene tubing | Intramedic | PE205 | ||
| Agar | Sigma | A7002 | ||
| Low gelling temp agarose | Sigma | A0701 | ||
| Ames’ Medium | Sigma | A1420 | ||
| Penicillin-Streptomycin | Sigma | P0781 |
References
- Weblin, F. Transmission along and between rods in the tiger salamander retina. J Physiol. 280, 449-470 (1978).
- Wu, S. M. Synaptic connections among retina neurons in living slices. J Neurosci Methods. 20, 139-149 (1987).
- Rieke, F. Temporal contrast adaptation in salamander bipolar cell. J Neurosci. 21, 9445-9454 (2001).
- Armstrong-Gold, C., &, R. i. e. k. e., F, . Bandpass filtering at the rod to second-order cell synapse in salamander (Ambystoma tigrinum) retina. J Neurosci. 23, 3796-3806 (2003).
- Masland, R. H. The fundamental plan of the retina. Nat Neurosci. 4, 877-886 (2001).
- Wassle, H. Parallel processing in the mammalian retina. Nat Rev Neurosci. 5, 747-757 (2004).
