Perles base essai Multiplex pour l’analyse des profils de Cytokine de larme

Larmes sont produites par la glande lacrymale et les glandes accessoires et enduire la surface externe de le œil. Film lacrymal est constitué d’une couche de lipides externe et une couche interne aqueuse contenant des protéines solubles, mucines et membrane liée mucines. Larmes prévenir les invasions microbiennes, fournissent des nutriments et fourniront une lubrification à la surface oculaire. Larmes agissent comme interface entre l’air et le tissu pour le transport de l’oxygène à la cornée. ¹ film lacrymal est composé de protéines, des glucides, des lipides et des électrolytes. L’association entre les protéines de déchirure avec les maladies systémiques et oculaires comme le glaucome, maladie de sécheresse oculaire, conjonctivite vernal, mellitus de diabète, le cancer et l’Orbitopathie associé à la glande thyroïde a été identifiée dans plusieurs études. ^{2 , 3 , 4} échantillons lacrymal peuvent être recueillis par microcapillaire tubes ou écoulement lacrymal bandes (bandes Schirmer). En outre, test de la Schirmer est une procédure standard suivie dans la cornée et les cliniques de chirurgie réfractive, dont les résultats peuvent servir pour les tests d’analyse de cytokine. Prélèvement d’échantillons non invasifs, accessibilité du bio-spécimen et l’association de la composition de la déchirure avec diverses conditions physiologiques et pathologiques faire déchirer le film une source potentielle de biomarqueurs pour plusieurs maladies oculaires et systémiques. ^{4 , 5 , 6}

Larme de cytokines joue un rôle important dans l’étude de la santé oculaire de surface et des inflammations des diverses maladies oculaires. ⁷ des concentrations anormales de plusieurs cytokines dans les échantillons de le lacrymogènes ont été signalées à être associée à la maladie de l’oeil sec, kératoconjonctivite vernal (VKC), kératoconjonctivite atopique (AKC), la conjonctivite allergique saisonnière et uvéite. ^{8 , 9 , 10 , 11 , 12 , 13} larme protéines peuvent être analysées par les méthodes traditionnelles comme la spectrométrie de masse, western blot et dosages immuno-enzymatiques (ELISA). ^{14 , 15} Toutefois, les limitations de ces méthodes sont une sensibilité médiocre et un plus grand volume d’échantillon requis pour l’analyse de plusieurs cytokines larme chez chaque patient. ^{16 , 17} épreuves multiplex perle basé ont été développés afin d’analyser plusieurs analytes dans des échantillons de mélange complexe et appliqués avec succès sur des échantillons de larme d’analyser plusieurs cytokines dans différentes maladies. ^{6 , 18} A combinaison de sandwich ELISA et techniques de cytométrie en flux permettent à ces tests devenir plus sensible que le test ELISA pour la quantification des analytes multiples dans un seul échantillon. ¹⁹ cette méthode peut être appliquée sur une variété d’échantillons cliniques et les surnageants de culture cellulaire et contribue à l’étude des réactions immunitaires dans plusieurs conditions physiopathologiques. ^{20 , 21 , 22 , 23 , 24}

Il existe plusieurs études comparant multiplex perle basé dosages avec ELISA et ont signalé une corrélation entre les méthodes. Loo et coll. comparé perle basé essai multiplex avec classique ELISA pour la détection de l’adiponectine, résistine, la leptine et la ghréline dans des échantillons de sérum ou de plasma humain et a signalé une forte corrélation (r > 0,9) entre les essais. ²⁵ Dupont et coll. a signalé une forte corrélation entre les dosages multiplex perle basé et ELISA pour la détection de l’IL-1β, IL-4, IL-5, IL-6, IL-10, IFN-ϒ et le TNF-α de la phytohémagglutinine et lipopolysaccharide stimulent le sang total recueillis auprès de femmes enceintes. ²⁶ Pickering et coll. ont une autre forte corrélation entre essai multiplex perle basé et ELISA pour la détection d’anticorps sériques à Haemophilus influenza type b polysaccharide (r = 0,96), anatoxines de Clostridium tetani (r = 0,96) et Corynebacterium diphtheriae (r = 0,91). ²⁷ Biagini et coll. a signalé une forte corrélation positive (r = 0,852) entre essai multiplex perle basé et ELISA pour la détection de Bacillus anthracis anti-PA IgG dans le sérum. ²⁸ Wang et coll. a signalé une corrélation entre l’essai multiplex perle basé et ELISA pour la détection des biomarqueurs de la maladie d’Alzheimer amyloïde-β 42 (r = 0,77), tau totale (r = 0,94) et tau phosphorylée sur acides aminés 181 (r = 0,82) dans échantillons de liquide céphalorachidien. ²⁹ de ces études ont démontré que l’applicabilité de perle issu des épreuves multiplex divers échantillons cliniques, exigences de volume plus petits échantillon et une corrélation avec la technique ELISA, qui rendent les épreuves multiplex perle basé à un prometteur alternative aux méthodes traditionnelles de ELISA pour la détection de plusieurs analytes dans différent type d’échantillons à des phénotypes différents de la maladie. Nous décrivons ici un protocole normalisé pour essai multiplex perle basé pour le profilage de la cytokine pour 41 analytes en larme échantillons prélevés sur des sujets en bonne santé en utilisant des bandes de Schirmer.