Isolierung von Lymphozyten aus Maus Genital Tract Mucosa
Summary
Ein effizienter Weg, um Lymphozyten, die aus Maus Genitaltrakt isolieren beschrieben. Diese Methode nutzt Enzym Verdauung und Percoll Gradienten Trennung effiziente Isolierung ermöglichen. Diese Technik ist auch anpassbar für die Verwendung in anderen Spezies
Abstract
Schleimhäute, einschließlich in den Magen-Darm-, Urogenital-, und Atemwege bieten Eintrittspforten für Krankheitserreger wie Viren und Bakterien ein. Schleimhäute sind auch induktive Plattformen mit dem Host, um Immunität gegen Pathogene, wie etwa die Peyer-Plaques im Darmtrakt und der nasalen-assoziierten lymphoretikulären Gewebe im Atemtrakt zu erzeugen. Dieses einzigartige Feature bringt Schleimhaut-Immunität als ein entscheidender Spieler des Abwehrsystem. Viele Studien haben sich auf gastrointestinalen und respiratorischen Schleimhaut Standorten konzentriert. Allerdings gibt es nur wenige Untersuchungen der reproduktiven Schleimhäute. Der Genitaltrakt Schleimhaut ist die primäre Infektion Website für sexuell übertragbare Krankheiten (STD), einschließlich bakterielle und virale Infektionen. Geschlechtskrankheiten sind eine der wichtigsten gesundheitlichen Herausforderungen der heutigen Welt. Centers for Disease Control and Prevention schätzt, dass es 19 Millionen neuer infektiöser jedes Jahr in den Vereinigten Staaten. STDs kostet das US-Gesundheitssystem $ 17000000000 jedes Jahr 2 und Kosten Individuen noch in unmittelbarer und lebenslanges gesundheitlichen Folgen. Um dieser Herausforderung zu begegnen, ist ein besseres Verständnis der reproduktiven Schleimhaut-Immunität benötigt und Isolierung Lymphozyten ist ein wesentlicher Bestandteil dieser Studien. Hier präsentieren wir eine Methode, um reproduzierbare Isolierung von Lymphozyten aus murinen weiblichen Genitaltrakt für immunologische Studien, die zur Anpassung an andere Arten modifiziert werden können. Das nachfolgend beschriebene Verfahren ist auf einer Maus.
Protocol
Discussion
In diesem Protokoll wird gezeigt, wie man von Maus-Lymphozyten Genitaltrakt vorzubereiten und wird leicht beherrschen. Der kritischste Punkt bei diesem Verfahren ist, um die Zellviabilität, indem die Zellen auf Eis erhalten. Die Zellausbeute aus dieser Methode hängt von Technik, Handhabung Geschicklichkeit, den infektiösen Zustand der Maus (naive oder Tage nach Infektion), die Erreger (Bakterien, Viren, Pilze) und den Abschnitt des murinen Reproduktionstrakt geprüft (Eileiter, der Gebärmutter, vaginalen Bereich ode…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Wir möchten NIH für die Finanzierung Zuschüsse R01-AI026328 (KAK) und R01-AI079004 (KAK) danken.
Materials
| Name | Company | Catalogue number | |
| Collagenase | Sigma Life Sciences | C2139-1G | |
| Percoll | GE Healthcare Bio-Sciences | 17-0891-01 | |
| RPMI1640 | Gibco by Life Technologies | 11875 |
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