Isolamento dei linfociti da mouse mucosa del tratto genitale
Summary
Un modo efficace per isolare i linfociti di topo tratto genitale è descritto. Questo metodo si avvale di digestione enzimatica e la separazione gradiente Percoll per consentire l'isolamento efficiente. Questa tecnica è anche adattabile a per l'uso in altre specie
Abstract
Superfici mucose, anche nel tratto gastrointestinale, urogenitale e respiratorio, fornire portali di ingresso per i patogeni, come virus e batteri 1. Mucose sono anche siti induttivi nell'ospite per generare immunità contro patogeni, come i cerotti Peyers nel tratto intestinale e nasale associata tessuto linforeticolare nel tratto respiratorio. Questa caratteristica unica porta immunità mucosale come un giocatore fondamentale del sistema difesa ospite. Molti studi si sono concentrati sui siti della mucosa gastrointestinale e respiratorio. Tuttavia, vi è stata piccola indagine riproduttivi siti mucosali. La mucosa del tratto genitale è il sito di infezione primaria per le malattie sessualmente trasmissibili (MST), comprese le infezioni batteriche e virali. Malattie a trasmissione sessuale sono una delle sfide più critiche per la salute di fronte al mondo di oggi. Centri per il Controllo e la Prevenzione stima che ci sono 19 milioni di nuovi infetti ogni anno negli Stati Uniti. STDs costato il sistema sanitario degli Stati Uniti 17 miliardi dollari ogni anno 2, e gli individui dei costi ancora di più in immediate conseguenze per la salute e per tutta la vita. Per far fronte a questa sfida, una maggiore comprensione di riproduzione immunità mucosale è necessario e isolare i linfociti è una componente essenziale di questi studi. Qui, vi presentiamo un metodo per isolare in modo riproducibile da linfociti murini vie genitali femminili per gli studi immunologici che possono essere modificati per adattarsi ad altre specie. Il metodo descritto di seguito è basato su un mouse.
Protocol
Discussion
In questo protocollo, si mostra come preparare i linfociti da vie genitali del mouse ed è facilmente padronanza. Il punto più critico di questo processo è di mantenere la vitalità cellulare, mantenendo le cellule in ghiaccio. La quantità di cellule da questo metodo dipende dalla tecnica, manipolazione abilità, lo stato infettivo del mouse (ingenua o giorni dopo l'infezione), il patogeno (batterica, virale, fungina) e la sezione del tratto riproduttivo murino esaminati (ovidotto, utero, segmento vaginale o l…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Ci piace ringraziare NIH per le sovvenzioni di finanziamento R01-AI026328 (KAK) e R01-AI079004 (KAK).
Materials
| Name | Company | Catalogue number | |
| Collagenase | Sigma Life Sciences | C2139-1G | |
| Percoll | GE Healthcare Bio-Sciences | 17-0891-01 | |
| RPMI1640 | Gibco by Life Technologies | 11875 |
References
- M, . The impact of perinatal immune development on mucosal homeostasis and chronic inflammation. Nat. Rev Immunol. 12, 9-23 (2011).
- Centers for Disease Control and Prevention. . 2010 Sexually Transmitted Diseases Surveillance. , (2010).
- Jain, S., Patrick, A. J., Rosenthal, K. L. Multiple tandem copies of conserved gp41 epitopes incorporated in gag virus-like particles elicit systemic and mucosal antibodies in an optimized heterologous vector delivery regimen. Vaccine. 28, 7070-7080 (2010).
- Tang, V. A., Rosenthal, K. L. Intravaginal infection with herpes simplex virus type-2 (HSV-2) generates a functional effector memory T cell population that persists in the murine genital tract. J. Reprod. Immunol. 87, 39-44 (2010).
- Gillgrass, A. E., Tang, V. A., Towarnicki, K. M., Rosenthal, K. L., Kaushic, C. Protection against genital herpes infection in mice immunized under different hormonal conditions correlates with induction of vagina-associated lymphoid tissue. J. Virol. 79, 3117-3126 (2005).
- Sajic, D., Patrick, A. J., Rosenthal, K. L. Mucosal delivery of CpG oligodeoxynucleotides expands functional dendritic cells and macrophages in the vagina. Immunology. 114, 213-224 (2005).
- Jiang, J. Q., Patrick, A., Moss, R. B., Rosenthal, K. L. CD8+ T-cell-mediated cross-clade protection in the genital tract following intranasal immunization with inactivated human immunodeficiency virus antigen plus CpG oligodeoxynucleotides. J. Virol. 79, 393-400 (2005).
- Gill, N., Chenoweth, M. J., Verdu, E. F., Ashkar, A. A. NK cells require type I IFN receptor for antiviral responses during genital HSV-2 infection. Cell Immunol. 269, 29-37 (2011).
- Thatte, A., DeWitte-Orr, S. J., Lichty, B., Mossman, K. L., Ashkar, A. A. A critical role for IL-15 in TLR-mediated innate antiviral immunity against genital HSV-2 infection. Immunol. Cell Biol. 89, 663-669 (2011).
- Kwant-Mitchell, A., Ashkar, A. A., Rosenthal, K. L. Mucosal innate and adaptive immune responses against herpes simplex virus type 2 in a humanized mouse model. J. Virol. 83, 10664-10676 (2009).
- Gallichan, W. S., Rosenthal, K. L. Effects of the estrous cycle on local humoral immune responses and protection of intranasally immunized female nice against herpes simplex virus type 2 infection in the genital tract. Virology. , 224-487 (1996).
