В данной статье описывается таракана брюшной нервной вскрытие и внеклеточных записи с церка нерва и связок. Вызванные ответы генерируются электрической стимуляции церка нерва или прямой механической стимуляции церков.
Таракан вентральной подготовка нервный тяж является послушным система нейроэтологии экспериментов, нейросетевого моделирования и тестирования физиологические эффекты инсектицидов. В этой статье описывается сферу таракана сенсорных модальностей, которые можно использовать для анализа, как насекомое нервная система реагирует на экологические возмущений. Акцент здесь делается на поведении эвакуации при посредничестве церки до гигантских передачи волокна в Periplaneta Американа. Это, в подготовке месте требуется только умеренное рассекает мастерство и электрофизиологические опыт для создания воспроизводимых записи нейронной активности. Пептиды или другие химические реагенты затем могут быть применены непосредственно к нервной системе в растворе с физиологическим раствором. Инсектициды также можно вводить перед вскрытием и схема побег может служить в качестве посредника для возбудимого состояния центральной нервной системы. В этом контексте анализы, описанные здесь, также будет полезно Researchers заинтересованные в регенерации конечностей и эволюции развития нервной системы, для которых П. Американа является признанным модельный организм.
Есть более чем 4000 видов тараканов, но только около 30 являются бытовые вредители. Возможно, самым известным является неверно названы американский таракан Periplaneta Американа которая возникла в Африке, и в настоящее время нашли почти везде на планете. В дополнение к своей быстрой скорости бега 1 и уклончивым поведением, в тропиках П. Американа способен полета 2,3.
Преобладающие характеристики таракана центральной нервной системы (ЦНС) являются его сегментированный характер и децентрализация управления обрабатывает 4,5. Мозг, грудной и брюшной ганглии соединены вместе парных interganglionic связок, чтобы сформировать брюшной нервной (VNC).
Ганглии на каждом сегменте интеграции центров. Они состоят из наружного, корковой области, содержащей клетки, ответственные за проницаемости гематоэнцефалического барьера просто под ними, и somata нейронов оригипеременном в этом ганглии. Эти somata может принадлежать интернейронов, модуляторных нейронов, или моторных нейронов. Они поставляют аксоны, которые остаются в ганглии происхождения (местные интернейронов), или аксоны, что проект между ганглиях ЦНС (interganglionic интернейронов) или, что прекращает свое периферийное мышечных клеток (моторные нейроны). Большинство somata расположены снизу или вбок в ганглионарной коры 5. Парные, interganglionic связки содержат только аксоны и никаких нервных клеточных тел.
Нейропиля ганглий содержит глиальные клетки (нейроглии), аксонов трактаты, пучки аксонов и дендритов (невриты) нейронов. Нейропиля лишена нейронных клеточных тел. Это регион, в ганглии, где прямые синаптические связи между нервными клетками и интеграции входов произойти.
Способность американского таракана P. Американа для обнаружения и вдруг реагируют на приближение хищника (ноги, Ханд, и т.д..) было обусловлено рефлекторной цепи, которая состоит из церки и гигантского системы волоконно 6,7. Церки, представляет собой пару роговой как, ветер чувствительных структур, расположенных на конце брюшка (рис. 1). В P. Американа брюшной поверхности каждой церка содержит около 200 нитевидные (Thread) волоски, которые организованы на 14 столбцов. Девять из этих столбцов могут быть последовательно определены в различных животных в соответствии со свойствами отклика соответствующего рецептора клетки и аксона. Каждый волос находится в гнездо, что позволяет ему сгибаться наиболее легко в одной плоскости, что является колонка конкретным. Движение волос в одном направлении вдоль своей плоскости индуцирует деполяризацию в рецепторной клетки и пакет потенциалов действия (APS) в сенсорного нейрона. Движение в противоположном направлении тормозит любые текущие спонтанные ТД 8. Предпочтительным плоскость отклонени и направленности реакции отличается в каждом столбце. Таким образом, filiforкомплексы м волосы рецепторов отвечают не только для обнаружения движение воздуха, но и для «кодирования», в виде точек доступа, том направлении, откуда воздушный поток исходит. Обработка этой информации ЦНС приводит к «соответствующего» побега ответ 6,7. Этот функционал, столбчатый специфика сенсорных волосков сохраняется от животного к животному.
Клеточного рецептора каждого волоса нитевидных отвечает за трансдуцирующих механическую отклонение волос в нейронной события (в результате в порыве или ингибирования точек доступа в аксона рецептора клетки 9. Точки доступа путешествовать к клеммной брюшной ганглий (A6) с помощью Cercal нерв XI, где они синапса с гигантскими аксонов брюшной нервной (VNC). Гигантские аксоны, как считается, отвечает за передачу и последующего возбуждения двигательных нейронов, что приводит к поведению побега 6,10,11.
Поведенческая задержки ое спасательной ответ Р. Американа является одним из самых коротких любого животного 7. Поведенческая задержка во времени между прибытием стимулом при механорецепторных и инициирования реакции побега. В экспериментах с использованием высокоскоростного кинематографии записать попытку уйти от атакующего жабы, таракан наблюдалось начать свою очередь от жабы примерно в 40 мс (время от начала расширения языка на тараканов движение 7,12. Использование контролируемых ветра затяжек , поведенческий задержки может быть снижена до 11 мс. Другие эксперименты показали, что минимальный ветер слоеного скорость 12 мм / мс (с ускорением 600 мм / мс 2) может вызвать в ответ побега, в то время еще более низкие скорости (3 мм / сек), вызванных медленно идет тараканов, чтобы остановить перемещение 12.
