Descriviamo una tecnica di ricerca per la broncoscopia a fibre ottiche e di lavaggio broncoalveolare con l'aspirazione a bassa pressione. La tecnica è utilizzata per raccogliere cellule immunitarie dalle superfici bronco polmonare. Viene utilizzato anestesia locale e sedazione cosciente lieve (midazolam). Soggetti tollerano gli effetti collaterali minimi procedura di bene e di esperienza.
Descriviamo una tecnica di ricerca per la broncoscopia a fibre ottiche con lavaggio broncoalveolare (BAL) con mano il manuale di aspirazione possedute al fine di rimuovere le cellule non aderenti e liquido rivestimento del polmone dalla superficie della mucosa. In ambienti ricerca, BAL permette di campionamento di innata (macrofagi polmoni), cellulari (cellule T B e) e umorali (immunoglobulina) risposte all'interno del polmonare.
BAL è accettata a livello internazionale per scopi di ricerca e dal 1999 la tecnica è stata eseguita in> 1.000 soggetti nel Regno Unito e in Malawi dal nostro gruppo.
La nostra tecnica utilizza aspirazione portatile delicato da fluido instillato, questo è stato progettato per massimizzare il volume BAL restituito e applicare una forza minima al taglio su epiteli ciliati al fine di preservare la struttura e la funzione delle cellule all'interno del BAL e preservare la vitalità di facilitare la crescita di cellule in coltura ex vivo. La tecnica di ricerca utilizza pertanto un più ampio volume di insstillato (tipicamente dell'ordine di 200 ml) e impiega aspirazione manuale per ridurre il danno cellulare.
I pazienti sono date anestesia locale, offerto sedazione cosciente (midazolam), e tollerano la procedura bene con effetti collaterali minimi. Informazioni soggette verbale e scritta migliora la tolleranza e il consenso informato scritto è obbligatoria. Sicurezza del soggetto è fondamentale. I soggetti vengono accuratamente selezionati con chiari criteri di inclusione ed esclusione.
Questo protocollo include una descrizione dei rischi potenziali e le misure adottate per mitigare loro, un elenco di controindicazioni, pre e verifiche post-procedura, nonché precise tecniche di broncoscopia e di laboratorio.
Sfondo
Broncoscopia a fibre ottiche è stato sviluppato per la pratica clinica, è ampiamente utilizzato sia diagnostico che terapeutico 1,2. Il lavaggio broncoalveolare (BAL) rimuove le cellule non aderenti e del polmone rivestimento liquido dalla superficie della mucosa, la biopsia viene usato per campionare mucosa e sottomucosa tessuti. In ambienti di ricerca, BAL permette di campionamento di innata (macrofagi polmonari 3-5), cellulare (B e le cellule T 6), e umorali (immunoglobuline 7) risposte all'interno del polmone.
BAL è accettata a livello internazionale per la ricerca 8 e dal 1999 la tecnica è stata eseguita in> 1.000 soggetti nel Regno Unito e in Malawi dal nostro gruppo. Usiamo questa tecnica negli studi di risposte immunitarie innate, cellulari e umorali all'antigene pneumococco inclusi sperimentale trasporto umano pneumococcica 9,17, biomassa fumo 5, HIV e la vaccinazione, e stu trattamento adiuvantemuore in recupero da polmonite. La nostra tecnica utilizza aspirazione a mano gentile di liquido instillato, questo è stato progettato per massimizzare il volume BAL restituiti e applicare una forza minima di taglio sulla epiteli ciliato al fine di preservare la struttura e la funzione delle cellule all'interno del fluido BAL.
In un contesto di ricerca BAL utilizza una tecnica diversa da quella praticata da medici di assistenza respiratoria e intensiva (lavare spesso definita bronchiale, lavaggi, di lavaggio, o BAL), che mirano a ottenere benefici diagnostico o terapeutico. La tecnica di ricerca è destinato a raccogliere le cellule e preservare la vitalità di facilitare la crescita delle cellule in coltura ex vivo. Per questi motivi la tecnica di ricerca utilizza un instillate volume più grande (tipicamente dell'ordine di 200 ml) e impiega aspirazione manuale per ridurre il danno cellulare. I pazienti sono date anestesia locale, offerto sedazione cosciente (midazolam), e tollerano la procedura bene con effetti collaterali minimi. Soggettivi verbale e scrittainformazioni t migliora la tolleranza e il consenso informato scritto è obbligatoria 1.
Scopo
L'obiettivo generale è che la procedura dovrebbe essere sicuro ed efficace. I soggetti non dovrebbero incontrare alcun disturbo fisiologico e gli operatori devono costantemente raccogliere in eccesso di 100 ml di BAL di soggetti. Dopo la procedura, i soggetti dovrebbero verificarsi effetti collaterali minimi.
