Konjugasyon, plazmid DNA’sını iki farklı hücre boyunca harekete geçirerek yatay gen transferine aracılık eder ve faydalı genlerin yayılmasını kolaylaştırır. Bu çalışma, konjugatif plazmid, donör ve alıcıda transkonjugasyonu tespit etmek için diferansiyel belirteçlerin kullanımına dayanan konjugatif plazmid transferinin etkili tespiti için yaygın olarak kullanılan bir yöntemi açıklamaktadır.
Konjugasyon, Gram-negatif bakterilerde yatay gen transferini kolaylaştıran ana mekanizmalardan birini temsil eder. Bu çalışma, doğal olarak oluşan iki plazmidi örnek olarak kullanarak, doğal olarak oluşan konjugatif plazmidlerin mobilizasyonunun incelenmesi için yöntemleri açıklamaktadır. Bu protokoller, donör, alıcı ve konjugatif plazmiddeki seçilebilir belirteçlerin diferansiyel varlığına dayanır. Spesifik olarak, tarif edilen yöntemler arasında 1) doğal konjugatif plazmidlerin tanımlanması, 2) katı kültürde konjugasyon oranlarının nicelleştirilmesi ve 3) transkonjugant alıcılarda antibiyotik direnç genlerinin ve plazmid replikon tiplerinin polimeraz zincir reaksiyonu (PCR) ile tanısal olarak saptanması yer almaktadır. Burada açıklanan protokoller, yatay gen transferinin evrimsel ekolojisini incelemek ve çevrede bulunan bakterilerde antibiyotik dirençli genler taşıyan konjugatif plazmidlerin varlığını taramak için geliştirilmiştir. Bu deneylerde gözlenen konjugatif plazmidlerin kültüre etkin transferi, genel olarak yatay gen transferini ve özellikle antibiyotik direncinin yayılmasını teşvik eden bir mekanizma olarak konjugasyonun biyolojik uygunluğunu vurgulamaktadır.
1946’da Lederberg ve Tatum1, Escherichia coli K-12’de şimdi konjugasyon olarak bilinen cinsel bir süreci tanımladı. Bakteriyel konjugasyon, bir bakteri hücresinin (donör) tek yönlü genetik materyali doğrudan hücreden hücreye temas yoluyla başka bir hücreye (alıcıya) aktardığı süreçtir. Konjugasyon, bakteri 2,3’te geniş bir şekilde dağılmıştır, ancak konjugasyon makinesini eksprese eden donör hücrelerin fraksiyonu tipik olarak çok küçüktür4.
Plazmidler otonom olarak çoğalan ekstrakromozomal DNA elementleridir. Plazmid replikasyonu ve bakımında yer alan genlere ek olarak, plazmidler sıklıkla ağır metaller veya antibiyotiklere maruz kalma gibi çevresel zorluklara adaptasyonda rol oynayan bir gen yükü taşırlar5. Konjugatif plazmidler, alıcı hücrelere transferlerine izin veren ve transfer6’yı takiben kalıcılıklarını destekleyen bir dizi özel gen içeren bir plazmid sınıfıdır. Konjugatif plazmidlerin büyüklüğü 21.8 kb ila 1.35 Mb arasında değişir ve filum Pseudomonadota’daki bakterilerde (Proteobacteria ile eşanlamlıdır), medyan yaklaşık 100 kb 5,7’dir. Ayrıca, muhtemelen konakçı üzerindeki metabolik yükü düşük tutmak için genellikle düşük bir kopya sayısına sahiptirler 8,9.
Tipik konjugatif aparat dört bileşenden oluşur: bir transfer kökeni (oriT), bir relaksaz, bir tip IV kuplaj proteini ve bir tip IV sekresyon sistemi (bağışçıların alıcılarla iletişim kurmasını sağlayan pilus adı verilen tüp benzeri bir yapı)6. Konjugatif plazmidler taşıyan hücrelerin sadece çok küçük bir kısmı konjugasyonmakinesini 4 ifade eder, ancak plazmidler bir uygunluk avantajı sağlarsa, transkonjuganlar popülasyonda hızla genişleyebilir. Farklı habitatlardan toplanan E. coli izolatlarının% 35 ila% 80’inden fazlası, en az bir antibiyotiğe direnç kazandıran genlere sahip konjugatif plazmidlere sahiptir10,11; bu nedenle, konjugatif plazmidlerin aracılık ettiği yatay gen transferi, antibiyotik direnci genlerinin küresel yayılımını yönlendiren önemli bir mekanizmadır12.
