Miyokard Performans ve Oksijen Tüketimi İnceleme Kemirgen Çalışma Kalp Modeli

Bu protokol, kurumun hayvan bakımı ve kullanımı komitesi altında mevcut protokol altında yapılır. İnceleme 1. Hazırlık (42 ° C olarak ayarlanmış) Krebs-Henseleit tamponu (KHB) rezervuar ısı su banyosu açın. 128 NaCl, 5.7 KCl (mM olarak) KHB 16 L, 1.3 MgSO 4 aşağıdaki gibi alt-tabaka kitleler 2.7 CaCl2, 0,53 EDTA, 0.54 NAC 3H 3 O 3 ve 10.8 dekstroz. 13 25 NaHCO 3, hazırlanması : 27,584 gr NaCl, 1.58 g KCI, 0.578 gr MgSO 4, 8.401 g NaHCO 3, 1.47 g CaCl2, 0.744 g EDTA, 0.22 g NAC 3H 3 O 3 ve 7,208 g dekstroz. Not: Bu bileşenler Deney gününde oluşumu için toz haline getirilmiş, konik tüplerde depolanabilir. 0.22 mikron filtre içinden deiyonize su 4 L filtre. 4 L bu suyun 3.7 L eklemebeher. Suya CaCI2 dışındaki tüm bileşenleri ekleme. Ayrı bir kabta kullanılarak suyun geri kalan 300 ml CaCl2 eritin. 5 dakika boyunca, 1 L / dak (LPM)% 95 O 2/5% CO2 ile çözelti oksijen. Bu 7,40 pH'ı düzeltir ve CaCl 2 çözülmesini artırır. KHB kalanına CaCl2 ekleyin. bir rezervuara tamamlanmış KHB ilave edin ve 30 dakika boyunca her boru içinden dolaşmaktadır. Sistem makroskopik kabarcıkların serbest olduğundan emin olun. 0.5 LPM de% 95 O 2 /% 5 CO 2 ile oxygenate. Not: KHB fazla 1 buzdolabında gece boyunca depolanabilir -, 2 gün yeniden süzüldü kullanım için oda sıcaklığına geri getirildi. deneyler arasında KHB tekrar kullanmayın. buz gibi soğuk KHB ile 2 x 50 mL temiz beher hazırlayın ve diseksiyon istasyonu yakınında bir kova buz koyun. KHB buz (yerine soğutulmuş dışında) eski önce olduğundan emin olun kalbi dikim. üreticinin talimatlarına göre ön kalibrasyon, 30 dakika için, süzüldü KHB ile dolu bir 10 ml şırınga mikro basınç hacmi (PV) kateter yerleştirin. NOT: KHB Sıcaklık PV kateter mümkün olduğunca 37 ° C kadar yakın olmalıdır emmek için kullanılır. hayvan anestezi ve diseksiyon istasyonunu hazırlayın. rezervuar yeterli izofluran emin olun. 1 ml şırınga içinde heparin 500 U hazırlayın; . Bu şırınga 26 gauge (1/2 ") iğne yerleştirin hayvan anestezi için bir maske hazırlayın. 80 mmHg aort blok perfüzyon basıncı ve 10 mmHg sol atrium (LA) blok perfüzyon basıncını ayarlayın. Açık aort blok ve LA blok hem de sıcak KHB dışarı damla için izin vermek. hazır hayvan incelemek için zaman dışarı KHB sürekli yavaş damla izin aort bloğunu açmak. üreticinin talimatlarına göre PV kateteri ayarlayın. "> 2. Hayvan Hazırlama ve Diseksiyon NOT: En iyi sonucu elde etmek için, sağlamak hayvan 300 ila 500 g; Bu 425 450 g arasında bir hayvan ağırlığı sistemimiz için ideal olduğunu bulduk. Hayvan bilinçsiz kadar – (2% 1) bir oda kullanarak izofluran hayvan anestezisi. diseksiyon istasyonuna hayvan aktarın ve Hayvansal izofluran ve oksijen ile anestezi maskesi yerleştirin. sedasyon düzeyini değerlendirmek için ayak tutam gerçekleştirin. anestezi altında iken kuruluğunu önlemek için gözleri veteriner merhem sürün. heparin, karın boşluğunda 500 adet intraperitoneal enjekte