Сильная корреляция, что обычно существует между гигантских систем волокна и поведения побега была хорошо документирована 13,14. В инстрезонансы, где конкретная ячейка необходимо и достаточно, чтобы вызвать определенное поведение клеток, называется командной нейрона 15,16. Гигантские интернейроны (ГИС) в цепи ветер побега Р. Американа не являются необходимыми для рефлекса. Животные, которые экспериментально абляции ГУ-прежнему демонстрируют поведение побега поэтому эти солдаты не считаются командных нейронов 17,18. Разрыв шейки связки, которые ростральной к схеме сенсомоторной также влияет на поведение, что указывает на нисходящий входной сигнал от мозга оказывает влияние на направлении выхода 19. Эти аспекты точного управления и резервирования имеют огромное значение для выживания организма и дополняются нейрохимических модуляции с помощью биогенных аминов 20.
П. подготовка Американа нервный тяж был элегантная модель системы neuroethologists за последние многие десятилетия, начиная с пионерской работы Редера <вир> 21. Это позволяет студентам для записи, отображения и анализа первичных сенсорных активность и результирующие ответы гигантских интернейронов их ввода 22,23,24. В дополнение к передаче идеи, что идентифицируемые нейронные цепи лежат в основе поведенческих ответов на окружающую среду, эти упражнения должны приохотить к биологических взносов этой общей бытовой вредителя.
Одной из причин для экспонирования методы для этого классического подготовки является то, что система церки был и остается активной областью исследований в решение вопросов развития нервной схемы, а также вопросы, касающиеся ремонта синаптической и регенерации 26-31. Любой способ вызывая активность в таракана брюшной нервной могут быть использованы для изучения влияния фармакологических средств или инсектицидов на функции нервной системы. Эти эксперименты сделано простым растворением нейроактивные химических веществ в растворе. Обменявшись это решение с нормальным купания среде, изменения в вызванной или спонтанной активности может наблюдаться во время записи от связок или двигательного нерва, чтобы дать последовательную считывание эффекта химического вещества на функцию ЦНС.
Как и во всех нейрофизиологических экспериментов распространенной проблемой является электрический шум. Вероятно, самый важный фактор в качестве сигнала для этих препаратов яс всасывающий электрод печать на ткани нерва. Уплотнение, которое не полностью привлечь в церка нерва или связки идеально. Записи могут также быть сделаны с двумя электродами крюка, помещенных под нерва мозга и изоляции VNC смесью минерального масла и вазелина. Смесь может быть загружен в шприц и исключен вокруг нервной цепочки 32. Также осторожны рассечение так же важно, здесь, как и в любой подготовки ЦНС. Некоторые могут легче получить доступ к ЦНС рассечением спинной кутикулы. В то время как это уменьшает возможность повреждения брюшной нервной он может быть более трудно удалить все внутренние органы с помощью этого подхода.
Это не описано здесь, но этот препарат поддается внутриклеточной регистрации в гигантских интернейронов 32,33. Весь нервный тяж также могут быть удалены для размещения нескольких записи и стимулирующие электроды одновременно. На самом деле исследования антенной доле, грибной боду, и другие передние структуры ЦНС продолжается 34-35. В то время как таракан ЦНС продолжает проливать свет на современном нейробиологических исследований именно этот препарат является достаточно простым для использования в студенческих академических лабораториях.
The authors have nothing to disclose.
Мы благодарим Hyewon Купер для иллюстраций.
Reagent | |||
Sylgard | Dow Corning | 182 silicone kit | 182 silicone elastomer kit |
NaCl | Sigma-Aldrich | S7653 | |
KCl | Sigma-Aldrich | P9333 | |
CaCl2 | Sigma-Aldrich | C5670 | |
NaH2PO4•2H2O | Sigma-Aldrich | 71505 | |
Na2HPO4•7H2O | Sigma-Aldrich | S9390 | |
NaOH | Sigma-Aldrich | 221465 | To adjust pH |
HCl | Sigma-Aldrich | H1758 | To adjust pH |
Material Name | |||
Dissecting tools | World Precision Instruments | assortment | |
Insect Pins | Fine Science Tools, Inc | 26001-60 | |
Dissecting microscope | World Precision Instruments | PZMIII-BS | |
Glass electrodes | Sigma-Aldrich | CLS7095B5X | Box of 200, suction electrodes |
Micromanipulator | World Precision Instruments | MD4-M3-R | Can fix for base or on a metal rod |
Silver wire (10/1,000 inch) | A-M Systems | 782500 | |
Computer | any company | ||
AC/DC differential amplifier | A-M Systems | Model 3000 | |
PowerLab 26T | AD Instruments | 27T | |
Head stage | AD Instruments | Comes with AC/DC amplifier | |
LabChart7 | AD Instruments | ||
Electrical leads | any company | ||
Glass tools | make yourself | For manipulating nerves | |
Cable and connectors | any company | ||
Pipettes with bulbs | Fisher Scientific | 13-711-7 | Box of 500 |
Beakers | any company | ||
Wax or modeling clay | any company or local stores | ||
Stimulator | Grass Instruments | SD9 or S88 | |
Plastic tip for suction electrode | local hardware store (Watt's brand) | ¼ inch OD x 0.170 inch ID | Cut in small pieces. Pull out over a flame and cut back the tip to the correct size. |