Séparation des sous-populations de cellules immunitaires dans les échantillons de sang périphérique des enfants atteints de mononucléose infectieuse

Le virus d’Epstein-Barr (EBV), un γ-herpèsvirus également connu sous le nom de virus de l’herpès humain de type 4, est omniprésent dans la population humaine et établit une infection latente à vie chez plus de 90% de la population adulte¹. La plupart des infections primaires par le VEB surviennent pendant l’enfance et l’adolescence, avec une fraction des patients se manifestant par une mononucléose infectieuse (IM)², présentant une immunopathologie caractéristique, y compris une réponse immunitaire activée avec des lymphocytes T CD8⁺ dans le sang et une prolifération transitoire de cellules B infectées par le VEB dans l’oropharynx³. L’évolution de l’IM peut durer de 2 à 6 semaines et la majorité des patients se rétablissent bien⁴. Cependant, certaines personnes développent des symptômes persistants ou récurrents semblables à ceux de la MI avec une morbidité et une mortalité élevées, ce qui est classé comme une infection chronique active par le VEB (ACEB)⁵. De plus, le VEB est un virus oncogène important, qui est étroitement lié à diverses tumeurs malignes, y compris les tumeurs malignes épithélioïdes et lymphoïdes telles que le carcinome nasopharyngé, le lymphome de Burkitt, le lymphome hodgkinien (LH) et le lymphome à cellules T/NK⁶. Bien que le VEB soit étudié depuis plus de 50 ans, sa pathogenèse et le mécanisme par lequel il induit la prolifération des lymphocytes n’ont pas été entièrement élucidés.

Plusieurs études ont étudié les signatures moléculaires de l’immunopathologie de l’infection par le VEB par séquençage du transcriptome. Zhong et coll. ont analysé le profilage du transcriptome entier des cellules mononucléées du sang périphérique (PBMC) d’enfants chinois atteints de MI ou de CAEBV pour constater que l’expansion des lymphocytes T CD8+ était principalement observée dans^{le groupe 7} de la MI, ce qui suggère que les lymphocytes T CD8⁺ pourraient jouer un rôle majeur dans la MI. De même, une autre étude a révélé des proportions plus faibles de lymphocytes T cytotoxiques spécifiques du VEB et de lymphocytes B CD19+ et des pourcentages plus élevés de lymphocytes T CD8⁺ chez les patients atteints de MI causée par une infection primaire par le VEB que chez les patients atteints d’IM causée à la fois par la réactivation du VEB et d’autres agents⁸. Les lymphocytes B sont d’abord impliqués dans la MI parce que les récepteurs EBV sont présentés à leur surface. Al Tabaa et coll. ont constaté que les lymphocytes B étaient activés polyclonalement et différenciés en plasmoblastes (CD19+, CD27+ et CD20−, et cellules CD138−) et plasmocytaires (CD19+, CD27+ et CD20⁻, et CD138⁺) pendant la MI⁹. De plus, Zhong et al. ont constaté que les marqueurs monocytaires CD14 et CD64 étaient régulés à la hausse dans le CAEBV, ce qui suggère que les monocytes peuvent jouer un rôle important dans la réponse immunitaire cellulaire du CAEBV par cytotoxicité cellulaire dépendante des anticorps (ADCC) et phagocytose hyperactive⁷. Alka et coll. ont caractérisé le transcriptome des cellules NK CD16+ CD16⁺ CD56 triées par MACS^triées de quatre patients atteints de MI ou de LH et ont constaté que les cellules NK de IM et de LH avaient des gènes d’immunité innée et de signalisation de chimiokine, ce qui pourrait être responsable de l’hyporéactivité des cellules NK¹⁰. De plus, Greenough et coll. ont analysé l’expression génique de lymphocytes T CD8⁺ triés à partir de 10 PBMC de personnes atteintes de MI. Ils ont signalé qu’une grande proportion des lymphocytes T CD8⁺ dans la MI étaient spécifiques au virus, activés, se divisant et prêts à exercer des activités effectrices¹¹. Les réponses spécifiques à médiation par les lymphocytes T et les réponses non spécifiques à médiation par les cellules NK jouent un rôle essentiel lors de la primo-infection par le VEB. Cependant, ces études n’ont examiné que les résultats du transcriptome du mélange diversifié de cellules immunitaires ou seulement d’une certaine sous-population de lymphocytes, ce qui n’est pas suffisant pour la comparaison complète des caractéristiques moléculaires et des fonctions de différentes sous-populations de cellules immunitaires chez les enfants atteints de MI dans le même état pathologien.

Cet article décrit une méthode qui combine des billes immunomagnétiques et le tri cellulaire activé par fluorescence (FACS) pour isoler et analyser des sous-populations de cellules immunitaires définies de PBMC (monocytes, cellules T CD4+, cellules T CD8⁺, cellules B et cellules NK). En utilisant cette méthode, les cellules marquées magnétiquement et par fluorescence peuvent être purifiées à l’aide d’un séparateur magnétique et de FACS ou analysées par cytométrie en flux. L’ARN peut être extrait des cellules purifiées pour le séquençage du transcriptome. Cette méthode permettra la caractérisation et l’expression génique de différentes cellules immunitaires dans les mêmes états de maladie des personnes atteintes de MI, ce qui élargira notre compréhension de l’immunopathologie de l’infection par le VEB.