Анализ слезоточивый фильм цитокинов помогает в изучении различных глазных заболеваний. Мультиплекс шарик на основе простых и чувствительной и включить тестирование нескольких целей в образцах с небольшими объемами. Здесь мы описываем протокол для слезоточивый фильм цитокина профилирования с использованием бисера на основе мультиплекс пробирного.
Слезной пленки представляет собой сложную смесь липидов, белков и минералов, которая охватывает внешней поверхности глаза, тем самым обеспечивая смазки, питания и защиты в базовой ячейки. Анализ слез является новой областью для идентификации биомаркеров для прогнозирования, диагностики и прогноз различных глазных заболеваний. Слезы легко доступны и их коллекции является неинвазивным. Таким образом продвижение технологии приобретают известность для идентификации нескольких аналитов в слезах для изучения изменений в составе белка или метаболита и его связь с патологических состояний. Слезоточивый цитокины являются идеальным биомаркеров для изучения здоровья глазной поверхности, а также помочь в понимании механизмов различных глазной поверхности расстройств, таких как сухой глаз болезни и весеннем конъюнктивите. Шарик на основе мультиплекс анализов имеют возможность обнаружения нескольких аналитов в небольшое количество образцов с высокой чувствительностью. Здесь мы описываем стандартизированный протокол взятия образца, извлечения и анализа цитокина профилирования с использованием бисера мультиплекс пробирного.
Слезы производятся слезных желез и аксессуаров желез и пальто внешней поверхности глаза. Слезной пленки состоит из наружной липидного слоя и внутренний водный слой, который включает в себя растворимые белки, муцин и мембраной связаны муцин. Слезы предотвращения вторжения микробов, поставки питательных веществ и обеспечивают смазку поверхности глаза. Слезы действовать как интерфейс между воздухом и ткани для транспорта кислорода к роговице. 1 слезной пленки состоит из белков, углеводов, липидов и электролитов. Ассоциация между слезоточивый белки с глазной и соматических заболеваний, как глаукома, заболевания сухой глаз, весеннем конъюнктивите, сахарный диабет, офтальмопатии связанных с щитовидной железы и рака была обнаружена в нескольких исследованиях. 2 , 3 , 4 слезоточивый образцы могут быть собраны, микрокапиллярной трубы или разрыв потока полосы (Ширмер полоски). Кроме того Ширмер испытаний является стандартной процедурой в роговице и рефракционной хирургии клиники, результаты которого могут использоваться для анализа анализов цитокина. Неинвазивная проб, доступность био-образца и Ассоциация слезоточивый композиции с различных физиологических и патологических условиях сделать слезной пленки потенциальным источником биомаркеров для нескольких глазных и соматических заболеваний. 4 , 5 , 6
Слеза цитокинов играет важную роль в изучении глазной поверхности здоровья и воспалительных процессов различных глазных заболеваний. 7 аномальные концентрации ряда цитокинов в образцах слезоточивый сообщалось ассоциироваться с сухой глаз болезни, весенний кератоконъюнктивит (VKC), атопический кератоконъюнктивит (АКС), сезонный аллергический конъюнктивит и увеита. 8 , 9 , 10 , 11 , 12 , 13 слезоточивый белки могут быть проанализированы традиционными методами как масс-спектрометрии, Западный blotting и энзим соединенный иммуноферментного анализа (ИФА). 14 , 15 однако ограничения этих методов являются бедные чувствительность и больший объем выборки, необходимых для анализа нескольких слезоточивый цитокинов у каждого пациента. 16 , 17 мультиплекс анализов шарик на основе разработаны для анализа нескольких аналитов в сложной смеси образцов и успешно применяется на слезоточивый образцы для анализа нескольких цитокинов в различных заболеваний. 6 , 18 A сочетание сэндвич ELISA и потока цитометрии методы позволяют эти анализы стать более чувствительными, чем ELISA для количественного определения нескольких аналитов в одном образце. 19 этот метод может применяться на различных клинических образцов и supernatants культуры клеток и помогает в изучении иммунных реакций в некоторых патофизиологических условий. 20 , 21 , 22 , 23 , 24