Laboratuvar kültüründe yapılan çiftleşme deneyleri, konjugasyon sıklığının, alıcı hücrelerin doğası, büyüme evresi, hücre yoğunluğu, donör-alıcı oranı, konjugasyonun sıvı veya katı ortamda yapılıp yapılmadığı, karbon, oksijen, safra tuzları, metal konsantrasyonları, memeli hücrelerinin varlığı, sıcaklık, pH ve çiftleşme süresi13,14 gibi birçok faktörden etkilendiğini göstermiştir. 15.
Bu çalışma, belirli bir konakçı suşunda konjugatif plazmidlerin varlığını tespit etmek, katı kültürdeki konjugasyon oranlarını ölçmek ve alıcı hücrelere transferlerini iki kez kontrol etmek için protokolleri açıklamaktadır. Bu protokoller, araştırmaya uygun doğal konjugatif plazmidlerin tanımlanması için ilk adım olarak kullanılabilir. Minimum sayıda basitleştirilmiş adım kullanırlar, çünkü birden fazla kaynaktan (çevresel, kommensal ve patojenik) elde edilen bakterilerde konjugatif plazmidlerin varlığını taramak için tasarlanmıştır (düzinelerce ila yüzlerce donör).
Ek olarak, belirli bir konjugatif plazmidin mobilizasyonunun tespit için kullanılan antibiyotikten bağımsız olup olmadığını (yani, seçim altındaki antibiyotik direnç geninin alaka düzeyi) tespit etmek ve farklı çevresel izolatlarda bulunan iki konjugatif plazmidin konjugasyon oranlarını karşılaştırmak için yapılan testler gösterilmiştir.
İlgili konjugatif plazmidlerin (plazmid replikonu ve antibiyotik direnci gen yapısı) genetik bileşimine dayanarak, protokolün her adımı, konjugasyon oranını etkilemesi muhtemel çeşitli faktörlerin etkisini incelemek için değiştirilebilir.
Genel deneysel tasarım:
Bir çiftleşme deneyi kurmak için gereken temel bileşenler, donör hücreleri, bir alıcı suşu ve donörleri (antibiyotik A), alıcıları (antibiyotik B) ve transkonjuganları (antibiyotik A ve B) seçmek için katı ortamlardır. Transkonjuganlar, donörün konjugatif plazmidini istikrarlı bir şekilde koruyan alıcı hücrelerdir.
Donör hücreler bir antibiyotiğe (antibiyotik A) dirençlidir ve alıcı hücreleri (antibiyotik B) seçmek için kullanılan belirteç veya belirteçlere duyarlıdır. Antibiyotik direnci geninin genomik lokalizasyonu (yani, kromozomda mı yoksa donör hücrenin plazmidinde mi bulunduğu) a priori olarak bilinmek zorunda değildir, çünkü antibiyotik direnç belirteçlerinin alıcıya mobilizasyonu (doğrudan bir donör-alıcı temasından sonra), donör tarafından sağlanan belirteçlerin bir plazmidde olduğu anlamına gelir.
Bir alıcı suşu (konjugatif plazmidler aldığı bilinmektedir) donörde bulunmayan stabil bir seçilebilir belirtece sahip olmalıdır; Bu seçilebilir belirteç genellikle kromozomda bulunan bir antibiyotik veya biyosite karşı dirençlidir. Çiftleşme deneylerinde kullanılacak alıcının seçimi kritiktir, çünkü bazı E. coli suşları konjugatif plazmidleri alma yeteneklerinde farklılık gösterir16.