edilir. Heparin absorbe edilmesi için 10 dakika bekleyin. toraks görselleştirme geliştirmek için bant ile hayvanın bacaklarda sabitleyin. kalp diseksiyonu. Bir kez ayak tutam hiçbir yanıt sağlamak, t eğrisi ardından periton boşluğuna kesilirken makas kullanmak sonra forseps ile karın boşluğundan uzak cildi kaldırın veO kaburgaların arka açısına geri diyafram. Diyafram görünür sonra, toraks girmesi için izin öncesinde kesim yönünü takip diyaframın ön yüzeyi boyunca kesilmiş küçük bir makas kullanarak. Aksillaya bilateral aksiller hat boyunca her kesim uzatın. NOT: Sonraki adımlar diyafram kesilir kez havalandırma tehlikeye olacak verimli beri yapılmalıdır. forseps kullanarak kılıç şeklinde süreçten öne göğüs kafesi geri çekin. perikard ve plevra İnsizyon. Diyaframın hemen üstünde inferior vena kava (IVC) ve aort belirlemek ve blok öne künt forseps kullanılarak tr bunları geri çekin. Geniş, eğri makas kullanarak, hızla en blok göğüs dışarı kalp ve akciğerler çekerek, IVC ve aort boyunca bir kesi yapmak. toraks kalp ve akciğerler kaldırmak için sefalad yemek borusu, soluk borusu, brakiyosefalik arterler ve venler kesin. THY tüketimdoku bu blok ile mikrofon doku. çıkan aort proksimal bölümünü kesmek için özen gösterin. Hemen buz soğukluğunda KHB kalp ve akciğerleri sokmak ve aşama 1 'de tarif edildiği gibi, daha önce ayarlanmış Langendorff cihazı, hareket. 3. Aort Kanülasyonunda Düz çanak kalp-akciğer kompleksi yerleştirin ve timus ve deneyci ve masa karşı karşıya akciğerlerde arka yönü bakan büyük damarların ile kalbi yönlendirmek. timus iki lob ayrı çekin ve aorta brakiosefalik arterlerin kalkışı belirlemek. yemeğin kenarına aorta asmak ve yaklaşık 5 mm aort kapağının üstünde küçük bir makas, sağ subklavyen arter kalkış sadece proksimal kullanarak aort transect. NOT: Kesi temiz yuvarlak daire verim gerekir – kesitte aorta. Off-açı ise (yani, geniş oval)veya eksik istenen sonucu elde etmek için kesme tekrarlayın. Bu etkili aort kanülasyon kolaylaştıracaktır. Aort her iki tarafında eğri forseps 2 çift kullanılarak, (yavaş KHB damlayan olmalıdır) aortik kanül üzerinden aort kılavuz. kanül ucu altında 2 mm – aort kapak 1 oturmak gerekir. Aort kanülasyon sonra yerine aorta tutmak için aort dik forseps yeniden konumlandırmak. Alternatif olarak, bu modeli tamamlamak için tek bir deneyci sağlayan yerinde kalp akciğer kompleksi tutun aort karşısında küçük bir kelepçe yerleştirin. Bir asistan sadece forseps altında bir ipek 4-0 dikiş geçmek ve kanül etrafında döngü ve önünde ve kalbin arkasında hem birden çok kez bağlama, yerine kravat var. Tam retrograd aort akışını başlatmak için tam kanül açın. şiddetle dövmek kalbi gözlemleyin. Kalp (~ 200 BPM) hızla atmaya başlayacak vermezse ve şiddetle,: NOTkravat veya kanül koroner arterlerin birini veya her ikisini kapatılmasıy olabilir. Bu şüpheleniliyorsa, kravat çıkarın ve koroner arterlerde onu uzak konumlandırmak. Kalp yayılmakta ve dövmek değilse, kanül aort kapak üzerinde olabilir. Koroner arter sızıntıları (aort kökünden KHB spreyler), aort kapak için kanül yakın ilerlemek Eğer (bir brakiyosefalik arter kanüle çıkan aort yerine ise bu fenomen oluşabilir). 