تسجيلات المشبك التصحيح من الخلايا العصبية في الشبكية ماوس إعداد غامق تكييفها شريحة
Summary
نحن هنا وصف الإجراء لتوليد داكنة تكييفها شرائح من شبكية العين الماوس للتسجيلات الكهربية.
Abstract
يبدأ خبرتنا البصرية عندما الصباغ البصرية في الشبكية لدينا مبصرات تمتص فوتونات الضوء والطاقة تبدأ سلسلة من الأحداث داخل الخلية والتي تؤدي إلى إغلاق دوري – النوكليوتيدات بوابات قنوات في غشاء الخلية. التغيير المحتملة الناتجة في الغشاء يؤدي بدوره إلى انخفاض في كمية الافراج العصبي من كل قضيب ومحطات مخروط متشابك. لقياس مدى التغير في ضوء أثار احتمال غشاء مبصرة يؤدي إلى نشاط المصب في شبكية العين ، جعلت العلماء التسجيلات الكهربية من الاستعدادات لشريحة الشبكية 1،2 عقود. في الماضي قطعت هذه الشرائح يدويا بشفرة حلاقة على أنسجة الشبكية التي تعلق على ورقة فلتر ، وفي السنوات الأخيرة تم تطوير طريقة أخرى للتشريح يتم بموجبها جزءا لا يتجزأ من نسيج الشبكية في التبلور انخفاض درجة الحرارة وآغار شرائح في محلول بارد مع تهتز مشراح 3،4. هذا التحضير تنتج شرائح الشبكية مع أقل الأضرار السطحية وقوية جدا للضوء ردود أثار. نحن هنا الوثيقة كيف يمكن القيام بهذا الإجراء تحت ضوء الأشعة تحت الحمراء لتفادي تبييض صبغة بصرية.
Protocol
Discussion
وقد بذلت تسجيل شريحة من شبكية العين الفقارية لعقود 1،2 ، وكانت ناجحة جدا في توفير فهم أعمق لكيفية عمل الدوائر الشبكية بترميز ضوء الحادث. مزايا القطع مع مشراح تهتز بدلا من مباشرة مع شفرة الحلاقة هو أن تكبد الشرائح الشبكية أقل ضررا على السطح. ماصة مع شفط فمن السهل أ…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
وأيد هذا العمل من قبل المعاهد الوطنية للصحة EY17606 غرانت (APS).
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Micropipette Puller | Sutter Instruments | P-97 | ||
| Borosilicate glass | Sutter Instruments | B120-69-10 | ||
| Polyethylene tubing | Intramedic | PE205 | ||
| Agar | Sigma | A7002 | ||
| Low gelling temp agarose | Sigma | A0701 | ||
| Ames’ Medium | Sigma | A1420 | ||
| Penicillin-Streptomycin | Sigma | P0781 |
References
- Weblin, F. Transmission along and between rods in the tiger salamander retina. J Physiol. 280, 449-470 (1978).
- Wu, S. M. Synaptic connections among retina neurons in living slices. J Neurosci Methods. 20, 139-149 (1987).
- Rieke, F. Temporal contrast adaptation in salamander bipolar cell. J Neurosci. 21, 9445-9454 (2001).
- Armstrong-Gold, C., &, R. i. e. k. e., F, . Bandpass filtering at the rod to second-order cell synapse in salamander (Ambystoma tigrinum) retina. J Neurosci. 23, 3796-3806 (2003).
- Masland, R. H. The fundamental plan of the retina. Nat Neurosci. 4, 877-886 (2001).
- Wassle, H. Parallel processing in the mammalian retina. Nat Rev Neurosci. 5, 747-757 (2004).