Bu bileşenler kurulduktan sonra, bir donör-alıcı çifti temasından sonra her iki antibiyotik (A ve B) ile medyada büyüyen herhangi bir koloni, varsayılan bir transkonjuganttır (Şekil 1). Bu, donörlerin antibiyotik A ile medyada büyüyebileceğini, ancak antibiyotik B ile medyada büyüyemediğini ve alıcıların antibiyotik B ile medyada büyüyebildiklerini, ancak antibiyotik A ile büyüyemediklerini varsaymaktadır. transkonjugasyon iki tanı testi kullanılarak doğrulanabilir. İlk test, transkonjugant kolonilerde konjugatif plazmidde bulunan genlerin tespitinden (genlerin polimeraz zincir reaksiyonu [PCR] amplifikasyonu veya diğer yöntemlerle) oluşur. İkinci test, laktoz metabolizmasına dayalı diferansiyel koloni renk belirteçlerinin kullanımını içerir. Diferansiyel koloni rengi, MacConkey agar’ın kullanılmasıyla ortaya çıkar; agar içindeki laktoz, laktoz fermente edici (lak+) mikroorganizmalar tarafından fermantasyon kaynağı olarak kullanılabilir. Bu mikroorganizmalar, pH’ı düşüren organik asitler, özellikle laktik asit üretir. Nötr kırmızı, ortama dahil edilen ve pH 6,817’nin altına düştüğünde kirli beyazdan parlak kırmızı/pembeye dönüşen bir pH göstergesidir. Böylece, E. coli laktoz-pozitif suşlar MacConkey agar üzerinde daha büyük pembe koloniler üretirken, laktoz-negatif suşlar MacConkey agar üzerinde soluk sarı ve daha küçük koloniler üretir.
Şekil 1: Donör suşlarda konjugatif plazmidlerin varlığını saptamak için kullanılan deneysel tasarım. Bu örnekte, donör, antibiyotik A’ya direnç kazandıran bir antibiyotik direnç geni ile konjugatif bir plazmid taşır, ancak antibiyotik B’ye duyarlıdırlar. tersine, alıcının antibiyotik B’den koruma sağlayan bir kromozomal direnç belirleyicisi vardır, ancak antibiyotiğe duyarlıdır A. Transkonjuganlar her iki antibiyotiğe de dirençlidir (A ve B), çünkü donörün A antibiyotiğine direnç kazandıran konjugatif plazmidine ve alıcının B antibiyotiğinden koruma sağlayan kromozomuna sahiptirler.
Bir donör-alıcı çifti için konjugasyon oranı (belirli deneysel koşullar altında), transkonjugat sayısının donör sayısına veya alıcı sayısına bölünmesiyle hesaplanabilir; ilk oran, konjugasyon makinesinin donör tarafından fonksiyonel ekspresyonunu sergileyen donör hücrelerin fraksiyonunugösterir 16,18, ikinci oran ise alıcının konjugatif plazmidleri alma yeteneğini gösterir 19,20. Bu çalışmada, aksi belirtilmedikçe, konjugasyon oranı, transkonjugant haline gelen alıcı hücrelerin fraksiyonunu temsil etmektedir (yani, alıcı başına oran).
Burada, bir E. coli alıcısı ve iki E. coli donörünü içeren iki bağımsız çiftleşme deneyi bildirilmiştir. Ek olarak, konjugatif plazmidde bulunan antibiyotik direnç genlerinden herhangi biriyle tek bir çoklu ilaca dirençli plazmidin seçilebileceğini doğrulamak için donörlerden biri için transkonjuganları seçmek için farklı antibiyotikler kullanılmıştır.
Bu çalışmada kullanılan donör ve alıcı suşları, bu deneysel sistemin tüm bileşenlerini anlamak için tamamen sıralanmıştır; Bununla birlikte, bu protokoller bilinmeyen sekanstaki konakçılarda konjugatif plazmidlerin varlığını taramak için tasarlanmıştır ve bu deneysel bağlamda da kullanılabilir; ancak bu durumda önce ilgili genler dizilenir.
Protokolde kullanılan donör ve alıcı suşları şunlardır:
Donör 1. E. coli SW4955, Baton Rouge’daki (LA, ABD) bir gölde toplandı. IncFIC(FII) ve IncFIB (AP001918) replikonları ile 134.797 bp konjugatif plazmidine (p134797) sahiptir. Bu konjugatif plazmid, üçüncü nesil sefalosporinlere (blaCTX-M-55), aminoglikozitlere (aac (3)-IIa ve aadA1), fenikollere (catA2), tetrasiklinlere (tet (A)), trimetoprim (dfrA14) ve sülfonamidlere (sülfonamidler) direnç kazandıran genlere sahiptir. p134797’nin tam haritası için lütfen Şekil 2A’ya bakın. E. coli SW4955, laktoz pozitiftir ve MacConkey agarında pembe koloniler üretir.
