传染性单核细胞增多症儿童外周血样本中免疫细胞亚群的分离

EB 病毒 （EBV） 是一种γ疱疹病毒，也称为人类疱疹病毒 4 型，在人群中普遍存在，并在 90% 以上的成年人口中建立终生潜伏感染¹。大多数 EBV 原发性感染发生在儿童期和青春期，少数患者表现为传染性单核细胞增多症 （IM）²，表现出特征性免疫病理学，包括血液中 CD8⁺ T 细胞的激活免疫应答和口咽部 EBV 感染的 B 细胞短暂增殖³。IM的病程可能持续2-6周，大多数患者恢复良好⁴。然而，有些人会出现持续性或复发性IM样症状，发病率和死亡率很高，这被归类为慢性活动性EBV感染（CAEBV）⁵。此外，EB病毒是一种重要的致癌病毒，与多种恶性肿瘤密切相关，包括鼻咽癌、伯基特淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤（HL）和T/NK细胞淋巴瘤6等上皮样和淋巴恶性^肿瘤。尽管EB病毒已经研究了50多年，但其发病机制和诱导淋巴细胞增殖的机制尚未完全阐明。

一些研究已经通过转录组测序研究了EBV感染免疫病理学的分子特征。钟等分析了中国IM或CAEBV患儿外周血单核细胞（PBMC）的全转录组分析，发现CD8+T细胞扩增主要见于IM^组7，提示CD8⁺T细胞可能在IM中起主要作用。同样，另一项研究发现，与由EBV再激活和其他药物引起的IM患者相比，原发性EBV感染引起的IM患者中EBV特异性细胞毒性T和CD19 + B细胞的比例较低，CD8 ⁺ T细胞的百分比较高⁸。B细胞首先参与IM，因为EBV受体存在于其表面。Al Tabaa等人发现B细胞在IM⁹期间被多克隆激活和分化的原浆母细胞（CD19+，CD27+和CD20−以及CD138−细胞）和浆细胞（CD19+，CD27⁺和CD20⁻以及CD138⁺）。此外，Zhong等人发现单核细胞标志物CD14和CD64在CAEBV中上调，表明单核细胞可能通过抗体依赖性细胞毒性（ADCC）和过度活跃的吞噬作用在CAEBV的细胞免疫应答中^{发挥重要作用7。}Alka等人对来自四名IM或HL患者的MACS分选CD56^{暗CD16 +} NK细胞的转录组进行了表征，发现来自IM和HL的NK细胞具有下调的先天免疫和趋化因子信号基因，这可能是NK细胞低反应的原因¹⁰。此外，Greenough等人分析了来自IM个体的10个PBMC的分选CD8 ⁺ T细胞的基因表达。他们报告说，IM中很大一部分CD8 ⁺ T细胞具有病毒特异性，激活，分裂，并已准备好发挥效应活性¹¹。在原发性 EBV 感染期间，T 细胞介导的 EBV 特异性反应和 NK 细胞介导的非特异性应答都起着至关重要的作用。然而，这些研究仅研究了免疫细胞多种混合物或仅研究特定淋巴细胞亚群的转录组结果，不足以全面比较同一疾病状态下IM患儿不同免疫细胞亚群的分子特征和功能。

本文描述了一种结合免疫磁珠和荧光激活细胞分选（FACS）来分离和分析PBMC的明确免疫细胞亚群（单核细胞，CD4 + T细胞，CD8 ⁺ T细胞，B细胞和NK细胞）的方法。使用这种方法，可以使用磁选机和FACS纯化磁性和荧光标记的细胞或通过流式细胞术进行分析。可以从纯化的细胞中提取RNA进行转录组测序。该方法将使IM个体在相同疾病状态下的不同免疫细胞的表征和基因表达成为可能，这将扩展我们对EBV感染免疫病理学的理解。