여기에서 우리는 디지털 사진에서 fungiform 유두 밀도를 측정하기위한 프로토콜을 제시한다. 이 방법은 밀러 & 리디 (1990)에 의해 fungiform 용의자의 원래 설명 작업에 우선 순위 및 목표 특성 통계를 작성합니다.
덴버 유두 의정서의 목표는 득점 사이의 일관된 득점을 보장하기 위해 fungiform 용의자 (FP)의 특성을 정의하고 우선 순위를 이분법 키를 사용하는 것입니다. 이 프로토콜은 맛 기공 밀도 프록시로 FP를 사용하여 맛이 연구의 지난 20 년에서 생겨났다 필요 떨어져 구축합니다. 라운드 라이터, 큰, 그리고 높은 스테인드 : FP 밀도는 역사적으로 밀러 & 리디 1990 년 자신의 형태의 특성화를 사용하여 분석하고있다. 이 연구에서 저자들은 필요 FP 형태의 엄격한 정의가 설명 할 수 있음을 미리 경고. 행동이 호출에도 불구하고, 후속 문헌 밀러 & 리디의 오리지널 작품을 인용 계속 대부분의 연구로, 부족했다. 따라서, FP 밀도 리포트 맛 감도 FP의 역할에 일관 결론에 기여할 수 있고, 작은 크기의 샘플과 결합 된 매우 다양하고있다. 맛 연구소의 유전학이 명백한 incon을 탐구계수의 특성 레이아웃 및 FP의보고 자질의 전부는 아니지만, 득점 개별적으로 다르게 이러한 특성의 중요성을 우선 순위 사실을 발견하고 유두 일부를했을 때에 대한 지침이 없었다. 이 주관성의 결과는 동일한 설부 화상의 매우 가변적 FP 카운트이다. 덴버 유두 의정서는 더 정의하고 밀러 & 리디 내놓은 특성의 중요성을 우선 순위를하는 이분법 키의 사용을 통해이 결과를 해결하기 위해 개발되었다. 제안 된 방법은 맛과 영양 연구 분야의 연구자 FP를 정량화하는 표준 방식을 만들 수 있었다.
용의자는 혀의 표면에 볼 범프 있습니다. fungiform (FP), 잎 모양, circumvallate 및 사상 : 용의자의 네 가지 유형이 있습니다. 사상 용의자는 혀의 표면에 분산되어 있지만, circumvallate은 혀 뒤쪽에 지역화 및 잎 모양은 양면에 발견된다. 대조적으로, FP는 혀의 앞쪽으로 위치한다. 그들은 사상은하지 않지만 입맛을 포함 할 수있는 잠재력을 가지고 있기 때문에 FP, 잎 모양, 및 circumvallate 용의자는 미각 간주됩니다. 입맛은 화학 tastants를 감지하고 뇌의 미각 신호로 자극을 열 변환에 대한 책임 세포의 클러스터입니다. 침과 음식 분자 맛 분자는 다음 맛 세포를 활성화하는 잠재력을 가지고 맛 모공라는 구멍을 통해 입맛에 입력합니다.