Donör 2. E. coli SW7037, Erie Gölü’nde (Ottawa County, OH, ABD) toplandı. Bir IncI1-I (Alfa) replikon ile 101.718 bp konjugatif plazmid (p101718) taşır. Bu konjugatif plazmid, beta-laktamlara direnç kazandıran bir gene sahiptir (blaCMY-2). P101718’in tam haritası için lütfen Şekil 2B’ye bakın. E. coli SW7037 ayrıca laktoz pozitiftir ve MacConkey agarında pembe koloniler üretir.
Şekil 2: Bu çalışmada kullanılan konjugatif plazmidlerin genetik haritası. (A) Plazmid p134797, E. coli suşu SW4955’te bulunan konjugatif plazmid. (B) Plazmid p101718, E. coli suşu SW7037’de bulunan konjugatif plazmid. Antibiyotik direnci genleri mavi renkte, konjugatif aparata ait genler ise kırmızı renkle vurgulanır. Bu şeklin daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.
Alıcı. E. coli LMB100 alıcı olarak kullanılır. Bu, rifampine (100 mg / L) ve streptomisin’e (100 mg / L) dirençli plazmidsiz bir suştur. İki antibiyotiğe direnç göstermek, donörde ortaya çıkan ve sonuçların yorumlanmasına müdahale edecek direnç mutasyonları olasılığını azaltır. Ek olarak, E. coli LMB100 laktoz negatiftir ve MacConkey agarında soluk sarı ve küçük koloniler (daha büyük, pembe kolonilerin aksine) ürettiği için iki donör suşundan ayırt edilebilir.
Donör laktoz negatif olduğunda, laktoz pozitif bir alıcı kullanmanızı öneririz (örneğin, E. coli J53). LMB100 ve J53 suşları diğer laboratuvarlarda da kullanılabilir. Lütfen Dr. Gerardo Cortés-Cortés’e adres ve FedEx numarası ile birlikte bir talep gönderin.
Bağışçıları, alıcıları ve transkonjuganları seçmek ve saymak için gereken katı ortam, 100 mm çapındaki Petri kaplarındaki MacConkey agar’dır. Aşağıdaki antibiyotiklerin eklenmesi gerekir: (i) Medya A: donörleri saymak ve alıcıların bu antibiyotikle büyüyememesini sağlamak için karbenisilin (100 mg / L). (ii) Medya B: Alıcıları saymak ve donörlerin bu iki antibiyotikte büyüyememesini sağlamak için rifampin (100 mg / L) + streptomisin (100 mg / L). (iii) Medya AB: transkonjuganları elde etmek ve saymak için karbenisilin (100 mg / L) + rifampin (100 mg / L) + streptomisin (100 mg / L). (iv) Medya C: İncelenen tüm izolatları çizecek antibiyotik yok.
E. coli SW4955 ve E. coli SW7037’den E. coli LMB100’e konjugatif plazmidlerin konjugasyon oranları karşılaştırılmıştır. Ek olarak, p134797 konjugatif plazmid (SW4955 suşu) durumunda, antibiyotik karbenisilin (100 mg / L), gentamisin (2 mg / L), kloramfenikol (25 mg / L), tetrasiklin (10 mg / L), trimetoprim (20 mg / L) veya sülfametoksazol (100 mg / L) ile değiştirilir.
Konjugatif plazmidler, rekombinasyon ve yatay gen transferi yoluyla belirli bir çevresel ortamda ortak bir gen havuzuna erişim sağlar34. Bu nedenle, konjugatif plazmidler, bakterilerin zamansal bir saat ölçeği içinde çoklu koşullara (antibiyotiklere direnç, metallere direnç, metallerin edinimi, biyofilm oluşumu ve patojenik genler dahil) uyum sağlamasına izin veren işlevleri edinebilen ve verebilen evrimsel varlıklardır.
