במבחנה הערכת פעילות תאית של חיסון ננו-אמולסיה אדג'ובנט אופיופוגונין D

חיסונים הם אמצעי חשוב למניעה וטיפול במחלות זיהומיות ולא קומוניקטיביות. התוספת המתאימה של אדג’ובנטים וכלי משלוח לפורמולציות חיסונים מועילה להגברת האימונוגניות של אנטיגנים וליצירת תגובות חיסוניות ארוכות טווח¹. בנוסף לאלום האדג’ובנטי הקלאסי (מלח אלומיניום), ישנם שישה סוגים של אדג’ובנטים לחיסונים המשווקים כיום: MF59^2,3, AS04 3, AS03 3, AS01 ³, CpG1018⁴ ומטריצה-M⁵. בדרך כלל, כאשר גוף האדם נתקל בהתקפה ויראלית, קווי ההגנה הראשון והשני (עור, רירית ומקרופאגים) לוקחים את ההובלה בניקוי הנגיף, ולבסוף, קו ההגנה השלישי, הכולל את איברי החיסון ותאי החיסון, מופעל. מלחי אלומיניום ואלומיניום הם האדג’ובנטים הנפוצים ביותר לחיסונים אנושיים מאז תחילת שנות ה-20 של המאה ה-20, מה שמעורר תגובה חיסונית מולדת יעילה⁶. עם זאת, הוצע כי הפעלת תאים המציגים אנטיגן (APCs) על ידי אדג’ובנטים קלאסיים, אשר מגרה את תאי החיסון ליצור קבוצות ספציפיות של ציטוקינים וכמוקינים, היא המנגנון שבאמצעותו אדג’ובנטים פועלים ועשויה להיות אחת הסיבות לכך שאדג’ובנטים מפעילים רק השפעות חולפות על תגובות חיסוניות ספציפיות⁷. נוכחותם של אדג’ובנטים מורשים מוגבלים לשימוש אנושי היא גורם מגביל לפיתוח חיסונים המעוררים תגובות חיסוניות יעילות⁸.

כיום, מספר גדל והולך של מחקרים אדג’ובנטיים מדגימים את היכולת לגרום לתגובה חיסונית תאית חזקה בעכברים. הוכח כי QS-21 משרה תגובה חיסונית מאוזנת של T-helper 1 (Th1) ו-T-helper 2 (Th2), מייצר רמות גבוהות יותר של טיטרים של נוגדנים ומאריך את ההגנה כאדג’ובנט, אך רעילותו החזקה ותכונותיו ההמוליטיות מגבילות את התפתחותו כאדג’ובנט קליני^{עצמאי 9,10}. OP-D (רוסקוגנין-O-α-L-ראמנופירנוזיל1-(1→2)-β-D-קסילופירנוזיל-(1→3)-β-D-fucopyranoside) הוא אחד הספונינים הסטרואידים שבודדו משורש צמח המרפא הסיני Ophiopogon japonicas⁴. בנוסף, זהו המרכיב הפרמקולוגי הפעיל העיקרי (שן מאי סאן) שנמצא ברדיקס אופיופוגוניס וידוע כבעל תכונות פרמקולוגיות מסוימות¹¹. יתר על כן, הוא חבר במשפחת Liliaceae והוא נמצא בשימוש נרחב עבור ההשפעות המעכבות והמגינות שלו בדלקת תאית ופגיעה בשריר הלב. לדוגמה, OP-D משמיד נגעים דמויי אטופיק דרמטיטיס המושרים על-ידי DNCB ותאי HaCaT דלקתיים של גורם נמק הגידול אלפא (TNF-α) בעכברי BALB/c¹². חשוב לציין כי OP-D מקדם את ההגנה נוגדת החמצון של מערכת הלב וכלי הדם ומגן על הלב מפני פגיעה אוטופגית הנגרמת על ידי דוקסורוביצין על ידי הפחתת ייצור מיני חמצן תגובתי ושיבוש הנזק לממברנה המיטוכונדריאלית. ניסויים הראו כי נטילת OP-D עם מונו-דסמוזיד עוזרת לשפר את בריאות מערכת החיסון, להגביר את ספירת תאי הדם הלבנים ואת סינתזת הדנ”א, ולגרום לנוגדנים להחזיק מעמד זמן רב יותר¹³. בעבר נמצא כי OP-D יש אפקט אדג’ובנטי¹⁴.

ננו-מולקולות הן ננו-מולקולות שמן במים המורכבות משילוב של חומרים פעילי שטח, נפט, חומרים פעילי שטח ומים^12,15. עיצובים אלה של ננו-חיסונים מאפשרים לעטוף אנטיגנים ואדג’ובנטים יחד כדי להגביר את הגירוי החיסוני, להגן על האנטיגנים ולקדם התבגרות של תאים דנדריטיים (DC)¹⁶. לצורך פיתוח של אדג’ובנטים חדשניים אלה המתקבלים מהקרנה, חשוב למצוא שיטות מתאימות להערכת יכולות התגובה התאית שלהם.

מטרת פרוטוקול זה היא להעריך באופן שיטתי אם אדג’ובנטים יכולים לשפר את הפאגוציטוזה ואת הביטוי של תאי מערכת החיסון בתרבית תאים במבחנה ולפרט על שיטות הניסוי העיקריות. הניסוי מחולק לארבעה סעיפי משנה: (1) הרעילות של OP-D ו-NOD לתאי L929 נקבעת על ידי בדיקת ערכת ספירת התאים 8 (CCK-8); (2) רמות הציטוקינים של IFN-γ ו-IL-17A האנדוקריניים ומספרי התאים המתאימים בעכברים מחוסנים מזוהים על ידי גירוי ספלנוציטים ומבחני ELISpot; (3) יכולת הצגת האנטיגן של DCs לאחר גירוי אדג’ובנטי נצפית באמצעות מיקרוסקופיה קונפוקלית; ו-(4) מזוהים שלושת סוגי הציטוקינים, IL-1β, IL-6 ו-TNF-α, בסופרנטנטים המתקבלים ממקרופאגים של הצפק (PMs) בעכברים רגילים שעברו התרבות יחד עם אדג’ובנטים.