먼저 혀의 조직 학적 연구에서 관찰 흥미롭게도, 맛 봉오리 밀도의 큰 개인차가 있습니다18 시체 (밀러, 1988) 1. 생활에 videomicroscopy 사용하여 맛 모공 fungiform 용의자를 식별하는 방법을 개발하기 위해 밀러 & 리디 (1990)을 주도 적절한 배율, 조명 및 염색 기술을 사용할 때 자신이 혀의 표면에 표시되지 않습니다 입맛 그러나, 맛 모공 볼 수 있습니다 인간이. 실험실의 수는 여전히 사진과 거의 또는 전혀 배율을 사용하여, 원래 videomicroscopy 기술을 수정했습니다. fungiform 용의자가보다 시각적으로 훨씬 쉽게 때문에,이 후자의 기술을 사용하여 모공은, 실험실 맛 모공 대신에 fungiform 용의자를 계산으로 향했다. 이 과정에서, 그것은 fungiform 유두 밀도가 많은 fungiform 용의자가 맛 기공을 포함하거나 싹 3을 맛을하지 않더라도, 맛 기공 밀도에 대한 합리적인 프록시 측정한다고 가정한다; 뿐만 아니라 FP 더 볼과 circumvallate과 잎 모양의 유두보다 액세스 할 수 있습니다,하지만 자신의 이미지 캡처 이하 TI이다나 videomicroscopy 2,4의 다른 방법을 통해 맛 기공 분석보다 소비. 1990 년, 밀러 & 리디는 기공 밀도가 더이 해부학 적 관계뿐만 아니라 Bartoshuk 등. 5 뒷받침 된 FP 밀도 3 상관 관계가 그 맛을 찾기 위해이 기술을 사용, 밀러 & 리디도 발견 상단에있는 8 개인 맛 기공 밀도 분포의 절반은 자당, 염화나트륨, 그리고 훨씬 더 강렬한 기타 (8) 개인 3보다 propylthiouracil (법안을) 평가. Bartoshuk 등에 의한 후속 작업. (1994) 42 과목 (5)에 초과 임계 법안 맛의 강도와 fungiform 유두 밀도 사이의 상관 관계뿐만 아니라 맛 기공 밀도를 관찰했다. 이 편리한 방법은 그 방언 많은 용의자가 주체가 쓴 tastants의 phenylthiocarbamide 등 많은 tastants에 강한 반응을 이끌어내는 것을보고 영향력있는 연구되었다 (PTC) 및 법안 6,7.
PTC 및 법안은 자주 사람의 맛이 감도 표현형과 유전자형 사이의 명확한 링크로 인해 사용 잘 연구 tastants 있습니다. 인구 연구는 유전자 TAS2R38의 동형 접합 열성 diplotype을 가진 사람이, 유전자 8-10의 지배적 인 또는 이형 변형의 항공사보다 소유 할 수있는 상당히 낮은 감도를 가지고 있음을 보여 주었다. 아서 L. 폭스 PTC (11)에 "맛 실명"자신의 발견을 발표 할 때 유전 현상은 1932 년에 처음보고되었다. 이 쓴 화합물을 맛볼 수 사람들 중, 맛의 강도는 극심한 쓴 6 어디서나 약간 불쾌한 다를 수 있습니다보고했다. TAS2R38 의해 설명 할 수없는 변화를 고려하기 위해, 이론이 혀 4 FP의 밀도에 기인 할 수 있다고 기재 넣었다.
맛 연구가 진행됨에 따라, 한 느낌D는 FP와 쓴 맛 감도의 역할에 관한이 이론 주위에 생각의 두 학교로 분할되었다. 많은 연구가 FP 밀도가 법안에 영향을 미치는 요인은 4,6,12,13를 감도이라는 원래의 주장을 뒷받침하지만, 역할 (10)를 복제 할 수 없음을보고, 증거를 반박 발견했다 작지만 중요한 비상이 있었다, 14,15,16. Delwiche 등. (2001) 추세가 매우 다양하다 경고; FP 밀도는 과목에 걸쳐 쓴 감도의 차이를하지 균일 계정을 수행하고, 7 소품 적어도 적당한 감도 과목 만 입증했다. FP를 정량화하는 방법에 대한 덜 엄격한 정의 밀러 및 리디 방법의 사용 또한, 피셔 실시한 비버 댐 자손 공부 (15)의 예외와 함께 외., 전술 한 대부분의 연구는 작은 샘플을 한 것으로 유의해야 도에 일치하지 않는 결과에 기여할 수있다 크기맛 FP의 역할.