Bu çalışma, bakterilerde konjugatif plazmidlerin tanımlanması için bir protokol sunmaktadır. Protokolün çalışması için, kullanılan belirteçlerin, A ve B ortamlarındaki kontrollerde gösterildiği gibi, donör ve alıcı suşlarını ayırt etmesi gerekir. Ayrıca plazmidi taşıyan hücreleri etkili bir şekilde seçmeleri gerekir. Çiftleşme reaksiyonu kritiktir. Bu reaksiyonda, konjugasyonun gerçekleşmesi için donörlerin ve alıcıların uzun süreli temas (pili yoluyla) yapmaları gerekir. Yetersiz kuluçka süresi veya kültürü sallamak veya karıştırmak gibi hücreden hücreye teması bozabilecek herhangi bir şey, böylece konjugasyonun verimliliğini azaltır. Bazı alıcı suşları konjugasyona dirençli olduğu için alıcı seçimi de kritiktir35,36. LMB100, çoklu uyumsuzluk tiplerinin plazmidlerini alabildiği için tercih edilen alıcı olarak önerilmektedir.
Konjugasyon hızı her plazmid-donör kromozom çifti, alıcı ve çevresel durum için spesifiktir. Spesifik plazmidlerin konjugasyonunun, büyüme fazı, hücre yoğunluğu, donör-alıcı oranı, konjugasyonun sıvı veya katı ortamda yapılıp yapılmadığı, karbon, oksijen, safra tuzları, metal konsantrasyonları, memeli hücrelerinin varlığı, sıcaklık, pH ve çiftleşme süresi dahil olmak üzere çok sayıda değişkene duyarlı olduğu bulunmuştur13,14,15 . Bu etkileşimlerin incelenmesi, derinlemesine incelenecek konjugatif bir plazmidin ilk tespitine bağlıdır. Bu nedenle, burada açıklanan protokol, farklı deneysel değişkenlerin etkisini araştırmak için de değiştirilebilir, ancak bu, taranan bağışçıların sayısını kısıtlama pahasına gelir. Ayrıca, yardımcı plazmidlere sahip konakçılardaki mobilize edilebilir plazmidleri de tanımlayabilir (yani, trans6’daki mobilize edilebilir plazmidlerden eksik fonksiyonları sağlayarak konjugasyonu sağlayan plazmidler).
Konjugatif plazmidin sırasını bilmek önerilir (ancak yukarıda tartışıldığı gibi konjugasyonu tespit etmek için gerekli değildir). Donörler laktoz negatif olduğunda (MacConkey agar’da sarı koloniler üreten), gerçek transkonjuganları transkonjuganları seçmek için medyada büyüyebilen donör hücrelerden ayırt etmek için laktoz pozitif bir alıcı (MacConkey agar’da pembe koloniler üreten) kullanılabilir. Burada açıklanan protokol, Enterobacteriaceae familyasının çevresel, kommensal ve patojenik üyelerinden konjugatif plazmidleri tespit etmek için tasarlanmıştır; Bununla birlikte, uygun bir donör, alıcı, antibiyotik (ler) ve renk belirteçleri olan herhangi bir bakteri türü ile kullanılabilir. Bu kritik bileşenlerin diğer bakterilerde tanımlanması, birden fazla donör, alıcı ve belirteç (antibiyotikler ve renkler) kullanan sistematik çalışmalar gerektirir. Bu protokol Gram-pozitif bakterilerde test edilmemiştir.
Burada sunulan yöntemin çeşitli varyantları literatürde bildirilmiş, yakın zamanda gözden geçirilmiş20. Nitel sonuç farklı şekillerde de ifade edilebilir (örneğin, ekskonjugant frekansı ve gen transfer frekansı) ve konjugasyon verimliliğini (mL / CFU x h)20 raporlamak için boyutsuz birimler kullanılabilir.
