Выделение лимфоцитов из половых путей мышь Mucosa
Summary
Эффективный способ изолировать тракта лимфоциты мыши половых описано. Этот метод использует фермент переваривания и Percoll разделения градиента, чтобы обеспечить эффективное изоляции. Эта методика также адаптируется к для использования в других видах
Abstract
Слизистых поверхностей, в том числе желудочно-кишечного тракта, мочеполовых и дыхательных путей, обеспечивают порталы для проникновения патогенов, таких как вирусы и бактерии 1. Слизистые оболочки также индуктивных сайтов в принимающей для создания иммунитета против патогенов, таких как патчи Peyers в желудочно-кишечном тракте и носовой связанных лимфоретикулярных ткани в дыхательных путях. Эта уникальная функция дает иммунитет слизистой оболочки в качестве важнейшего игрока в системе защиты организма. Многие исследования были направлены на желудочно-кишечного и респираторного слизистой сайтов. Тем не менее, наблюдается небольшое исследование репродуктивного слизистой сайтов. Слизистой оболочки половых путей является основной сайт инфекции, передаваемые половым путем (ЗППП), в том числе бактериальных и вирусных инфекций. ЗППП являются одной из наиболее важных проблем в области здравоохранения, стоящих перед миром сегодня. Центры по контролю и профилактике заболеваний считает, что существует 19 миллионов новых инфекционных каждый год в Соединенных Штатах. STDs стоить здравоохранения США системы 17 миллиардов долларов каждый год 2, и стоимость лиц еще в непосредственном и пожизненные последствия для здоровья. Для того, чтобы противостоять этой задачей, более глубокое понимание репродуктивной иммунитет слизистой оболочки необходимы и выделения лимфоцитов является важным компонентом этих исследований. Здесь мы представляем метод воспроизводимо изолировать лимфоцитов из мышиных женских половых путей для иммунологических исследований, которые могут быть модифицированы для адаптации к другим видам. Описанный ниже метод основан на одной мыши.
Protocol
Discussion
В этом протоколе, показано, как подготовить лимфоциты мыши половых путей и легко освоили. Наиболее критическая точка этого процесса является поддержание жизнеспособности клеток, сохраняя клетки на льду. Выход клеток из этого метода зависит от техники, обработки мастерство, инфекционн…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Мы хотели бы поблагодарить NIH гранты для финансирования R01-AI026328 (КАК) и R01-AI079004 (КАК).
Materials
| Name | Company | Catalogue number | |
| Collagenase | Sigma Life Sciences | C2139-1G | |
| Percoll | GE Healthcare Bio-Sciences | 17-0891-01 | |
| RPMI1640 | Gibco by Life Technologies | 11875 |
References
- M, . The impact of perinatal immune development on mucosal homeostasis and chronic inflammation. Nat. Rev Immunol. 12, 9-23 (2011).
- Centers for Disease Control and Prevention. . 2010 Sexually Transmitted Diseases Surveillance. , (2010).
- Jain, S., Patrick, A. J., Rosenthal, K. L. Multiple tandem copies of conserved gp41 epitopes incorporated in gag virus-like particles elicit systemic and mucosal antibodies in an optimized heterologous vector delivery regimen. Vaccine. 28, 7070-7080 (2010).
- Tang, V. A., Rosenthal, K. L. Intravaginal infection with herpes simplex virus type-2 (HSV-2) generates a functional effector memory T cell population that persists in the murine genital tract. J. Reprod. Immunol. 87, 39-44 (2010).
- Gillgrass, A. E., Tang, V. A., Towarnicki, K. M., Rosenthal, K. L., Kaushic, C. Protection against genital herpes infection in mice immunized under different hormonal conditions correlates with induction of vagina-associated lymphoid tissue. J. Virol. 79, 3117-3126 (2005).
- Sajic, D., Patrick, A. J., Rosenthal, K. L. Mucosal delivery of CpG oligodeoxynucleotides expands functional dendritic cells and macrophages in the vagina. Immunology. 114, 213-224 (2005).
- Jiang, J. Q., Patrick, A., Moss, R. B., Rosenthal, K. L. CD8+ T-cell-mediated cross-clade protection in the genital tract following intranasal immunization with inactivated human immunodeficiency virus antigen plus CpG oligodeoxynucleotides. J. Virol. 79, 393-400 (2005).
- Gill, N., Chenoweth, M. J., Verdu, E. F., Ashkar, A. A. NK cells require type I IFN receptor for antiviral responses during genital HSV-2 infection. Cell Immunol. 269, 29-37 (2011).
- Thatte, A., DeWitte-Orr, S. J., Lichty, B., Mossman, K. L., Ashkar, A. A. A critical role for IL-15 in TLR-mediated innate antiviral immunity against genital HSV-2 infection. Immunol. Cell Biol. 89, 663-669 (2011).
- Kwant-Mitchell, A., Ashkar, A. A., Rosenthal, K. L. Mucosal innate and adaptive immune responses against herpes simplex virus type 2 in a humanized mouse model. J. Virol. 83, 10664-10676 (2009).
- Gallichan, W. S., Rosenthal, K. L. Effects of the estrous cycle on local humoral immune responses and protection of intranasally immunized female nice against herpes simplex virus type 2 infection in the genital tract. Virology. , 224-487 (1996).