간단히, 밀러 & 리디의 독창적 인 방법론 용지 (1990)에서, 저자는 사상 용의자는 염료를 흡수하고 파란색으로하면서 FP 핑크 남아 있기 때문에 FP를 정량화하기 블루 방언 스테인드. 그들은 "둥근 분홍색 구조 직경이 약 0.5 mm의"2로 FP를 분류. 저자는 변화가 이미 문헌에 언급하는 것이 추가 분석 작업을 위해이 방법을 사용하기 전에, FP 특성이 더 엄격하게 정의되어야한다고 권고하고 결론을하는 동안 2, "다른 대상 집단, 다른 방법, 다른 연구자에 기인 할 수있다"자신 연구는 FP가 17, 18 라운드 있습니다 일반적으로 받아 들여지는 특성, 대형 2, 핑크 주도 또는 2 라이터, 4 높은 스테인드했다. 얼굴 값에서 찍은, 이러한 특성은 매우 정직하고 나타납니다. 맛 연구소의 유전학, 만족의 사용 (실험실이나 연구소를 당함)특성 HOD의 존재는 모든 적격에 득점 '개별 시도 복잡하고 상기 일부 특성의 중요성을 우선 순위 화되었지만. 이러한 합병증은 훨씬 더 큰 유두의 중간에 분홍색 나타났다 작은 유두를 포함; 따라서 색상 변화에 기초하여 분류를 제거 청색 흡수 색소 전체 텅; 대신 둥근 직사각형 용의자; 방언은 동일한 이미지의 널리 다양한 FP 수를보고 득점에 기여 모두 상승에는 변화를 갖는 없습니다.
분석에서 이러한 변화는 정확하고 객관적으로 FP를 정의하고 점수 프로토콜을 주관를 정확하게 일반적으로 받아 들여지는 FP 특성에 예외를 식별하고 궁극적으로 고안하기 위해 문헌을 검토하라고했다.
우선, FP 모양 둥근 버섯 형상 구조 (17, 18)로서 문헌에 기재되어있다. 제외 그러나 주목할만한이온도 언급했다. 밀러는 용어 "fungiform는"버섯 모양되지 않는 잘못된하고 많은 FP하지만 크기와 형태 (18)에 다양 할 수 있음을 강조했다. 멜리 등. 일방향 FP 직경이 다른 방향 (19)보다 적어도 두 개의 표준 편차 이상 어디에 (2013)은 또한 "왜곡"여겨졌다 여러 용의자를 설명. 또한, 쳉 & 로빈슨은 염색으로 FP를 표시 할 때, 그들은에서 등장 20 년 연장에 평면 얹어였다 것으로 나타났습니다. 위의 예외를 주목하는 것은, 라운드 인 FP의 특성과 버섯 모양이 나타납니다은 정의를 좁힐 너무.
둘째, FP 색상은 파란색 염료와 혀를 염색 후 7 "파란색 배경에 분홍색 동그라미"로 설명되어 있습니다. 라이터를 염색하는 것은 문헌을 통해 FP의 가장 일관된 기준 이었지만 여전히 균일 한 규정하지 않았다. 쳉 & ; 로빈슨 식별이 곤란 20 불확실하게 FP 항상 가볍게 염색하지 않은 것을 관찰 하였다. 그것은 방언이 다른 염료를 흡수하고 콘트라스트가 많은 방언에 명백한 동안 다른 사람들이 바로 파란색 염료 (21)의 흔적을 상실하면서, 일부는 구별로 완전히 파란색이 될 것을 다음에 나타납니다.
세 번째 특성, FP 크기는 0.5 mm에서 0.97 mm 6,18에 이르기까지, 논문 중에서 상당히 일치했다. 문헌에서 밀러는 혀의 지느러미 앞쪽에 용의자의 두 크기 범위가 있다고 지적했다. 작은 직경과 유두는 대부분 사상 (18) 동안 더 큰 직경의 유두는 주로 fungiform과 원뿔 유두했다. 그러나, 비버 댐 자손 공부 (21)의 예외와 함께, 크기 구조 문헌 FP인지 확인 나타나지 않았지만, 이미 "fungiform"로 분류 유두 제공 하였다.