Burada açıklanan protokol, daha önce mevcut yöntemlerle ele alınmayan çeşitli sınırlamaları çözer16,18,19,20. İlk olarak, uygun bir alıcı tespit edilmiştir. İkincisi, gerçek transkonjuganları seçmek için iki antibiyotiğin (rifampin ve streptomisin) kullanılması, donörlerin spontan mutagenez yoluyla transkonjuganları seçmek için kullanılan antibiyotiklerden birine direnç geliştirme olasılığını en aza indirir. Yanlış transkonjuganlar, donör tarafından büyük miktarlarda üretilen enzimler (örneğin, beta-laktamaz) tarafından transkonjuganları seçmek için kullanılan antibiyotiğin hidrolizi ile seyirci korumasından da kaynaklanabilir. Üçüncüsü, çiftleşme ürününün gerçek bir transkonjugant (yani, donörün konjugatif plazmidini istikrarlı bir şekilde birleştiren bir alıcı hücre) olduğundan emin olmak için birkaç deneysel kontrol dahil edilmiştir. Burada, transkonjuganların gerçekliğini test etmek için iki bağımsız yöntem, yani MacConkey agar’da kolorimetrik bir belirteç ve alıcıdaki konjugatif plazmidin replikonlarının ve antibiyotik direnç genlerinin PCR tespiti sunulmuştur. Ayrıca, burada açıklanan protokol, konjugatif plazmidleri Enterobacteriaceae familyasının çevresel, kommensal ve patojenik üyelerinden (Escherichia, Klebsiella, Enterobacter, Citrobacter, Salmonella, Shigella ve diğer türler) izole etmek ve karakterize etmek için tasarlanmıştır.
Konjugasyon mekaniğini anlamak için, deneysel gözlemler bilgisayar simülasyonları kullanılarak modellenmiştir. Bu öngörücü modeller, donörlerin, alıcıların ve transkonjuganların belirli büyüme yoğunlukları için plazmid transferinin sıklığını tahmin eder. Son nokta modeli olarak bilinen bir model, sıvı kültürde plazmid transfer hızının üzerinde olduğu eşikler buldu ve transfer hızının hücre yoğunluğu, donör: alıcı oranı ve çiftleşme süresi19’dan etkilenmediği sonucuna vardı. Floresan in situ hibridizasyon (FISH), transkonjugant plazmid tespitinde alternatif bir yöntem olarak kullanılmıştır. FISH, bir DNA probunun ve bir hedef DNA’nın hibridizasyonu yoluyla floresan mikroskobu kullanılarak plazmid görselleştirmesine izin verir. Böylece, FISH, farklı hücre popülasyonları arasında plazmid akışlarının görsel olarak algılanmasına izin verir37, ancak transkonjuganlar seleksiyonun aksine görsel tarama ile tespit edilirse, burada sunulan yöntemle aynı hassasiyet seviyesine sahip değildir.
Antibiyotik direnç genlerini ekosistemin farklı bileşenleri (klinik, tarım, kanalizasyon, vahşi yaşam, evcil hayvanlar, topraklar, nehirler ve göller) aracılığıyla dağıtan konjugatif plazmidlerin biyolojisini anlamak için muazzam bir ihtiyaç vardır. Özetle, burada açıklanan protokollerde sunulan basitleştirilmiş deneysel koşullar, donörlerin ölçekli olarak taranmasını kolaylaştırır ve bu nedenle, çeşitli kaynaklardan konjugatif plazmidlerden kaynaklanan yatay gen transferinin incelenmesi için kilit bir aracı temsil eder. Birden fazla kaynaktan ve bakteriden konjugatif plazmidlerde antibiyotik dirençli genlerin veya klinik olarak ilgili diğer genlerin prevalansını araştırmak için kullanılabilirler. Ayrıca in vivo konjugasyon çalışması için (örneğin, omurgalıların bağırsağında) ve konjugasyonun verimliliğini modüle eden koşulları incelemek için uyarlanabilirler. Tüm bu çalışmalar, çoklu ilaca dirençli konjugatif plazmidlerin mobilizasyonunun çoklu ilaç direncinin yayılmasına nasıl katkıda bulunduğunu anlamaya büyük ölçüde katkıda bulunacaktır.
The authors have nothing to disclose.
