Lavagem Broncoalveolar (BAL) de Investigação; Obtenção adequada Rendimento Amostra

1. Os assuntos são recebido à chegada pela enfermeira Respiratory Research O assunto tem sido jejum de> 4 horas para alimentos sólidos e 2 horas para líquidos claros 1. O procedimento é realizado como um caso dia com cheques pré-e pós-procedimento adequado (de acordo com a política do hospital padrão). O sujeito usa um vestido hospital. É inserida uma cânula de pequeno calibre (idealmente para o lado esquerdo) e permanece in situ até ao final do período de recuperação pós-procedimento 1. Observações pré-procedimento são tomadas (pressão arterial, freqüência cardíaca, saturação de oxigênio [SATS]). O assunto é transferido para a suíte broncoscopia. 2. O assunto está preparado para o procedimento na Suite por uma Research Clínico Respiratório Experiente em broncoscopia O equipamento de monitorização está em anexo, incluindo, 3-lead ECG, oxímetro de pulso e 1,10 esfigmomanômetro. Anestésicosapoio ic não é necessária, incluindo consentimento informado por escrito. O oxigénio pode ser fornecido através de uma cânula nasal de até 4 L / min, para atingir sats> 90% 1. O operador verifica o broncoscópio, isso inclui a garantia de sucção eficaz por aspiração de soro fisiológico estéril. A anestesia tópica com lidocaína é atingida nas vias nasais (utilizando Instillagel 1) e da mucosa oral (usando xilocaína) Se a sedação é apropriado e solicitado pelo sujeito, midazolam é administrado 1. Um agente de reversão apropriado (flumazenil) está imediatamente disponível. Equipamento de reanimação devem estar prontamente disponíveis 1,10. 3. O broncoscópio é inserido e posicionado A intubação é geralmente através do nariz. Se isto não é possível devido a pólipos nasais, cornetos inflamados, ou qualquer desconforto, então o assunto é entubados através da boca (boca-guarda é usado para prevenirdanificar o âmbito ou os dentes do assunto). A anestesia tópica da laringe é completada usando 4% de lidocaína, geralmente um total de 4-6 mL é utilizado. Normalmente este provoca tosse em instilação. As cordas vocais são passados, e mais anestesia mucosas utilizando 2 ml alíquotas de lidocaína a 2% na carina, na divisão do lobo inferior direito (MID) e lobo médio direito (RML) e na entrada RML. O broncoscópio é posicionado dentro da RML, de preferência no segmento medial, numa posição em que é afastada o suficiente para estar em uma posição segura, mas não muito distante, de modo que as vias aéreas colapsa quando a sucção é aplicada ("teste de interesse" utilizando o botão de sucção ). Bom posicionamento é indicado durante o teste piscadela por um broncoscópio, que pode ser totalmente mantido em posição pelo broncoscopista e uma via aérea que não fechar totalmente imediatamente na sucção suave. 4. O LBA é realizado Quatro de 60 ml são seringas précheio com soro fisiológico normal aquecido – 60 ml, 50 ml, 50 ml e 40 ml em seringas sucessivas. Quando o assunto e broncoscopista estão prontos a primeira seringa de soro fisiológico é instilada pela assistente broncoscopia, enquanto o broncoscopista mantém a posição na RML. Sucção mão suave é então realizada pelo assistente usando a mesma porta e 50 ml seringa. Este procedimento é repetido mais uma 3x, com um volume máximo de 200 ml usados ​​no nosso técnica específica. O LBA recuperado é expelido suavemente em recipientes rotulados já realizada no derretimento do gelo. Embalagens de vidro podem ser presiliconized, a fim de inibir a adesão celular e maximizar o retorno celular. O LBA parece nebuloso contra a luz com bolhas de sabão superfície formada por surfactantes. O broncoscópio é lentamente totalmente retirado. O LBA é transportado sem demora no gelo para processamento imediato. 5. Recuperação Assunto </p> O assunto é recuperado para 2-4 hr pela enfermeira investigação respiratória em uma enfermaria. Durante esse tempo, eles estão autorizados a descansar e só então comer e beber> 60 min 1 após o procedimento (quando sua andorinha é avaliado como seguro), a fim de reduzir o risco de aspiração. Observações Mensagem processuais são monitorados e registrados. Um exame clínico ocorre antes da descarga. O assunto é informado predischarge sobre os efeitos colaterais comuns (febre, desconforto no peito submamária direita moderada, dor de garganta) e dado um número de contacto em caso efeitos colaterais significativos ocorrem 1. O assunto é acompanhado em 1-5 dias após o procedimento com um contato clínico. Isto pode ser por telefone ou pessoalmente. 6. As células são isoladas no Laboratório – Executar em Degelo Onde Possível O volume de fluido de BAL é gravado e filtrada através de uma camada dupla de gaze estéril cotoneteremover tampões de muco em previamente arrefecido, estéreis tubos de centrífuga de 50 ml. As células são sedimentadas por centrifugação a 500 xg, a 4 ° C durante 5-10 min e lavou-se por rotação em 50 ml de solução salina normal de frio. A centrifugação é repetida uma vez. As células são novamente suspensas em meio de cultura (RPMI-1640 + 10% de soro fetal de bovino + 2 mM de L-glutamina + penicilina [40 IU / ml], estreptomicina [75 IU / mL], e anfotericina B [0,5 IU / ml]) e contagem diferencial realizadas utilizando um volume igual de azul de tripano e um hemocitómetro. A suspensão de células é normalizado para a densidade necessária (usamos 1 x 10 6 células / ml), introduzido por pipeta em placas de cultura de tecidos adequados, e incubados a 37 ° C durante 3 horas para permitir a aderência de macrófagos. 1 ml desta suspensão de células por poço é adequado para placas de cultura de 24 poços. Para o trabalho de linfócitos, após 3 horas de incubação, o meio de cultura é suavemente pipetados para cima e para baixo 3x, e recolhida. Este meio contém linfócitose macrófagos não aderentes e podem ser utilizados para avaliar a função dos linfócitos, mas também pode ser usado em passos de purificação, por exemplo, com pérolas magnéticas CD14 para remover os macrófagos. Para o trabalho de macrófagos, após 3 horas de incubação, o meio é cuidadosamente removido com pipeta mínima e substituído com meio fresco, quente, sem antibióticos (RPMI 1640 + 10% de soro fetal de bovino + 2 mM de L-glutamina). Os macrófagos são aderentes à placa de cultura de tecido (ver Figura 1).