無傷のゴキブリ神経系の神経回路の録音

1。解剖このプロトコルを通して使用さゴキブリ食塩溶液は以下の組成を有する。 ゴキブリ食塩水36：（100ml 100ml用のグラム） 210のNaCl（1.227グラム） 2.9のKCl（0.0216グラム） 1.8のCaCl 2（0.0265グラム） 0.2のNaH 2 PO 4•2H 2 O（0.0032グラム） 1.8のNa 2 HPO 4•7H 2 O（0.0483グラム） （pHは7.2。1 M NaOHまたは1M HClでpHを調整する）。 堅牢cercusの複数形（ 図1）があり、貯蔵タンクの男性ゴキブリを選択します。男性は解剖が容易であり、かつ全く卵巣と卵の塊を含まない、男の最後のセグメントは、女性に比べて狭い。 Pの男性アメリカーナは cercusの複数形の間の短いスタイラスのペアを持っている。これらのスタイラスは、女性では観察されない。 翼、足と頭を切り落とし、Diと体、腹側を上にして、ピンSHシリコーンエラストマーが並ぶ。 鉗子で腹側のプレートをピックアップし、細かいハサミでそれらを切断し、後端から始まり、前方に取り組んでいます。 cercusの複数形の乾燥を維持しようとしているときには、必ず生理食塩水で湿った内臓を保つ。一つはcercusの複数形を濡らすから生理食塩水を防ぐために腹部を上方に配置するために、ワックスやゴムの部分を使用することができます。彼らが濡れた場合は、ティッシュペーパーの切れ端で、それらを乾燥させます。側に内臓し、白質（脂肪体）を押します。 VNCは、フィールドの中央である腹部の長さを実行し、光沢のある気管の間に表示されるはずです。神経索は半透明であり、照明は（ 図2）が適切に調整されるまで、最初は見えにくくすることができる。鉗子や虫ピンとVNCを処理しない、代わりにガラスプローブを使用して操作します。 ピンセットで、微細なガラスの必要一対の神経索から可能な最良のように、動物の気管システムを一掃LESは、非常に慎重に、A6およびA5やA5とA4神経節（ 図3）の間で長手方向のVNC接続詞を分割します。クレードルcercusの複数形と短縮昆虫ピンとワックスまたは調製（ 図4AおよびB）を合わせてカット可能なシリコーンエラストマーのウエッジと生理食塩浴から上向きに腹部。神経節（ 図2Dおよび5）内に突出cercal神経を損傷しないように、最後の腹部のセグメント内に追加できるように注意してください。 2。細胞外記録法解剖し準備、顕微鏡、および記録装置（ 図6）ニューロンからの信号をオーバーライドすることができ、外部、特に交流、電場を遮断するために、ファラデーケージの中に設定する必要があります。 それは顕微鏡のステージを見下ろすされるように顕微鏡を配置します。製剤は、ステージ上に配置されると、高強度の照明ビームの位置を調整するそれを最大限可視化のために。 （特定のハードウェアとソフトウェアの設定については、以前に25を説明してきた）統合されたデータ記録部にAC / DC差動アンプを接続します。吸引電極を保持ヘッドステージは、アンプに接続する必要があります。 Clで被覆された銀のアース線-より安定したレコーディング中の腹部の結果に挿入。その理由は、体腔内の溶液が皿の中の入浴流体と接触していない場合には、記録電極に関連付けられた流体は、接地のままである。 4 kHzに記録周波数を設定します。 500 mVで（これは微量の可視化を最適化するように調整することができる）に電圧スケール（y軸）を設定する。刺激に反応して神経活動を記録するために、連続またはオシロスコープモードで録音ソフトウェアを実行します。 A5に近いのVNC接続詞の1をカットし、吸引電極にA6に装着切り口を置く。 Pに確認してください神経を吸引する前に内部の銀線をカバーするために吸引電極に生理食塩水をULL。 各尾角に位置して毛の上の乾燥ピペットブロー空気と。記録された結合に尾角の同側の毛を刺激すると、反対側の1とは異なる応答を与えるかどうかを確認します。応答の振幅と刺激中の指定された時間間隔でのスパイクの数をメモします。 記録cercal神経に吸引電極を移動します。必要に応じて、より良いフィット感を得るために、より小さな開口部に電極先端に切り替える。 A6に近いcercal神経を切断し尾角につながる神経を吸う。活動電位の自然発火があるはずです。今、尾角に空気を吹き付けると応答に注意してください。 3。電気的に募集を決定するために、感覚神経を刺激それはトレース（100〜500 MSEを記録するようにモードを掃引する録音ソフトを変更するC）たびに刺激がトリガされます。 刺激装置の出力に刺激電極を接続します。 2ミニフックリードまたはクリップで、刺激ケーブルを接続します。 記録部上のトリガ入力に刺激装置からのBNCトリガ出力を接続します。 10ミリ秒、周波数：1Hzで、電圧：必要に応じて（ちょうどしきい値を超えると、最大応答を得ることができること）のレコーディングに信号を得るために調整し、：時間：ディレイ0.3秒以下の刺激パラメータは、応答を呼び起こす必要があります。高電圧が神経にダメージを与えることができるように募集のための最大しきい値よりもはるかに高い電圧に行く理由はありません。 長い神経根を刺激吸引電極（ 図7、矢印の頭）に引き込むことができるように、可能な限り遠位としてcercal神経を切った。 A6およびA5または別のセグメントより前方の間の結合を使用することができます。 記録吸引電極を設定することができますので、PU電極中に切断された結合を事前にチェック！神経を吸引する前に内部の銀線をカバーするために、吸引電極にいくつかの生理食塩水を引くようにしてください。刺激電極はまた、（A3近い腹部に最適です）バス生理食塩水に接地されていることを確認します。 活動電位が画面に表示されるまで増加する電圧の単一刺激のシリーズを提供します。一つは、応答を募集する最小限の刺激電圧と継続時間の記録を確認する必要があります。接続詞におけるシナプス応答が観察されるまで、強度を上げる。巨大軸索からの大きなスパイク（細胞外のAP）が最初に表示され、その後、他の小さいのAPも観察することができる。