Изоляция и определение внесосудистой иммунных клеток сердца

Различные формы миокарда стресса или травмы, включая ишемического (ишемии-реперфузии или инфаркт миокарда) и не связанная с ИБС (гипертонии или миокардит), поощрять набор воспалительных клеток с репаративные и защитные, но и патогенные свойства. Еще в 1891 Ромберга впервые описал наличие клеточных инфильтратов в миокарде больных, инфицированных тифа и скарлатина¹. Однако детальное изучение сердца иммунных клеток требует разработки методов более продвинутые Иммунофенотипирование. Как следствие только недавно мы начали понимать, что разнообразие населения иммунных клеток с важным поддержание роли при установившемся находится в миокарде.

Гистология был и до сих пор является наиболее распространенным методом характеризовать сердечной клетки иммунной системы во время воспаления. Однако хотя Гистологическая картина представляет собой ценный инструмент диагностики, его использование в изучении сердечной иммунных клеток имеет важные ограничения. Иммунные клетки, проживающих в миокарде представляют собой весьма незначительную часть общего числа клеток и более или менее равномерно распределены в пропорционально необъятный космос. Аналогично некоторые формы сердца воспаления, таких как вирусный миокардит, показывают координационных структур воспаления. Это означает, что точный анализ иммунной системы сердца часто требуют более высокой степени гистологической выборки, увеличивая стоимость снижения отклонений. Кроме того гистология обеспечивает очень ограниченное количество полезной информации в ячейки идентификации (например , количество параметров). С постоянно растущим числом подмножеств клеток, которые требуют использования нескольких маркеров выражение (в том числе поверхностных маркеров, факторы транскрипции или выделяется молекул) проточной цитометрии зарекомендовал себя как самый мощный инструмент для иммунофенотипирование, Благодаря низкой стоимости и высокой пропускной способности.

Использование методов Иммунофенотипирование тесно зависит от развития эффективного переваривания протоколов, разрешенных для одного клетки анализа большого числа клеток. Разработка исчерпывающие протоколы клетки добычи открыл новое окно возможностей в исследовании сердца иммунологии. Благодаря сочетанию пищеварение, проточной цитометрии и transcriptomics основных популяций макрофаги и дендритные клетки, проживающих в самом сердце были характерны^2,3. Наиболее распространенным населения сердечной иммунных клеток во время устойчивого состояния являются CD64⁺MerTK⁺ макрофаги, которые могут быть далее разделены на основе их выражения CCR2 или CD11c². CCR2⁺ макрофаги происходят от взрослого костного кроветворения, тогда как большинство из CCR2^– макрофаги, которые выражают высокий или низкий уровень MHC-II, в основном дородовой происхождения. Макрофаги выполняют ключевые функции, такие как ремонт⁴ и удаления мусора⁵ во время травмы или поддержки электрические подключения⁶ в стационарном состоянии. Во время различных форм воспаления происходят важные приток Ly6C^Привет MHC-II^Ло CD64^int моноцитов, который позже дифференцироваться в Ly6C^Привет CCR2⁺ макрофаги^2,7 . Значительно меньше, но важно, популяция клеток, проживающих в миокарде здоровых людей состоит из дендритные клетки^8,9. Два основных подмножества сердечной обычных DCs (cDCs) недавно характеризовались: cDC1 (CD103⁺ DCs) и cDC2 (CD11b⁺ DCs). РСУ играют важную роль в обороне против инфекции⁸ , но могут также способствовать самоповреждения во время воспаления, особенно во время инфаркта миокарда⁹.

Здесь мы опишем простой метод для изоляции жизнеспособных сердца иммунных клеток от мыши миокарда. Метод сочетает в себе ферментативные и механических пищеварение с фильтрацией клетки фильтр для того, чтобы получить одну ячейку подвеска, которая может быть проанализирована, или неразделимая, поток цитометрии сортировки или магнитный шарик обогащения. Точные измерения внесосудистой клеток миокарда требуют сердца перфузии для удаления возможных загрязнений из крови сердца microvasculature. Кроме того мы представляем необязательный шаг внутрисосудистого маркировки иммунных клеток, которые могут использоваться для дальнейшего дифференцировать миокарда клетки от внутрисосудистого загрязняющих веществ, основанный на Галкина et al. протокол¹⁰. Наконец мы представляем основной поток cytometry анализ для выявления основных субпопуляций макрофагов и cDC.