Sicurezza
Sicurezza del soggetto è fondamentale. I soggetti vengono accuratamente selezionati con chiari criteri di inclusione ed esclusione. Questo protocollo include una descrizione dei rischi potenziali e le misure adottate per mitigarli.
Controindicazioni alla broncoscopia ricerca possono essere espressi come assoluto o relativo, e sono inclusi nel nostro protocollo di studio come criteri di esclusione e di inclusione. I nostri soggetti sono tutti selezionati per garantire piena salute.
Controindicazioni assoluteincludere rachide cervicale instabile, ipossia non risponde, angina instabile, diatesi emorragica e maligna aritmia cardiaca.
Le controindicazioni relative, comprese quelle condizioni associate con l'aumento del tasso di complicanze, comprendono:
Generale: mal cooperativa soggetto 1, alcun significativo problema di salute generale ad esempio l'epilessia, precedente broncoscopia mal tollerata, noto reazioni avverse ai lidocaina o midazolam, gravidanza, cattiva alimentazione.
Respiratorio: ipossia [saturazioni (CST), in onda <94%], ipercapnia, asma instabile 1, la funzione respiratoria significativa compromissione 1 (FEV1 <1 L), ipertensione polmonare.
Cardiovascolare: uremia, entro 6 settimane di infarto del miocardio 1, superior ostruzione della vena cava.
Altro: immunosoppressione (il nostro gruppo si esibisce regolarmente questa proceduradura in soggetti HIV positivi).
Vedi Tabella 1 – Rischi connessi con BAL per la ricerca.
Per ottenere buoni risultati i seguenti sono utili:
The authors have nothing to disclose.
Grazie a Elena Mitsi (Assistente di ricerca) e suor Carole Hancock (infermiere Research) e personale del teatro per il loro contributo alla ripresa, e David Shaw (infermiere ricerca) per il suo supporto con i nostri broncoscopie di ricerca. Grazie anche al nostro volontario Rebecca Dunphy per consentire a questa procedura per essere girato.
Material |
Company |
Catalogue Number |
Comments |
Fibreoptic bronchoscope, light and suction source |
unspecified |
||
Surgical gown, sterile gloves |
unspecified |
||
Sphygnomanometer |
unspecified |
For continuous patient monitoring |
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Pulse oximeter |
unspecified |
For continuous patient monitoring |
|
3 lead ECG monitor |
unspecified |
For continuous patient monitoring |
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Nasal oxygen delivery 2-4l/min |
unspecified |
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Lidocaine 10% spray (Xylocaine) |
AstraZeneca |
For topical anaesthesia |
|
Lidocaine hydrochloride 2% |
unspecified |
For topical anaesthesia |
|
Lidocaine gel (Instillagel) |
Farco-Pharma, Germany |
Alternative products available from other suppliers |
|
Normal saline, sterile 200ml |
unspecified |
Warm to 30oC |
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10ml taper-end syringe (x10) |
unspecified |
For administration of lidocaine |
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Intravenous cannula 18G |
unspecified |
For administration of midazolam |
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Midazolam |
unspecified |
For sedation |
|
Flumazenil |
unspecified |
Reversal of benzodiazepine sedation (emergency use only) |
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60ml taper-end syringes (x4) |
unspecified |
For normal saline injection and BAL fluid withdrawal. May require connector to attach to the injection port of the bronchoscope |
|
Sterile gauze swab |
Vernaid, UK |
Alternative products available from other suppliers |
|
Sterile container for BAL fluid |
See text and comments |
Siliconised glass bottles reduce macrophage adherence. Alternatively, 50ml centrifuge tubes may be used (total capacity 200ml) |
|
Sigmacote |
Sigma, UK |
SL2 |
Only if siliconised glass bottles used. NB: Harmful and flammable. If used, follow precautions detailed in manufacturer’s MSDS |
Centrifuge |
unspecified |
At least 4x50ml tube capacity. Refrigeration to 4oC preferred. |
|
Shandon Cytospin centrifuge |
Thermo Scientific, UK |
For differential count only |
|
RPMI 1640 medium with L-glutamine |
Sigma, UK |
R8758 |
Alternative products available from other suppliers |
Fetal bovine serum |
Sigma, UK |
F6178 |
Alternative products available from other suppliers |
Penicillin-Streptomycin |
Sigma, UK |
P4333 |
Alternative products available from other suppliers |
Amphotericin B |
Sigma, UK |
A2942 |
Alternative products available from other suppliers |
Tissue culture plates |
Greiner Bio-One, UK |
662160 |
Alternative products available from other suppliers |
Glass microscope slides |
unspecified |
For differential count only |
|
Shandon cytofunnel |
Thermo Scientific, UK |
A78710003 |
For differential count only |
Shandon cytoclip |
Thermo Scientific, UK |
59910052 |
For differential count only |
Hemacolor staining set (fixative, red and blue reagents) |
Merck, Germany |
111661 |
Use according to manufacturer’s instructions |