İnsan Donör Arka Segmentlerinde Göz İçi ve İntrakraniyal Basıncın Modülasyonu için Translaminer Otonom Sistem Modeli
Summary
Translaminer otonom sistemin kullanımını açıklar ve detaylandırırız. Bu sistem, glaukomöz optik nöropatinin özelliklerini taklit eden translaminer basınç gradyanı oluşturmak için segmentin içindeki basıncı (göz içi) ve optik siniri (intrakraniyal) çevreleyen basıncı bağımsız olarak düzenlemek için insan arka segmentini kullanır.
Abstract
Glokom patogenez ile ilgili çeşitli patojenik paradigmaları tanımlayabilen intrakraniyal basınç (ICP) ve göz içi basıncı (Gİb) kullanarak hastalık etiyolojisi ex vivo’yu hedef alabilen yeni bir preklinik insan modeline karşılanmamış bir ihtiyaç vardır. Ex vivo insan ön segment perfüzyon organ kültürü modelleri daha önce glokom patogenezinin keşfi ve terapötiklerin test edilmesi için etkili teknolojiler olarak başarıyla kullanılmıştır ve uygulanmıştır. Ex vivo insan organ sistemleri üzerinde yapılan preklinik ilaç taraması ve araştırmaları klinik araştırmalara daha fazla çevrilebilir. Bu makalede translaminar otonom sistem (TAS) adı verilen yeni bir ex vivo insan translaminer basınç modelinin üretimi ve çalışması ayrıntılı olarak açıklanmaktadır. TAS modeli, insan donör arka segmentlerini kullanarak ICP ve Gİb’i bağımsız olarak düzenleyebilir. Model, patogenezin preklinik bir şekilde incelenmesine izin verir. Oftalmik araştırmalarda canlı hayvanların kullanımını azaltabilir. In vitro deneysel modellerin aksine, optik sinir kafası (ONH) doku yapısı, karmaşıklığı ve bütünlüğü ex vivo TAS modeli içinde de korunabilir.
Introduction
Son anketlerdeki küresel tahminler, 39 milyon’ı görme engelli olmak üzere 285 milyon kişinin görme bozukluğuyla yaşadığını gösteriyor1. 2010 yılında, Dünya Sağlık Örgütü, listelenen dokuz önde gelen körlük nedenlerinden üçünün gözün arka segmentinde meydana geldiğini belgeledi1. Arka segment göz hastalıkları retina, koroid ve optik siniri içerir2. Retina ve optik sinir beynin merkezi sinir sistemi (CNS) uzantılarıdır. Retina ganglion hücresi (RGC) aksonları, optik siniri oluşturmak için optik sinir başlığından (ONH) gözden çıktıkları için hasara karşı savunmasızdır3. ONH, lamina cribrosa (LC)4 adı verilen bağ dokusu ışınlarının 3D mesh çalışması nedeniyle RGC aksonları için en savunmasız nokta olmaya devam etmektedir. ONH, glokomda RGC aksonlarına hakaretin ilk yeridir5,6,7 ve ONH içindeki gen ekspresyon değişiklikleri oküler hipertansiyon ve glokom modellerinde çalışılmıştır8,9,10. RGC aksonları, göz içi basıncı (Gİb) olarak adlandırılan göz içi bölmesi arasındaki basınç farkları ve intrakraniyal basınç (ICP)11 adı verilen dış perioptik subaraknoid alanı içindeki basınç farkları nedeniyle ONH’de hassastır. LC bölgesi, 10-21 mmHg ve ICP arasında değişen Gİb ile normal basınç farklarını koruyarak her iki alanı da ayırır ve 5-15 mmHg12 arasında değişen bir değere sahiptir. İki oda arasındaki lamina arasındaki basınç farkına translaminer basınç gradyanı (TLPG)13 denir. Glokomun önemli bir risk faktörü yüksek IOP14’tür.