4. Pulmoner Ven Tıkanıklığı ve Kanülasyonu için Pulmoner Arter hazırlanması NOT: Bu adımın amacı sol atriyal blok tüm hacim ve basınç sol kalp yapıları iletilir sağlamak için kapalı bir sol atriyum sistemi oluşturmaktır. Tamamen pulmoner venlerin tıkamak için başarısızlık önyükleme eksikliğine neden olabilir ve sonuçları tahrif veya dengesiz çalışma kalp hazırlık yaratabilir. th maruziyetini artırmak için timus kaldıre pulmoner arter (PA). Kalbin arka yönü operatörü bakacak şekilde elle aort kanül döndürün. sağ akciğer giden damarları parçalara ayır. ayrıca bu gemileri belirginleştiren forseps kullanarak doğru akciğer dokusunun Askıya. orta-büyük cerrahi klipsler (veya sütür) kullanarak, tek bir klip ile sağ pulmoner arter ve ven ve bronşları tıkayan. klibe Sağ akciğer distalinden rezeke. NOT: pulmoner arter serbest diseksiyon zorluk nedeniyle, bizim uygulama bir kalpte modelinde yakındaki yapıları zarar vermeden kesilirken kolaylaşır pulmoner arter gerilmek için pulmoner venlerin tıkanması için olduğunu. Sol akciğerinde adımı yineleyin 4.2. NOT: Potansiyel tuzaklar ve problem çözme: Her iki pulmoner arter tıkalı sonra, sağ atrium gözle görülür gerilmek ve kalp bradikardik hale gelebilir. sağ ventrikül basınçlı hale olmasıdır. Bu oluşmazsa, bu erik olasıdırkoroner damarlar tamamen tıkalı değildir ve bu ön yükleme kalp modunun çalışmak için yetersiz kalacaktır. Kalp, kalp (aşağıya bakınız) çalışmaya sol atrium (LA) kanülasyon sonrası kalp debisini ve teşebbüs geçişi sağlamak herhangi bir kalıntı sızıntı tıkamak için ek klipleri veya pulmoner ven kütükleri etrafında bir kravat yerleştirmeyi düşünün mümkün değilse. PA tıkanmış sonra, ancak, Adım 5 miyokard iskemisi en aza indirmek için hemen yapılmalıdır. Bazı araştırmacılar sağ ventrikül basıncını önlemek için önce pulmoner venlerin ligasyonu pulmoner arter insizyon unutmayın. Pulmoner arteriyel kesi Kalbin ön yönü operatörü bakacak şekilde aort kanül döndürün. pulmoner arter tanımlayın. Yine, bu arter şişirilebilir. Küçük bir makas kullanarak enine insizyon pulmoner kapak üzerinde yaklaşık 3 mm yapmak. Not: Bu hemen basıncı rahatlatmak ve kalp hızı artabilir. olmakBu kanül, çıkarmak sol atriyal kanülasyon tamamlandıktan sonra pulmoner arter kanüle kolaydır neden olur. 5. Sol Atriyal Kanülasyonunda Sol atrium operatörü bakacak şekilde aort kanül döndürün. yaklaşık 3 mm atriyoventriküler oluğa üstünde, sol atrium üst gövde 3 mm kesi – küçük makas kullanarak, 2 yapmak. mitral kapak düzlemine dik sol atriyal kanül yerleştirin ve atriyal septumun doğru işaret etti. KHB akana kadar LA kanül açın. çalışma modunu geçiş aşağıdaki dolayı hipotermi miyokard disfonksiyonu önlemek için (olmayan ceketli boru otururken hızla soğuk olur) KHB dokunmak sıcak olduğundan emin olun. kanülasyon