髄質胸腺上皮細胞の増殖、分化および無差別遺伝子発現を支える3D器官共培養モデル

残りの2％を一括胸腺間質（ すなわち、上皮細胞、樹状細胞、マクロファージ、B細胞、線維芽細胞、内皮細胞）を構成する種々の細胞で構成されていながら、開発胸腺細胞は、胸腺の約98％を占めています。外側皮質上皮細胞（cTECs）は、骨髄、多能プレT細胞におけるT細胞系譜の誘導と自己MHCのポジティブ選択からプロT細胞の移民を調達未熟胸腺細胞を制限しました。内側の髄質胸腺上皮細胞（mTECs）はいずれかの誘導陰性選択またはT調節細胞系譜へのそれらの偏差による自己ペプチド/ MHC複合体のための高親和性TCRを有するもの胸腺細胞の寛容の誘導に関与しています。中央寛容誘導のコンテキストでは、mTECsは、彼らがこのように周辺自己ミラーリング組織限定自己抗原（TRAS）の広いスペクトルを表現するという点でユニークです。この現象は、無差別遺伝子発現（PGE）と呼ばれています^1,2。

様々な短期の2D培養システムは、必ず最初の2日^3-6内PGEおよびMHCクラスII、FoxN1とアイレのような重要な調節分子の喪失をもたらしたように、この魅力的な細胞型の最新の研究は、ex vivoで単離された細胞に依存しています。これは、特定の成分および胸腺の無傷の3次元網目構造の特徴は、2次元モデルで欠落した、しかし不明でした。再凝集胸腺器官培養（RTOC）は無傷の胸腺の微小環境⁷に、他方では、これまでのところ唯一の3D一方で、T細胞の発達の研究を可能にするシステム、および間質細胞生物学でした。しかし、RTOCsは一定の制限がある、 すなわち、それらは既に、細胞の複合混合物を含む、胎児間質細胞の入力を必要とし、5〜10日の最大の培養期間に耐えます。

体外培養系における還元主義の欠如は、の研究を妨げていますT細胞の発達と胸腺器官形成のいくつかの側面はなく、少なくとも分子PGEの調節およびmTECsの発生生物学との関係。

皮膚および胸腺の上皮細胞の構造化された組織の近接関連性のために、我々は、in vitroでケラチノサイトの分化をエミュレートするため、真皮等価物を作成するために独自に開発された3D器官培養（OTC）のシステムを選択しました。 OTCシステムは、ケラチノサイトが^8,9を播種し、その上にフィブリンゲル中に閉じ込められている真皮線維芽細胞を重層不活性足場マトリックスで構成されています。ここでは、精製されたmTECsでケラチノサイトを置き換えます。このモデルの基本的な機能を維持しながら、私たちは、特定のパラメータを最適化します。

採用店頭モデルmTECsでは、増殖分化を受け、MTECのアイデンティティとPGEを維持し、このように密接にインビボ mTECs開発の模倣<sup> 10。このテクニカルノートでは、胸腺OTCsの段階的なセットアップを可能にする詳細なプロトコルを提供します。