Artan Gİb, laminar bölge içindeki ve genelindeki gerginliği artırır6,15,16. İnsanlarda ve hayvan modellerinde deneysel gözlemler ONH’yi aksonal hasarın ilk bölgesi olarak göstermektedir17,18. ONH’de glaukom hasarına neden olan Gİb ile ilgili stres ve suşun biyomekanik paradigması da glokomun patofizyolojisini etkiler19,20,21. İnsanlarda basınç kaynaklı değişiklikler RGC axons22’ye mekanik olarak zarar verse de, lamina içinde kollajen plakaları olmayan kemirgenler de glokom geliştirebilir7,23. Ayrıca, yüksek Gİb primer açık açılı glokom hastalarında en belirgin risk faktörü olmaya devam ederken, normal gerilim glokom hastalarında yüksek Gİb olmasa bile glaukom optik nöropati gelişir. Ayrıca, optik sinir hasarı göstermeyen oküler hipertansif hastaların bir alt kümesi de vardır. Ayrıca beyin omurilik sıvı basıncının (CSFp) glokom patogenezinde rol oynayabileceği ileri sürülmektedir. Kanıtlar, GLOKOM hastalarında ICP’nin normal bireylere göre ~5 mmHg’ye düşürüldüğü ve böylece translaminer basıncın artmasına neden olduğu ve hastalıkta önemli bir rol oynadığı göstermektedir24,25. Daha önce, bir köpek modelinde, Gİb ve CSFp değişikliklerini kontrol ederek, optik diskin büyük yer değiştirmeleri olabileceği gösterilmiştir26. Porcine gözlerde CSFp’nin yükseltilmesi, LC bölgesi ve retrolaminer sinir dokusunda da artmış ana zorlanma göstermiştir. RGC’ler ve LC bölgesi üzerindeki artan yük, aksonal taşıma tıkanıklığı ve RGC’lerin kaybına katkıda bulunur27. RGC’lerin progresif dejenerasyonu trofik destek kaybı28,29, inflamatuar süreçlerin/immün regülasyonun uyarılması30,31 ve apoptotik efektörler29,32,33,34,35 ile ilişkilendirilmiştir. Ek olarak, aksonal yaralanma (Şekil 3) RPC’ler üzerinde zararlı etkilere neden olur ve rejeneratif başarısızlığı tetikler36,37,38,39. Gİb’in etkileri iyi çalışılmış olsa da anormal translaminer basınç değişimleri üzerinde minimal araştırma gerçeklenmiştir. Glokom için çoğu tedavi Gİb stabilize odaklanır. Bununla birlikte, Gİb’in düşürülmesi hastalığın ilerlemesini yavaşlatsa da, görme alanı kaybını tersine çevirmez ve RGC’lerin tam kaybını önlemez. Glokomda basınca bağlı nörodejeneratif değişiklikleri anlamak RGC ölümünü önlemek için çok önemli olacaktır.
Mevcut kanıtlar, travmatik veya nörodejeneratif görme bozukluklarından muzdarip hastalarda çeşitli mekanik, biyolojik veya fizyolojik değişikliklere bağlı translaminer basınç modülasyonlarının önemli görme kaybına neden olabileceğini göstermektedir. Şu anda, ex vivo insan ONH içinde glaukomöz biyomekanik hasarın incelenmesine izin verebilecek gerçek bir preklinik insan posterior segment modeli yoktur. Gözün arka segmentinin gözlemlenmesi ve tedavisi oftalmolojide büyük bir zorluktur27. Yüksek eliminasyon oranları, kan-retina bariyeri ve potansiyel immünolojik yanıtlar da dahil olmak üzere arka gözü hedeflemek için fiziksel ve biyolojik engeller vardır40. Yeni ilaç hedefleri için çoğu etkinlik ve güvenlik testi in vitro hücresel ve in vivo hayvan modelleri kullanılarak gerçekleştirilir41. Oküler anatomi karmaşıktır ve in vitro çalışmalar doku modeli sistemlerinin sunduğu anatomik ve fizyolojik engelleri doğru bir şekilde taklit etmez. Hayvan modelleri farmakokinetik çalışmalar için bir gereklilik olsa da, insan arka gözünün oküler fizyolojisi retinanın hücresel anatomisi, vaskülat ve ONH41,42 dahil olmak üzere çeşitli hayvan türleri arasında değişebilir.
