Kraal gebaseerd Multiplex Assay voor analyse van Tear Cytokine profielen

Tranen worden geproduceerd door de traanklier en accessoire klieren en jas van de buitenkant van het oog. Traanfilm bestaat uit een buitenste lipide-laag en een waterige binnenlaag die oplosbare eiwitten bevat, mucinen en membraan gebonden mucinen. Tranen voorkomen van microbiële invasie, voedingsstoffen te verstrekken en geven smering aan de oculaire oppervlakte. Tranen fungeren als intermediair tussen de lucht en weefsel voor zuurstoftransport naar het hoornvlies. ¹ traanfilm is samengesteld uit eiwitten, koolhydraten, lipiden en elektrolyten. De associatie tussen scheur eiwitten met oogbeschadigingen en/of en systemische ziekten zoals glaucoom, droge oogziekte, vernal conjunctivitis, diabetes mellitus, schildklier-geassocieerde orbitopathy en kanker is geconstateerd in verschillende studies. ^{2 , 3 , 4} scheur monsters kunnen worden genomen door microcapillary buizen of scheur stroom strips (Schirmer strips). Daarnaast is de Schirmertest een standaardprocedure in het hoornvlies en de refractieve chirurgie klinieken, waarvan de resultaten kunnen worden gebruikt voor de cytokine analyse tests uitgevoerd. Niet-invasieve sample collectie, toegankelijkheid van het bio-model, en de vereniging van scheur samenstelling met verschillende fysiologische en pathologische omstandigheden maken scheuren film een potentiële bron van biomarkers voor verschillende oogbeschadigingen en/of en systemische ziekten. ^{4 , 5 , 6}

Scheur cytokines speelt een belangrijke rol bij het bestuderen van de oculaire oppervlakte gezondheid en inflammatoire voorwaarden van verschillende oogbeschadigingen en/of ziekten. ⁷ abnormale concentraties van verschillende cytokines in scheur monsters werden gemeld te worden geassocieerd met droge oogziekte, vernal keratoconjunctivitis (VKC), atopische keratoconjunctivitis (AKC), seizoensgebonden allergische conjunctivitis en uveitis. ^{8 , 9 , 10 , 11 , 12 , 13} scheur eiwitten kunnen door traditionele methoden als massaspectrometrie, het westelijke bevlekken en enzyme-linked immunosorbent assays (ELISA) worden geanalyseerd. ^{14 , 15} de beperkingen van deze methoden zijn echter slechte gevoeligheid en een grotere hoeveelheid monster nodig zijn voor de analyse van meerdere scheur cytokines in elke patiënt. ^{16 , 17} kraal gebaseerd multiplex assays zijn ontwikkeld om meerdere analyten in complex mengsel monsters te analyseren en met succes toegepast op scheuren monsters te analyseren van meerdere cytokines in verschillende ziekten. ^{6 , 18} A combinatie van sandwich-ELISA en stroom cytometry technieken kunnen deze testen worden gevoeliger dan ELISA voor de kwantificering van meerdere analyten in één sample. ¹⁹ deze methode kan worden toegepast op een verscheidenheid van klinische monsters en cel cultuur supernatant en helpt in de studie van de immuunrespons in meerdere pathofysiologische omstandigheden. ^{20 , 21 , 22 , 23 , 24}

Er zijn verschillende studies vergelijken kraal gebaseerd multiplex testen met ELISA en hebben gemeld een correlatie tussen de methoden. Loo et al. vergeleken kraal gebaseerd multiplex assay met conventionele ELISA voor de opsporing van adiponectin, resistin, leptine en ghreline in menselijke specimens van serum of plasma en gemeld van een sterke correlatie (r > 0.9) tussen de testen. ²⁵ Dupont et al. rapporteerde een sterke correlatie tussen kraal gebaseerd multiplex assays en ELISA voor de opsporing van IL-1β, IL-4, IL-5, IL-6, IL-10, IFN-ϒ en TNF-α in phytohemagglutinin en lipopolysaccharide gestimuleerd volbloed verzameld van zwangere vrouwen. ²⁶ Pickering et al. rapporteerde een andere sterke correlatie tussen kraal gebaseerd multiplex assay en ELISA voor de opsporing van serum antilichamen tegen Haemophilus influenzae type b polysaccharide (r = 0,96), toxoids van Clostridium tetani (r = 0,96), en Corynebacterium diphtheriae (r = 0.91). ²⁷ Biagini et al. rapporteerde een hoge positieve correlatie (r = 0.852) tussen kraal gebaseerd multiplex assay en ELISA voor de opsporing van Bacillus anthracis anti-PA IgG in serummonsters. ²⁸ Wang et al. rapporteerde een correlatie tussen kraal gebaseerd multiplex assay en ELISA voor de opsporing van de ziekte van Alzheimer biomarkers amyloid-β 42 (r = 0.77), totale tau (r = 0.94), en tau phosphorylated op aminozuur 181 (r = 0.82) in monsters van de cerebrospinale vloeistof. ²⁹ deze studies hebben aangetoond dat de toepasselijkheid van de kraal multiplex assays gebaseerd op diverse klinische monsters, kleinere steekproef volume eisen en een correlatie met standaard ELISA, waardoor kraal gebaseerd multiplex assays een veelbelovende alternatief voor de traditionele methoden van de ELISA voor de opsporing van meerdere analyten in verschillende soort monsters in andere ziekte fenotypen. Hier beschrijven we een gestandaardiseerd protocol voor kraal gebaseerd multiplex assay voor het cytokine profielen voor 41 analyten in scheur monsters verzameld van gezonde proefpersonen gebruik Schirmer strips.