밀러는 사상과 fungiform 용의자 사이의 차이를 지적하지만 혀의 가장자리 근처에이 기준을 사용하는 경우 _content "> 마지막으로, 높이가 4 특성 네 번째 FP로 어렵다 나열됩니다. 그는 상승에 크게 변화 FP의 두 가지 예를 준 다른 높이가 0.1 mm 이었지만, 여전히 명확 18 개의 관찰 맛 기공을 가지는 동안, 높이 0.8 mm 인 하나. 이러한 관찰은 또한 추적 및 Shahbake 등에 의해 확인되었다. (4)이러한 정의와 그보고 예외는 맛 필드가 긴 FP와 밀러 & 리디에서 일반적으로 사용되는 프로토콜의 단점을 특징으로 불일치를 인식하고 있음을 보여준다. 실제로, 밀러 & 리디 더 FP 2의 기능을 정의하는 필드를 권고했다. 우리는 득점이 특성에 다른 가중치를주는 경우 아빠 다르게 중요성의 우선 순위 있다고 가정illae는 유두 모양의 크고 버섯 때 등 모든 기준을 충족하는 데 실패,하지만 파란 스테인드. 그것은 이전에 발표 된 연구의 연구자 가능성, 작은 샘플 크기와 결합 될 때, 다양한 결과이 방법의 사용에서 오는을 설명 할 수있는 동일한했다는 것을 추론했다.
GOT 랩은 객관적인 측정을 사용하여 각각의 특성을 정의하고 분석에 우선하는 표시하기 위해 특성을 우선 순위 가이드 라인을 개발하여 FP 방법론에서이 격차를 해결. 이 방법은 덴버 유두 프로토콜 (DPP), 혀의 디지털 사진에서 정확하고 반복 횟수를 보장하기 위해 FP의 명확하고 뚜렷한 특성을 가진 이분법의 핵심입니다. DPP는 이전에 사용 된 밀러 & 리디 방법, 따라서 각각의 해석을 제거하고 FP 밀도를 분석 할 때보다 일관된 결과를 보장하는 표준화 제안 된 방법이다. 그렇게함으로써, DPP는 D 더 자신있게하는 데 사용할 수 있습니다맛 FP의 역할을 etermine.
피사체의 촬영 혀의 이미지는 본 연구의 진정한 주체 인 연구소의 시민 과학자 (득점)에 의해 분석 하였다. 시민 과학자의 실험실의 핵심은 80 년대 중반에 16 세에 이르기까지 사회의 구성원 (년)으로 구성되어 있습니다. 2012 년 박물관의 의뢰 총괄 평가 보고서는 과학에 강한 관심을 갖는 것으로하고 3 분의 2가 과학 분야 (22)의 대학 학위를 취득하는 데에 시민 과학자를 설명합니다. 후보 시민 과학자들은 현재 성공적으로 박물관에서 베테랑 자원 봉사자들과의 인터뷰 과정을 완료하고, 박물관의 영구 보건 전시회, 원정대 건강에 시험 기간을 거쳐야합니다, 입소문을 통해 모집 그들은 위치에 적용 할 수있는 기회를 갖게하기 전에 연구소. 연구소에 접수되면, 시민 과학자들이 12 주간의 훈련을 받아야하는 것은 인간의 주제를 등록 인증이 될의. 이 인증 후, 그들은 실험실에서 다양한 기술 (예를 들면 용의자 계산, DNA 추출) 및 추가 인증 및 정기적 인 품질 관리 대책을 다음에 훈련 모듈을 취할 수 있으며, 이러한 시민 과학자들은 적극적으로 데이터 분석에 참여할 수있는 기회를 가질 수있다. 시민 과학자들은 자신의 시간을 자원 봉사 및 박물관에 자신의 기여에 대한 보상되지 않습니다.