Canlı hayvanların kullanımı yoğun ve ayrıntılı etik düzenlemeler, yüksek finansal bağlılık ve etkili tekrarlanabilirlik gerektirir43. Son zamanlarda, deneysel araştırmalarda hayvanların etik kullanımı için birden fazla kılavuz ortaya çıktı44,45,46. Hayvan testlerine bir alternatif, hastalık patogenezini araştırmak için ex vivo insan gözü modellerinin kullanılması ve ONH hasarını korumak için ilaçların potansiyel analizidir. İnsan ölüm sonrası dokusu, özellikle insan nörodejeneratif hastalıkları durumunda insan hastalığı paradigmalarını incelemek için değerli bir kaynaktır, çünkü hayvan modellerinde geliştirilen potansiyel ilaçların tanımlanması insanlara çevrilebilir olma ihtiyacını gerektirir47. Ex vivo insan donör dokusu, insan bozukluklarının incelenmesi için yoğun olarak kullanılmıştır47,48,49 ve insan ön segment perfüzyon organ kültürü sistemleri daha önce yükseltilmiş Gİb50,51,52 patofizyolojisini incelemek için benzersiz bir ex vivo modeli sağlamıştır.
İnsan gözünde Gİb ve ICP ile ilgili translaminer basıncı incelemek için, insan donör gözlerinden arka segmentleri kullanarak Gİb ve ICP’yi bağımsız olarak düzenleyebilen iki odalı bir translaminer otonom sistem (TAS) tasarladık ve geliştirdik. Translaminer basıncı inceleyen ve TLPG’nin ONH üzerindeki biyomekanik etkilerinden yararlanan ilk ex vivo insan modelidir.
Bu ex vivo insan TAS modeli keşfetmek ve IOP veya ICP kronik yükseklik nedeniyle meydana gelen hücresel ve fonksiyonel modifikasyonları sınıflandırmak için kullanılabilir. Bu raporda, TAS insan posterior segment modelinin parçalanması, kurulması ve izlenmesinin adım adım protokolünü detaylandırıyoruz. Protokol, diğer araştırmacıların biyomekanik hastalık patogenezini incelemek için bu yeni eks vivo basınçlı insan posterior segment modelini etkili bir şekilde yeniden üretmelerine izin verecektir.
Protocol
Representative Results
Discussion
İnsan ölüm sonrası dokuları, insan nörodejeneratif hastalıklarının incelenmesi için özellikle değerli bir kaynaktır, çünkü hayvan modellerinde geliştirilen potansiyel ilaçların tanımlanmasının insanlara çevrilebilir olması gerekir47. İnsan Gİb yüksekliğinin etkileri iyi belirlenmiştir, ancak anormal ONH translaminer basınç değişiklikleri üzerinde minimum araştırma gerçekleşmiştir. Birden fazla hayvan modeli ve insan ONH’nin sonlu modellemesi mevcut olsa da, t…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Bu projenin finansmanı Dr. Colleen M. McDowell’ın ihtiyati fonları aracılığıyla sağlandı. Bu çalışma kısmen Research to Prevent Blindness, Inc.’den UW Madison Oftalmoloji ve Görsel Bilimler Bölümü’ne sınırsız bir hibe ile desteklenmiştir. Dr. Abbot F. Clark ve Weiming Mao’ya perfüzyon organ kültürü modelindeki teknik yardımları için teşekkür ederiz. Lions Göz Nakil ve Araştırma Enstitüsü’ne (Tampa, FL) insan donör gözlerini sağladığı için teşekkür ederiz.