sırasında damlama hızına geçiş. , Karşı-çekiş tutun, sol atrium vücuda atriyal kanül eklemek için forseps kullanarak excessi kullanmak için özenatrium gözyaşı, hangi kuvvet ettik. NOT: atriyal duvarda herhangi bir gerginlik olmadan atrium ortasında oturur, böylece LA kanül yerleştirilmelidir. sol atriyum vücut etrafında bir 4-0 ipek sütür geçirin ve kanül etrafında atrium bir mühür oluşturmak için bir düğüm. sol atrium arka yönü sütür dahil olmasını sağlamak için özen gösterin. Gerekirse ek sütür ekleyin. oldukça atriyal septum karşı daha atrium ortasında oturur, böylece 2 mm – mühürlü kez geri 1 kanül çekin. NOT: kalp çalışma modunu geçiş üzerine malperfused hale gelmesi en yaygın nedeni, LA kanül sol atriyal girişi tıkar atriyal septum, dayandığı olmasıdır. Kanül uygun konuma (Şekil 2E bakınız) olduğunda LA izleme genellikle uygun bir dalga ve v dalga göstermek için değişir. sol atrium tam önyükü yönetmek için tamamen LA kanül vanasını açın. monitör(Koroner atık gelir) kalp damlama hızı. LA kanül açıkken damla oranı değişmez emin olun. Eğer varsa adım 6.4'te anlatıldığı gibi bu sistemde bir sızıntı temsil eder, kanül etrafında atrium pekiştirmek. Çalışma Kalp Moduna 6. Pulmoner Arter kanülasyonu ve Geçiş miyokard oksijen tüketimini (ya da ilaç düzeyleri veya sitokinler olarak koroner atık içindeki diğer maddeleri) ölçülmesi durumunda, pulmoner arter önceki kesi içine 1/32 "esnek boruyu takın. NOT: Oksijen tüketimi sol atriyal perfüzat ve pulmoner arter atık arasındaki oksijen içeriği fark olarak ölçülür 2. miyokard oksijen tüketiminde sürekli ölçümü için, sol atriyal ve koroner sinüs atık karşılaştırmak için bir in-line oksijen elektrodu kullanın. dereceli bir silindire içinde (pulmoner arter ve kalp damlayan hem de) koroner sinüs atık toplamakkoroner akımın zamanlı ölçümü için inder. Daha önce açıklandığı gibi miyokard oksijen tüketimini hesaplayın. 2 retrograd aort pompayı kapatarak kalp çalışma modunu geçiş. NOT: Bu yapıldığında, LA basıncı önceden Langendorff modunda retrograd pompaya direnç sağlayan pre-yük basıncı ve direnci şimdi ortalama arter basıncı oluşturarak, kalp debisi direnç sağlar hale gelir. ortalama arter basıncı ~ 80 mmHg altında reddederse, neden büyük olasılıkla ya ön yük veya miyokard fonksiyonu ile ilgilidir. Büyük olasılıkla sorun retrograd pompa yeniden başlattıktan sonra ayarlanabilir olmalıdır sol atriyal kanül vardır. Sol Ventriküler Basınç Hacim Kateterin 7. Yerleştirme NOT: PV kateter retrograd (aort kapaktan) ya da apikal ponksiyon yoluyla ya yerleştirilebilir. retrograd faydası pkonumumuzu daha tutarlı olup, apikal delme ve koroner yaralanma ya da ön yük kaybı beraberinde getirdiği risklerle ihtiyacı ortadan kaldırmaktadır. Ancak, retrograd yerleştirme bazen çok zor olabilir, bu yüzden burada hem teknikleri tarif eder. basınç volüm sistemine 1.4 Fransız basınç-volüm kateter takın. Üreticinin talimatlarına uygun olarak, sıcak KHB sistemi kalibre edin. dalga gerçek