LM-B, IMG, AT ve IS, LM-B’ye verilen NIH hibe GM055246 tarafından desteklenmiştir. GC-C, UC MEXUS-CONACYT Doktora Sonrası Bursu’na iki yıl üst üste layık görüldü: AY 2017-18 ve 2018-19. Genentech-Foundation sponsorluğundaki Akademik İlham Ağı (GAIN) mentorluk programından öğrenciler Sage Chavez ve Pepper St. Clair’e deneylerdeki teknik destekleri için çok teşekkür ederiz.
1.5 mL tube racks | Thermo Fisher Scientific | 22-313630 | It can be replaced for another brand |
2.0 mL Cryogenic vials | Corning | 430659 | It can be replaced for another brand |
14 mL conical tubes | FALCON | 149597 | It can be replaced for another brand |
14 mL tube racks | Thermo Fisher Scientific | 8850 | It can be replaced for another brand |
1 kb DNA ladder | New England Biolabs | N0552G | |
250 mL sterile flasks | PYREX | 5320 | It can be replaced for another permanent marker brand |
Acetic acid | Fisher Scientific | A38SI-212 | It can be replaced for another brand |
Agarose (molecular biology grade, multipurpose) | Fisher Scientific | BP160-500 | It can be replaced for another brand |
Carbenicillin | GOLD BIOTECHNOLOGY | C-103-50 | It can be replaced for another brand |
Disposable inoculating loops: 1 µL | Fisherbrand | 22-363-595 | It can be replaced for another brand |
DNA gel loading dye 6x | New England Biolabs | B7024S | It can be replaced for another brand |
EDTA | Fisher Scientific | BP119-500 | It can be replaced for another brand |
Electronic digital scale | Denver Instrument | APX-2001 | It can be replaced for another brand |
Eppendorf conical tubes: 1.5 mL | Eppendorf | 14-282-302 | It can be replaced for another brand |
Equipment for agarose gel electrophoresis | Fisher Scientific | FP300 | It can be replaced for another brand |
Ethanol-resistant markers | Sharpie | 37001; 37002; 37003 | It can be replaced for another brand |
Gel documentation systems (UVP GelSolo) | Analytakjena | SP-1108; 849-97-0936-01; 95-0612-01 | It can be replaced for another brand |
Gloves | X-GEN | 44-100M | Any nitrile gloves brand works |
Ice bucket | Thermo Fisher Scientific | 432128 | It can be replaced for another brand |
MacConkey agar | BD DIFCO | 212123 | |
Master Mix | BioLabs | M0496S | It can be replaced for another brand |
Methanol | Fisher Scientific | A452-4 | It can be replaced for another brand |
Microcentrifuge tubes: 2.0 mL | Fisherbrand | 05-408-138 | It can be replaced for another brand |
Mueller Hinton agar | BD DIFCO | DF0479-17-3 | |
Mueller Hinton broth | BD DIFCO | 275730 | |
NucleoSpin Plasmid, Mini kit for plasmid DNA | Takara Bio USA, Inc., MACHEREY-NAGEL | 740588. 250 | |
PCR tube racks | AXYGEN | R96PCRFSP | It can be replaced for another brand |
PCR tubes (0.2 mL) | AXYGEN | PCR-02-C | It can be replaced for another brand |
Rifampicin | Fisher Scientific | 50-164-7517 | |
Set of micropipettes that dispense between 1 – 10 μL (P10), 2–20 μL (P20), 20–200 μL (P200) and 200–1000 μL (P1000) | RAININ | 17008648; 17008650; 17008652; 17008653 | Micropipettes should be calibrated; can be replaced for another brand |
Sodium chloride | Fisher Scientific | S671-3 | It can be replaced for another brand |
Spectrophotometer | Thermo Scientific | 335905P | It can be replaced for another brand |
Sterilized tips for 10 μL, 200 μL and 1000 μL | Eclipse | 1011-260-000-9; 1018-260-000; 1019-260-000-9 | It can be replaced for another brand |
Streptomycin | Fisher Scientific | BP910-50 | |
SYBR Safe DNA gel stain | Thermo Fisher Scientific | S33102 | |
Taq DNA Polymerase | BioLabs | M0273S | |
Thermal cycler C1000 Touch | Bio-Rad | 1851196 | It can be replaced for another brand |
Tris | Fisher Scientific | BP153-500 | It can be replaced for another brand |