Materials
| #122, 1-1/8" Inside x 1-5/16" Outside Diam, Viton O-Ring, 3/32" Thick, 755 Durometer 50 Pack |
Amazon | B07DRGPPZJ | |
| 114 Buna-N O-Ring, 70A Durometer, Black, 5/8" ID, 13/16" OD, 3/32" Width (Pack of 100) | Amazon | B000FMYRHK | |
| 30 mL Syringes without Needle | Vitality Medical | 302832 | |
| 3-Way Stopcock, 2 Female Luer Locks, Swivel Male Luer Lock, Vented Cap | QOSINA | 2C6201 | |
| 4-40 X 1/2 PH PAN MS SS/CHROME & appropriate sized phillips screwdriver | Brikksen Stainless Steel Fastners | PPMSSSCH4C.5 | |
| ANPROLENE 16 LARGE AMPULE | Fisher Scientific | NC9085343 | |
| Betadine | Purdue | PUR1815001EACH | |
| Corning 100 x 20mm tissue-culture treated culture dishes | Sigma-Aldrich | CLS430167-100EA | |
| Corning L-glutamine Solution | Fisher Scientific | MT25005CI | |
| Covidien 3033 Curity Gauze Sponge, 4" x 4", 12-Ply, Sterile, 1200/CS | Med Plus Medical Supply | COV-3033-CS | |
| Dressing Forceps Delicate Curved (serrated) | Katena | K5-4010 | |
| Dumont #5 – Fine Forceps | F.S.T. | 11254-20 | |
| Eye Scissors Standard Curved | Katena | K4-7410 | |
| Falcon 150 x 15mm Plain Sterile Disposable Petri Dishes | Capitol Scientific | 351058 | |
| Fisherbrand 4 oz. Specimen Containers | Fisher Scientific | 16-320-730 | |
| Fisherbrand Instant Sealing Sterilization Pouches | Fisher Scientific | 01-812-54 | |
| Fisherbrand Instant Sealing Sterilization Pouches | Fisher Scientific | 01-812-55 | |
| Fisherbrand Instant Sealing Sterilization Pouches | Fisher Scientific | 01-812-58 | |
| HyClone Dulbecco's Modified Eagles Medium | Fisher Scientific | SH3024302 | |
| HyClone Penicillin Streptomycin 100X Solution | Fisher Scientific | SV30010 | |
| Hydrophilic Filter with Female Luer Lock Inlet, Male Luer Slip Outlet, Blue and Clear | Qosina | 28217 | |
| Hydrostatic pressure transducers, DELTRAN ® II, Catalog # DPT-200 with a 3CC/HR flow rate | AD instruments | DPT-200 | |
| JG15-0.5HPX 15 Gauge 0.5" NT Premium Series Dispensing Tip 50/Box | Jenson Global | JG15-0.5HPX 15 | |
| Keyence B2‐X710 microscope | Keyence | B2-X710 | |
| LabChart 8 | AD instruments | LabChart 8 | |
| Leica ST5020 Multi-stainer | Leica | ST5020 | |
| Non-Vented Universal Luer Lock Cap, White | QOSINA | 65811 | |
| Octal Bridge Amp (Model # FE228) | AD instruments | FE228 | |
| Pharmco Products ETHYL ALCOHOL, 200 PROOF | Fisher Scientific | NC1675398 | |
| Phosphate Buffered Solution (PBS) | Sigma-Aldrich | D8537-500ML | |
| PowerLab 8/35 (Model # PL3508) | AD instruments | PL3508 | |
| ProLong Gold Antifade Mountant with DAPI | ThermoFisher | P36935 | |
| Push-to-Connect Tube Fitting for Air and Water Straight Adapter, 1/8" Tube OD x 1/8 NPT Male | McMAster-Carr | 7880T113 | |
| Push-to-Connect Tube Fitting with Universal Thread for Air and Water, Adapter, 1/8" Tube OD x 1/8 Pipe | McMAster-Carr | 51235K101 | |
| Saint-Gobain Tygon S3 E-3603 Flexible Tubing 500 ft. | Fisher Scientific | 14-171-268 | |
| Superblock T20 | Fisher Scientific | PI37536 | |
| Surgical Scissors – Sharp-Blunt | F.S.T. | 14001-14 | |
| Tissue Forceps Delicate 1×2 Teeth Curved | Katena | K5-4110 | |
| Translaminar Autonomous System (TAS) | University of North Texas Health Science Center | N/A | |
| USA Size 030 O-ring Buna-N, B1000, 70 Durometer, Black, Buna-N (NBR, Nitrile, Buna) |
Marco Rubber & Plastics | B1000-030 |
References
- Pascolini, D., Mariotti, S. P. Global estimates of visual impairment: 2010. The British Journal of Ophthalmology. 96 (5), 614-618 (2012).
- Bastawrous, A., et al. Posterior segment eye disease in sub-Saharan Africa: review of recent population-based studies. Tropical Medicine & International Health. 19 (5), 600-609 (2014).