Есть несколько исследований, сравнение шарик на основе мультиплекс assays ELISA и сообщили о корреляции между методами. Лоо et al. по сравнению шарик на основе мультиплекс пробирного с обычными ELISA для обнаружения адипонектина, resistin, лептина и Грелин в образцах сыворотки или плазмы и сообщил сильная корреляция (r > 0,9) между анализов. 25 Dupont et al. сообщили сильная корреляция между мультиплекс шарик на основе анализов и ELISA для обнаружения ИЛ 1β, Ил-4, Ил-5, IL-6, Ил-10, ИФН ϒ и ФНО α в фитогемагглютинина и липополисахарида стимулировали цельной крови собранные из беременных женщин. 26 Пикеринг et al. сообщили еще сильная корреляция между шарик на основе мультиплекс пробирного и ELISA для обнаружения сыворотке антител к гемофилического гриппа типа b полисахарид (r = 0,96), анатоксинов Столбнячная палочка (r = 0,96) и Corynebacterium diphtheriae (r = 0,91). 27 Бьяджини et al. сообщили высокая положительная корреляция (r = 0.852) между шарик на основе мультиплекс пробирного и ELISA для обнаружения Bacillus anthracis анти PA IgG в образцах сыворотки. 28 Wang et al. сообщили корреляцию между шарик на основе мультиплекс пробирного и ELISA для обнаружения болезни Альцгеймера биомаркеров амилоид β 42 (r = 0,77), Общая Тау (r = 0,94) и Тау фосфорилированных на аминокислоты 181 (r = 0,82) в образцов спинномозговой жидкости. 29 эти исследования продемонстрировали, что применимость шарик мультиплекс анализов на основе различных клинических образцов, меньшего объема требований образца и корреляция с стандартным ELISA, которые делают мультиплекс анализов шарик на основе перспективных альтернативой для традиционных методов ELISA для обнаружения нескольких аналитов в различных типов образцов в различных заболеваний фенотипов. Здесь мы описываем стандартизированный протокол для бисера на основе мультиплекс assay для цитокина профилирования для 41 аналитов в пробах слезоточивый из здоровых испытуемых с помощью Ширмер полоски.
Цитокины являются маленькие сотовой секретируемые белки и мощным иммунных модуляторов, регулировании иммунной реакции. 32 выражение профили различных цитокинов в слезу образцы связаны с различных патологических состояний глаз и исследования cytokine, профили помогают понят?…
The authors have nothing to disclose.
Научно-исследовательская работа была поддержана центр грант от Тан Tock Сенг больница персонализированные семян финансирования программы к 2015 году; Сингапур глаз исследовательский институт пилот Грант и Тан Ток Сенг больницы шаг за фонда субсидии.
Milliplex MAP human cytokine / chemokine magnetic bead panel -1 kit | Merck, USA | HCYTOMAG-60K-41 | |
Flexmap 3D luminex instrument | Luminex Corp, Austin, TX, USA | ||
xPonent software | Luminex Corp, Austin, TX, USA | ||
RBXGenerator software | BIO-RAD, France | ||
Bio-Plex Manager 6.1 | BIO-RAD, France | ||
Plate shaker | Corning, USA | ||
TECAN Microplate Washer | Tecan, Switzerland | HydroSpeed | |
Vortex Genie 2 | Scientific Industries inc, USA | G560E | |
Pipettes | Mettler Toledo, CA, USA | ||
1.5ml microcentrifuge tube | Axygen, USA | MCT-150-C | |
Schirmer tear flow test strip | Eye Care and Cure, USA | 101657 | |
Flexmap 3D Calibration Kit | Luminex Corp, Austin, TX, USA | 40-028 | |
Flexmap 3D Verfication Kit | Luminex Corp, Austin, TX, USA | 40-029 | |
Ocular examination chair |