诱导体细胞行业分析（ISSA）的为研究木材形成和二次开发茎相关基因和推动者使用

树茎包括行星生物量的显著量是巨大的生物，文化和商业上的重要性。二级茎由许多其他生命形式提供资源和庇护所创造的栖息地。他们以他们居住，并充当生产木材，纸浆和造纸等木材和非木材产品的可再生资源的生态系统提供多项服务。二次干发展并且更具体木材形成通过调节特定细胞类型的发展复杂的分子体系的约束，其细胞壁的生化成分，以及他们如何被布置为形成组织和器官。解剖专干的开发和木材形成的分子基础是由许多因素，包括木材和干性内部和之间的茎，长代次，异交交配系统，高杂合度，高遗传负荷，季节性休眠，长的可变性混淆成熟特点建立期和成熟的树木纯粹的物理尺寸。其结果是，干的发展相对于植物发育的分子控制的其它方面的详细知识次要的认识，仍处于起步阶段。

许多体外技术已被用于研究和了解二次干发展，尤其是木材和二级细胞壁的形成。这些协议包括使用整个植物或植物部分的系统，其中任一转基因植物产生或特定辅助细胞或组织转化为木材和/或仲干发展¹的具体方面的研究。转基因植物可以从各种各样的植物组织和细胞类型的回收后的遗传转化，但是，进展缓慢，特别是在分析木纤维性状由于长期再生时和干成熟时间（年的顺序），高的技术和劳动德曼DS，可以通过低的候选基因，以及在传播一些木本植物物种困难。类似的技术已在非木质模型系统被开发，如拟南芥，成功地克服了这些限制，但不是所有的二次干细胞类型中在这些本茎和相关的季节性或长寿性状不能在这些物种²进行研究。备选地，植物部分系统，例如Pinu酒店小号辐射愈伤组织培养物³减少相关的时限。然而这些方法被限制于单个细胞类型的研究，并如所指出用于体外实验遭受类似的限制。同样，涉及整个茎段根尖干文化⁴显示的承诺，但目前还没有适用于特定基因或发起人的研究。最近，涉及毛状根替代协议已被开发用于桉树并已成功施加^5，但是，这种方法仍需要在体外培养，涉及二次根而非茎和迄今它仅限于单一树种。

诱导的体部门分析（ISSA），如这里描述的，被开发来克服的一些问题，提供用于基因和启动子的高通量功能筛选工具的培养基中，在木材形成和二次茎组织发育疑似角色。 ISSA是被开发，以减少所产生的转基因细胞和组织在一个完整的辅助阀杆同时克服劳动时间在体内转化和筛选系统，体外方法中使用的常规技术和吞吐量的限制。这里所描述的协议允许用于同时建立数百独立地转化组织扇区和小区的一个短的时间期间内的次级茎，在树种和感兴趣组织而不克相对较短的时间框架和低廉的劳动力成本中enetic和/或环境的变化。 ISSA 体内技术首先被用于辅助阀杆⁶和芽⁷组织以来，通过参与形成层分化和基因和/或促进研究二次茎组织了细化说明，并有包括： 微管蛋白 ^{（TUB）8，fasciclin}样阿拉伯半乳聚糖 （ ^FLA）9， 纤维素酶 ^{（CESA）10，} 次生壁相关NAC域 （SND ^{2）11，ARBORKNOX（ARK1）12}和非常有趣的新基因 （RING）H2蛋白^13。在次级进行了这些研究茎杨树和桉树植物和提供见解细胞形态，细胞壁化学和基因表达。

这里描述的协议的目的是汇集经验第二，通过知识的ISSA从一系列在过去十年中发表和未发表的研究开发和应用获得的。他们专注于专干组织⁶ 在体内转化，集中力量对涉及新疆杨“锥状'克隆， 蓝桉以及11个桉×赤桉克隆研究。本文通过从植物和细菌，茎组织，生长和组织的收获，转基因细胞和组织的鉴定，为收集和分析数据的表型评估和方法编制转型的种植协议进行研究。虽然技术已成功应用于测量细胞壁的单糖组成也^9,11，由于篇幅所限，本文集中用于二次ST测量细胞和组织的形态和理解基因表达模式技术只有EMS。因此，如所概述的协议是适合于那些希望获得进一步深入了解的基因连接于次级的作用和/或表达的茎使用成本低，在技术上容易，中到高通量方法。