- Morgan, J. E. Circulation and axonal transport in the optic nerve. Eye. 18 (11), 1089-1095 (2004).
- Burgoyne, C. F. A biomechanical paradigm for axonal insult within the optic nerve head in aging and glaucoma. Experimental Eye Research. 93 (2), 120-132 (2011).
- Quigley, H. A., Addicks, E. M. Chronic experimental glaucoma in primates. II. Effect of extended intraocular pressure elevation on optic nerve head and axonal transport. Investigative Ophthalmology, Visual Science. 19 (2), 137-152 (1980).
- Quigley, H. A., Addicks, E. M., Green, W. R., Maumenee, A. E. Optic nerve damage in human glaucoma. II. The site of injury and susceptibility to damage. Archives of Ophthalmology. 99 (4), 635-649 (1981).
- Howell, G. R., et al. Axons of retinal ganglion cells are insulted in the optic nerve early in DBA/2J glaucoma. The Journal of Cell Biology. 179 (7), 1523-1537 (2007).
- Johnson, E. C., Jia, L., Cepurna, W. O., Doser, T. A., Morrison, J. C. Global changes in optic nerve head gene expression after exposure to elevated intraocular pressure in a rat glaucoma model. Investigative Ophthalmology, Visual Science. 48 (7), 3161-3177 (2007).
- Howell, G. R., et al. Molecular clustering identifies complement and endothelin induction as early events in a mouse model of glaucoma. Journal of Clinical Investigation. 121 (4), 1429-1444 (2011).
- Qu, J., Jakobs, T. C. The Time Course of Gene Expression during Reactive Gliosis in the Optic Nerve. PloS one. 8 (6), 67094 (2013).
- Berdahl, J. P., Fautsch, M. P., Stinnett, S. S., Allingham, R. R. Intracranial pressure in primary open angle glaucoma, normal tension glaucoma, and ocular hypertension: a case-control study. Investigative Ophthalmology, Visual Science. 49 (12), 5412-5418 (2008).
- Berdahl, J. P., Allingham, R. R. Intracranial pressure and glaucoma. Current Opinion in Ophthalmology. 21 (2), 106-111 (2010).
- Morgan, W. H., et al. The correlation between cerebrospinal fluid pressure and retrolaminar tissue pressure. Investigative Ophthalmology, Visual Science. 39 (8), 1419-1428 (1998).
- Leske, M. C., Connell, A. M., Wu, S. Y., Hyman, L. G., Schachat, A. P. Risk factors for open-angle glaucoma. The Barbados Eye Study. Archives of Ophthalmology. 113 (7), 918-924 (1995).
- Quigley, H. A., Green, W. R. The histology of human glaucoma cupping and optic nerve damage: clinicopathologic correlation in 21 eyes. Ophthalmology. 86 (10), 1803-1830 (1979).
- Burgoyne, C. F., Downs, J. C., Bellezza, A. J., Hart, R. T. Three-dimensional reconstruction of normal and early glaucoma monkey optic nerve head connective tissues. Investigative Ophthalmology, Visual Science. 45 (12), 4388-4399 (2004).
- Diekmann, H., Fischer, D. Glaucoma and optic nerve repair. Cell and Tissue Research. 353 (2), 327-337 (2013).
- Nickells, R. W., Howell, G. R., Soto, I., John, S. W. Under pressure: cellular and molecular responses during glaucoma, a common neurodegeneration with axonopathy. Annual Review of Neuroscience. 35, 153-179 (2012).
- Burgoyne, C. F., Downs, J. C. Premise and prediction-how optic nerve head biomechanics underlies the susceptibility and clinical behavior of the aged optic nerve head. Journal of Glaucoma. 17 (4), 318-328 (2008).
- Sigal, I. A., Ethier, C. R. Biomechanics of the optic nerve head. Experimental Eye Research. 88 (4), 799-807 (2009).
- Sigal, I. A., Flanagan, J. G., Tertinegg, I., Ethier, C. R. Modeling individual-specific human optic nerve head biomechanics. Part I: IOP-induced deformations and influence of geometry. Biomechanics and Modeling in Mechanobiology. 8 (2), 85-98 (2009).