zamanlı görünür olduğundan emin olun. yerleştirme aşağıdaki onu yerinden olmayacak şekilde LV yüzeyine yakın kateter ve kabloları getirin. retrograd yerleşim için, ayarlanabilir vanasını açın ve istikrarlı bir basınç ve hacim dalga tanımlanır kadar aort kapak üzerinde hafifçe PV kateteri beslenirler. aort kapağını zarar verebilir veya ventriküler apeks delebilecek aşırı güç kullanmaktan kaçının. NOT: Biz tüp ve PV kateter AV yaklaşım gitmek gerekir sarım sayısının uzunluğunu en aza indirmek için önemli olduğunu bulduk. Osistemi ile birlikte geliyor boru kesmek için yararlı olabilir. apikal yerleşim için, LV bir apikal ponksiyon oluşturmak için 24 G anjiyo-kateter kullanın. koroner arter sol ön inen önlemek için emin olun. ventriküler ucundan aort kapak doğru iğne yöneltin. LV vücuda basınç-hacim kateteri ilerlemek. en kısa sürede LV basınç ve hacim dalga tanımlanır olarak kateter ilerleyen durdurun. basınç-hacim kateter yerleştirildikten sonra, kalbin etrafında pozisyona su ceketi taşıyın. bant küçük bir parça ile su ceketi duvarına kateter sabitleyin. önceden herhangi bir ölçüm ya da müdahaleler başlamadan istikrarın en azından bir 30 dakika süre sağlamak. İlaç 8. İnfüzyon (İsteğe bağlı) standart ilaç pompası kullanılarak sol atriyal blok içine ilaçlar (örneğin, dopamin) infüze. NOT: Biz whol göre dozda ilaçlar varbir bütün kalp debisi akış eşdeğer beri e hayvan vücut ağırlığı atriyal blok geçer; Bu, in vivo olarak olduğu gibi, sadece bu küçük bir kısmı, koroner dolaşıma geçer. Seçenek olarak ise, Perfüzat bir ikinci grubu bir ilaç önceden belirlenmiş konsantrasyonuna sahip oluşturulur ve kalp serpmek için kullanılabilir. NOT: Bizim protokolde, her infüzyon son 10 dakika boyunca fizyolojik veri toplama ve hemen önceki 10 dakika başlangıca karşılaştırarak, bir 12 dakikalık bir süre boyunca ilaçları aşılamak. 9. Fizyolojik manipülasyonları kalp atım hızı (İsteğe bağlı) sütür iki pace telleri sağ atriyal duvara ve geçici kalp pili cihaza takın. NOT: Bu hassas (yerli sinüs oranının üzerinde) kalp hızı kontrol ve kalp hızı ve bir kardiyotonik ilaç bağımsız kontraktilite arasındaki ilişkinin bir anlayış verir. preload değiştirmekSol atriyal blok besleyen sütunun yüksekliğini değiştirerek preload (sol ventrikül diyastol sonu hacmi olarak tanımlanır). Kan basıncı H-51 üzerindeki basınç valfleri kullanılarak kan basıncı (bu modelde afterload'ı temel belirleyicisi) işleyin. Koroner oksijen içeriği Çeşitli gaz karışımlarında doymuş KHB ile kalbi perfüze ile miyokard hipoksi değişen derecelerde başarmak. gaz ve KHB arasındaki dengeyi sağlamak için ayrı ceketli rezervuarlar (kendi gaz karışımı ile her biri) kullanarak bunu. distal koroner arter bağlanarak sütür ile koroner iskemi başarmak. NOT: Çalışma kalp modunda proksimal koroner arterlerin ligasyonu ölümcül miyokard disfonksiyonu neden olabilir. veya kesintiye uğratarak zaman belirli bir süre için retrograd perfüzyon geciktirerek küresel koroner iskemiyi neden olur.