Isolatie van Lymfocyten van Mouse geslachtsorganen Mucosa
Summary
Een efficiënte manier om lymfocyten uit muizen genitaal isoleren beschreven. Deze methode maakt gebruik van enzymdigestie en Percoll gradiëntscheiding om efficiënte isolatie. Deze techniek is ook aangepast aan gebruik in andere species
Abstract
Mucosale oppervlakken, ook in de gastro-intestinale, urogenitale en luchtwegen, bieden portals van binnenkomst voor ziekteverwekkers, zoals virussen en bacteriën 1. Slijmvliezen ook inductieve sites in de gastheer immuniteit tegen pathogenen, zoals de Peyers vlekken in het darmkanaal en de neus-geassocieerde lymforeticulair weefsel in de luchtwegen te genereren. Deze unieke eigenschap zorgt mucosale immuniteit als een cruciale speler van de afweer systeem. Veel studies zijn gericht op het gastro-intestinale en respiratoire slijmvliezen sites. Toch is er weinig onderzoek naar de reproductieve mucosale sites. De genitale tractus slijmvlies is de primaire plaats van infectie voor seksueel overdraagbare aandoeningen (SOA), met inbegrip van bacteriële en virale infecties. SOA's zijn een van de meest kritische gezondheid uitdagingen voor de wereld van vandaag. Centers for Disease Control en Prevention schat dat er 19 miljoen nieuwe besmettelijke elk jaar in de Verenigde Staten. STDs kosten de Amerikaanse gezondheidszorg 17 miljard dollar per jaar 2, en de kosten individuen nog meer in directe en levenslange gevolgen voor de gezondheid. Om deze uitdaging het hoofd wordt een beter begrip van reproductieve mucosale immuniteit nodig en isoleren lymfocyten is een essentieel onderdeel van deze studies. Hier geven we een methode reproduceerbaar lymfocyten isoleren van murine vrouwelijke geslachtsorganen voor immunologische studies die kunnen worden aangepast voor aanpassing aan andere soorten. De hieronder beschreven methode is gebaseerd op een muis.
Protocol
Discussion
In dit protocol wordt getoond hoe lymfocyten te bereiden van de muis geslachtsorganen en is gemakkelijk onder de knie. De meest kritische punt van dit proces is cellevensvatbaarheid handhaven door hem de cellen op ijs. De cel opbrengst van deze werkwijze is afhankelijk van techniek, lossen vaardigheid, de infectieuze toestand van de muis (naïeve dagen na infectie), het pathogeen (bacteriële, virale, schimmel) en de sectie van de murine voortplantingsorganen onderzocht (eileider, uterus, vaginale segment of hele genita…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
We willen NIH bedanken voor de financiering van subsidies R01-AI026328 (KAK) en R01-AI079004 (KAK).
Materials
| Name | Company | Catalogue number | |
| Collagenase | Sigma Life Sciences | C2139-1G | |
| Percoll | GE Healthcare Bio-Sciences | 17-0891-01 | |
| RPMI1640 | Gibco by Life Technologies | 11875 |
References
- M, . The impact of perinatal immune development on mucosal homeostasis and chronic inflammation. Nat. Rev Immunol. 12, 9-23 (2011).
- Centers for Disease Control and Prevention. . 2010 Sexually Transmitted Diseases Surveillance. , (2010).
- Jain, S., Patrick, A. J., Rosenthal, K. L. Multiple tandem copies of conserved gp41 epitopes incorporated in gag virus-like particles elicit systemic and mucosal antibodies in an optimized heterologous vector delivery regimen. Vaccine. 28, 7070-7080 (2010).
- Tang, V. A., Rosenthal, K. L. Intravaginal infection with herpes simplex virus type-2 (HSV-2) generates a functional effector memory T cell population that persists in the murine genital tract. J. Reprod. Immunol. 87, 39-44 (2010).
- Gillgrass, A. E., Tang, V. A., Towarnicki, K. M., Rosenthal, K. L., Kaushic, C. Protection against genital herpes infection in mice immunized under different hormonal conditions correlates with induction of vagina-associated lymphoid tissue. J. Virol. 79, 3117-3126 (2005).
- Sajic, D., Patrick, A. J., Rosenthal, K. L. Mucosal delivery of CpG oligodeoxynucleotides expands functional dendritic cells and macrophages in the vagina. Immunology. 114, 213-224 (2005).
- Jiang, J. Q., Patrick, A., Moss, R. B., Rosenthal, K. L. CD8+ T-cell-mediated cross-clade protection in the genital tract following intranasal immunization with inactivated human immunodeficiency virus antigen plus CpG oligodeoxynucleotides. J. Virol. 79, 393-400 (2005).
- Gill, N., Chenoweth, M. J., Verdu, E. F., Ashkar, A. A. NK cells require type I IFN receptor for antiviral responses during genital HSV-2 infection. Cell Immunol. 269, 29-37 (2011).
- Thatte, A., DeWitte-Orr, S. J., Lichty, B., Mossman, K. L., Ashkar, A. A. A critical role for IL-15 in TLR-mediated innate antiviral immunity against genital HSV-2 infection. Immunol. Cell Biol. 89, 663-669 (2011).
- Kwant-Mitchell, A., Ashkar, A. A., Rosenthal, K. L. Mucosal innate and adaptive immune responses against herpes simplex virus type 2 in a humanized mouse model. J. Virol. 83, 10664-10676 (2009).
- Gallichan, W. S., Rosenthal, K. L. Effects of the estrous cycle on local humoral immune responses and protection of intranasally immunized female nice against herpes simplex virus type 2 infection in the genital tract. Virology. , 224-487 (1996).