- Morgan, J. E., Jeffery, G., Foss, A. J. Axon deviation in the human lamina cribrosa. The British Journal of Ophthalmology. 82 (6), 680-683 (1998).
- Danias, J., et al. Quantitative analysis of retinal ganglion cell (RGC) loss in aging DBA/2NNia glaucomatous mice: comparison with RGC loss in aging C57/BL6 mice. Investigative Ophthalmology, Visual Science. 44 (12), 5151-5162 (2003).
- Berdahl, J. P., Allingham, R. R., Johnson, D. H. Cerebrospinal fluid pressure is decreased in primary open-angle glaucoma. Ophthalmology. 115 (5), 763-768 (2008).
- Fleischman, D., Allingham, R. R. The role of cerebrospinal fluid pressure in glaucoma and other ophthalmic diseases: A review. Saudi Journal of Ophthalmology. 27 (2), 97-106 (2013).
- Morgan, W. H., et al. Optic disc movement with variations in intraocular and cerebrospinal fluid pressure. Investigative Ophthalmology, Visual Science. 43 (10), 3236-3242 (2002).
- Feola, A. J., et al. Deformation of the Lamina Cribrosa and Optic Nerve Due to Changes in Cerebrospinal Fluid Pressure. Investigative Ophthalmology & Visual Science. 58 (4), 2070-2078 (2017).
- Koeberle, P. D., Bahr, M. Growth and guidance cues for regenerating axons: where have they gone. Journal of Neurobiology. 59 (1), 162-180 (2004).
- Kermer, P., Klocker, N., Bahr, M. Neuronal death after brain injury. Models, mechanisms, and therapeutic strategies in vivo. Cell and Tissue Research. 298 (3), 383-395 (1999).
- Koeberle, P. D., Gauldie, J., Ball, A. K. Effects of adenoviral-mediated gene transfer of interleukin-10, interleukin-4, and transforming growth factor-beta on the survival of axotomized retinal ganglion cells. Neuroscience. 125 (4), 903-920 (2004).
- Kipnis, J., et al. Neuronal survival after CNS insult is determined by a genetically encoded autoimmune response. The Journal of Neuroscience : The Official Journal of the Society for Neuroscience. 21 (13), 4564-4571 (2001).
- Isenmann, S., Wahl, C., Krajewski, S., Reed, J. C., Bahr, M. Up-regulation of Bax protein in degenerating retinal ganglion cells precedes apoptotic cell death after optic nerve lesion in the rat. The European Journal of Neuroscience. 9 (8), 1763-1772 (1997).
- Kermer, P., et al. Caspase-9: involvement in secondary death of axotomized rat retinal ganglion cells in vivo. Brain research. Molecular Brain Research. 85 (1-2), 144-150 (2000).
- Kermer, P., Klocker, N., Labes, M., Bahr, M. Inhibition of CPP32-like proteases rescues axotomized retinal ganglion cells from secondary cell death in vivo. The Journal of Neuroscience : The Official Journal of the Society for Neuroscience. 18 (12), 4656-4662 (1998).
- Kikuchi, M., Tenneti, L., Lipton, S. A. Role of p38 mitogen-activated protein kinase in axotomy-induced apoptosis of rat retinal ganglion cells. The Journal of Neuroscience : The Official Journal of the Society for Neuroscience. 20 (13), 5037-5044 (2000).
- Barron, K. D., Dentinger, M. P., Krohel, G., Easton, S. K., Mankes, R. Qualitative and quantitative ultrastructural observations on retinal ganglion cell layer of rat after intraorbital optic nerve crush. Journal of Neurocytology. 15 (3), 345-362 (1986).
- Misantone, L. J., Gershenbaum, M., Murray, M. Viability of retinal ganglion cells after optic nerve crush in adult rats. Journal of Neurocytology. 13 (3), 449-465 (1984).
- Bahr, M. Live or let die – retinal ganglion cell death and survival during development and in the lesioned adult CNS. Trends in Neurosciences. 23 (10), 483-490 (2000).
- Klocker, N., Zerfowski, M., Gellrich, N. C., Bahr, M. Morphological and functional analysis of an incomplete CNS fiber tract lesion: graded crush of the rat optic nerve. Journal of Neuroscience Methods. 110 (12), 147-153 (2001).
