Araştırma Bronkoalveoler Lavaj (BAL); Yeterli Örnek Verim Alma

1.. Konular Solunum Araştırma Hemşiresi tarafından Geliş Met vardır Konu katı gıda ve berrak sıvıların 1 için 2 saat süreyle> 4 saat oruç olmuştur. Prosedürü (standart hastane politikası uyarınca) uygun öncesi ve işlem sonrası kontrolleri ile bir günlük vaka olarak gerçekleştirilir. Konu bir hastane elbisesi giyer. Küçük bir göstergesi kanül (ideal sol eline) yerleştirilir ve işlem sonrası iyileşme dönemi 1 sonuna kadar yerinde kalır. Uygulama öncesi gözlemler alınır (kan basıncı, kalp hızı, oksijen satürasyonu [sats]). Konu bronkoskopi aktarılır. 2. Konu Bronkoskopi deneyimli bir Solunum Araştırma Klinisyen tarafından Suite Prosedür için hazırlanır 3-kurşun EKG, pulse oksimetre 1,10 ve tansiyon aleti; izleme ekipmanları da dahil olmak üzere takılır. Anesthetic destek yazılı bilgilendirilmiş onam dahil olmak üzere gerekli değildir. Oksijen>% 90 1 satürasyonu elde etmek kadar 4 L / dk nazal kanül aracılığı ile teslim edilebilir. Operatör, bu steril serum fizyolojik aspire etkili emme sağlanması içerir, bronkoskop denetler. Lidokain ile topikal anestezi (lidokain kullanılarak) (Instillagel 1 kullanarak) burun ve ağız mukozasında elde edilir Sedasyon uygun ve konu ile talep varsa, intravenöz midazolam 1 verilir. Uygun bir ters madde (flumazenil) hemen kullanılabilir. Resüsitasyon ekipmanı 1,10 hazır olmalıdır. 3. Bronkoskop yerleştirilebilirler edilir Entübasyon burun üzerinden genellikle. Bu durum, nazal polipler, iltihaplı konka ya da sonra herhangi bir rahatsızlık söz konusu ağız yolu ile entübe mümkün değilse (bir ağız koruma önlemek için kullanılır) kapsamı veya deneğin dişlerine zarar verebilir. Gırtlak topikal anestezi genellikle 4-6 ml toplam kullanılan,% 4 lidokain kullanılarak tamamlandı. Genellikle bu damlatılmasından üzerinde öksürüğe neden olur. Ses telleri geçti ve olan sağ alt lob (RLL) ve sağ orta lob (RML) bölünmesi de ve RML girişinde, karina 2 lidokain% 2 ml'lik numuneler kullanılarak daha fazla mukozal anestezi. Bronkoskop emme ('Wink test', emme düğmesi kullanılarak uygulandığı zaman hava yolu daraltır ve böylece güvenli bir konumda olmak için yeterince uzak ama çok uzak olmayan bir konumda, ideal medial segmentte, RML içinde konumlandırılır .) İyi konumlandırma tam bronkoskopist ve hemen nazik emiş tam kapanmıyor bir havayolu konumunda muhafaza edilebilir bir bronkoskop ile Göz testi sırasında belirtilir. 4. BAL Yapılır Dört 60 ml şırınga önceden vardır60 ml, 50 ml, 50 ml, ve birbirini takip eden şırıngalar içinde, 40 ml – ısıtıldı, normal tuzlu su ile doldurulur. Konu ve bronkoskopist hazır olduğunuzda bronkoskopist RML olarak konumunu korumaktadır ederken tuzlu ilk şırınga bronkoskopi asistanı tarafından telkin edilir. Nazik el emme sonra aynı port ve 50 ml şırınga kullanarak asistanı tarafından yapılır. Bu prosedür, o zaman özel bir teknik kullanılan 200 ml'lik bir maksimum hacme sahip, bir başka 3 kez tekrar edilir. Alınan BAL sıvısı zaten erimeye buz üzerinde tutulan etiketli kaplar içine yavaşça dışarı atılır. Cam kaplar, hücre bağlanmasının inhibe edilmesi ve hücre dönüş en üst düzeye çıkarmak amacıyla presiliconized olabilir. BAL sıvısı yüzey aktif maddeler ile oluşan yüzey, sabun köpüğü ile ışığa karşı puslu görünür. Bronkoskop yavaş yavaş tamamen çekilir. BAL sıvısı anında işlem için buz üzerinde bir gecikme olmaksızın taşınır. 5. Konu Kurtarma </p> Konu bir koğuşta solunum araştırma hemşiresi tarafından 2-4 saat için geri kazanılır. Bu süre içinde onlar (kendi yutmak güvenli olarak değerlendirilir zaman) işleminden sonra, sırayla aspirasyon riskini azaltmak dinlenmek ve daha sonra sadece yemek ve> 60 dakika 1 içmek için izin verilir. Mesaj usul gözlemler izlenir ve kaydedilir. Bir klinik muayene deşarj öncesinde oluşur. Konu yaygın yan etkileri (ateş, hafif sağ submamariyan göğüste rahatsızlık hissi, boğaz ağrısı) hakkında Taburcu bilgi verdi ve önemli yan etkileri 1 oluşması durumunda bir irtibat numarası verilir. Konu takip edilir 1-5 gün bir klinik temas sonrası prosedür de. Bu telefonla ya da şahsen olabilir. 6. Hücreler Laboratuvarında İzole nelerdir – Erime Ice gerçekleştirin nerede Olası BAL sıvısının hacmi, steril bir gazlı bez bir çift tabaka ile kaydedilir ve süzülürönceden soğutulmuş, steril bir 50 ml santrifüj tüplerine mukus fişler kaldırın. Hücreler, 5-10 dakika boyunca 4 ° C'de 500 x g'de santrifüj ile pelet haline getirildi ve 50 ml normal tuzlu su içinde soğuk bir vorteks ile yıkanır. Santrifüj bir kez tekrarlanır. Hücreler (RPMI-1640 +% 10 cenin sığır serumu + 2 mM L-glutamin + Penisilin [40 IU / ml], streptomisin [75 IU / ml] ve amfoterisin B [0.5 IU / ml]) ve kültür ortamında yeniden süspanse diferansiyel sayma tripan mavinin eşit hacmi ve bir hemasitometre kullanılarak gerçekleştirilmiştir. Hücre süspansiyonu, uygun doku kültür levhaları içerisine pipetle tanıtıldı (biz 1 x 10 6 hücre / ml kullanımı) ve makrofaj yapışmasını sağlamak için 3 saat boyunca 37 ° C'de inkübe istenilen yoğunluğuna normalize edilir. Oyuk başına bu hücre süspansiyonu 1 ml 24 oyuklu kültür plakaları için uygundur. Lenfosit çalışması için, inkübasyon 3 saat sonra kültür ortamı nazikçe yukarı ve aşağı 3x pipetle ve toplanır. Bu ortam, lenfositler içerirve yapışmayan makrofajlar ve lenfosit fonksiyonunu değerlendirmek için kullanılabilir, aynı zamanda saflaştırma adımları kullanılabilmektedir makrofajlar kaldırmak için CD14 manyetik boncukları ile örneğin. Makrofaj çalışması için, inkübasyon 3 saat sonra, ortam dikkatlice minimal pipetleme ile çıkarılır ve taze antibiyotikler olmadan, sıcak bir ortam (RPMI 1640 +% 10 cenin sığır serumu + 2 mM L-glutamin) ile değiştirildi. Makrofajlar (bkz. Şekil 1), doku kültürü plakasına yapışık.