DPP를 사용하여 이미지 내의 분산은 독립적 득점 걸쳐 카운트 내의 스코어러의 수는 현저하게 감소 하였다. 이 방법은 덜 videomicroscopy 않고 주관적인 시각적 FP 밀도 분석을 기울이고 있으나, 그 방법이 단지 점수 FP를 주목해야한다. DPP가 FP로 분류 구조는 맛 모공이 때문에 미각 유두 있습니다도 카운트가 진짜 맛 봉오리 밀도의 반사 것을 보장 할 수 없습니다 20,23이 방법의 국지적 인 성격이 일관성과 정확성을 통해 신뢰성을 설정이다; 그러나, 그것은 일관된 방향으로 결과를 바이어 싱 될 수있다. 더 엄격하게 FP의 형태를 특성화하고 이분법 키를 만들어이 study.However의 범위를 넘어 확장 할 미뢰 밀도 (예를 들어, videomicroscopy)의 진정한 척도를 사용하여 다른 방법으로 정확도 상대를 테스트하려면이 방법은 주소 밀러 & FP의 많은 특성이 분야에 갈대의 충전자신의 형태와 정량 2에 대한 합의를하기 위해 수행해야합니다. 또한, 그들은이 특성은 "주체들 사이의 차이점을 명확히하고 연구자 2 중 서로 다른 결과의 일부를 설명합니다."수 있음을 표시 맛과 영양 -에서 FP의 역할에 대한 불일치의 많은 정량의 균일 한 방법을 제공함으로써 관련 연구는 수리 할 수 있습니다.
이분법 키는 상이한 이미지 캡처 기법에 대해 조정될 수있다. 측정 비율에 대한 공지 거리는 쉽게 사란 랩 또는 유리가 촬상 용 혀 위에 배치 된 경우 할인 될 수있는 각각의 랩과 침체에 사용되는 직경으로 설정 될 수있다. GOT 연구소에서는 중립 혀 유두의 가장 좋은 정의를 한 것으로 밝혀졌습니다. 이는 엉덩이를 만든 눈부심을 만들어 다시 카메라에 빛을 반사하는 사란 랩 또는 유리의 원인이 된 연구소에서 빛의 양을 수있다sment 어렵다. 일부 실험실은 염료 더 도전 카운트 발견했다, 그러나 GOT 랩은 방언의 대부분에 fungiform과 사상 유두 사이의 이상적인 대비를 제공 1시 36분의 농도로 희석 푸른 식품 염료를 발견했다.
FP 특성에 대한 이분법 키의 생성은 지속적으로 혀에 구조를 분석하고 그 결과의보고에 대한 자신감을 가지고, 이미지 캡처 다양한 방법을 사용하여, 다른 실험실에서 연구자 수 있습니다. 마지막으로, 이분법 키의 사용은 구조 또는 객체의 특성이 연구에 연구에서 일치하지 않는 번호를 제공하고 과학적인 방법의 다른 영역에 목적을 가질 수있다.
The authors have nothing to disclose.
이 작품은 국립 보건원 (National Institutes of Health)과 연구 자원을위한 국립 센터에서 2008-2012 사이에 과학 교육 파트너 상 (SEPA) R25 RR025066에 의해 부분적으로 투자되었다. 존 헤이즈, 고소 콜드웰, 폴 브레슬린, 칼라 슈베르트 : 다양한 실험 시나리오에서 DPP의 사용에 대한 문헌, 우리의 결과와 피드백의 사려 깊은 논의 맛 필드에서 동료에게 감사합니다. 자연과 과학의 덴버 박물관에서 리더십과 탐험 건강 내 맛 연구소의 유전학 내 시민 과학을 지원하는 직원에게 또한 감사드립니다. 곰 아라곤, 마이크 아처, 스와 Ataman, 마이클 베이글, A'nette 버트 랜드, 다이아나 Boyles, 웬디 은밀한, 사샤 둘리 : 마지막으로, 포함, 개발하고이 프로토콜을 사용하여 자신의 시간과 헌신에 대한 우리의 자원 봉사 시민 과학자 모두에게 감사합니다 패티 Drever, 제시카 ERN, 로라 Harmacek, 숀 히 버드, 조이스 Hutchens, 매트 JOO, Leta 킨, 윌렘 Leenhouts, Stephania 루kjan, 애슐리 매튜스, 마이크 모 제르, 스테파니 밀러, 할리 모건 – 로드리게스, 그리핀 Scherma, 알리사 Schickedanz, 테리 사이먼, 딜런 토마스, 루디 토레스, 타일러 윌슨, 다이앤 Woltkamp.
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