- Del Amo, E. M., et al. Pharmacokinetic aspects of retinal drug delivery. Progress in Retinal and Eye Research. 57, 134-185 (2017).
- Rousou, C., et al. A technical protocol for an experimental ex vivo model using arterially perfused porcine eyes. Experimental Eye Research. 181, 171-177 (2019).
- Vézina, M. . Assessing Ocular Toxicology in Laboratory Animals. , 1-21 (2012).
- de Boo, J., Hendriksen, C. Reduction strategies in animal research: a review of scientific approaches at the intra-experimental, supra-experimental and extra-experimental levels. Alternatives to Laboratory Animals. 33 (4), 369-377 (2005).
- Kirk, R. G. W. Recovering The Principles of Humane Experimental Technique: The 3Rs and the Human Essence of Animal Research. Science, Technology, & Human Values. 43 (4), 622-648 (2018).
- Burden, N., Chapman, K., Sewell, F., Robinson, V. Pioneering better science through the 3Rs: an introduction to the national centre for the replacement, refinement, and reduction of animals in research (NC3Rs). Journal of the American Association for Laboratory Animal Science. 54 (2), 198-208 (2015).
- Singh, J. The national centre for the replacement, refinement, and reduction of animals in research. Journal of Pharmacology and Pharmacotherapeutics. 3 (1), 87-89 (2012).
- White, K., et al. Effect of Postmortem Interval and Years in Storage on RNA Quality of Tissue at a Repository of the NIH NeuroBioBank. Biopreservation and Biobanking. 16 (2), 148-157 (2018).
- Ervin, J. F., et al. Postmortem delay has minimal effect on brain RNA integrity. Journal of Neuropathology & Experimental Neurology. 66 (12), 1093-1099 (2007).
- Heinrich, M., Matt, K., Lutz-Bonengel, S., Schmidt, U. Successful RNA extraction from various human postmortem tissues. International Journal of Legal Medicine. 121 (2), 136-142 (2007).
- Johnson, D. H., Tschumper, R. C. Human trabecular meshwork organ culture. A new method. Investigative Ophthalmology, Visual Science. 28 (6), 945-953 (1987).
- Gottanka, J., Chan, D., Eichhorn, M., Lutjen-Drecoll, E., Ethier, C. R. Effects of TGF-beta2 in perfused human eyes. Investigative Ophthalmology, Visual Science. 45 (1), 153-158 (2004).
- Pang, I. H., McCartney, M. D., Steely, H. T., Clark, A. F. Human ocular perfusion organ culture: a versatile ex vivo model for glaucoma research. Journal of Glaucoma. 9 (6), 468-479 (2000).
- Aryee, M. J., Gutierrez-Pabello, J. A., Kramnik, I., Maiti, T., Quackenbush, J. An improved empirical bayes approach to estimating differential gene expression in microarray time-course data: BETR (Bayesian Estimation of Temporal Regulation). BMC Bioinformatics. 10, 409 (2009).
- Feola, A. J., et al. Finite Element Modeling of Factors Influencing Optic Nerve Head Deformation Due to Intracranial Pressure. Investigative Ophthalmology, Visual Science. 57 (4), 1901-1911 (2016).
- Downs, J. C. Optic nerve head biomechanics in aging and disease. Experimental Eye Research. 133, 19-29 (2015).
- Downs, J. C., Roberts, M. D., Burgoyne, C. F. Mechanical environment of the optic nerve head in glaucoma. Optometry and Vision Science. 85 (6), 425-435 (2008).
- Downs, J. C., et al. Viscoelastic characterization of peripapillary sclera: material properties by quadrant in rabbit and monkey eyes. Journal of Biomechanical Engineering. 125 (1), 124-131 (2003).
- Wagner, A. H., et al. Exon-level expression profiling of ocular tissues. Experimental Eye Research. 111, 105-111 (2013).
- Pels, E., Beele, H., Claerhout, I. Eye bank issues: II. Preservation techniques: warm versus cold storage. International Ophthalmology. 28 (3), 155-163 (2008).
- Reinhard, K., et al. Hypothermia Promotes Survival of Ischemic Retinal Ganglion Cells. Investigative Ophthalmology, Visual Science. 57 (2), 658-663 (2016).
