Test de dépistage du stress oxydatif dans une lignée d'astrocytes féline, G355-5
Summary
Une méthode de dépistage pour détecter des environnements cellulaires oxydatif est de mesurer l'oxydation de la CM-H2DCFDA. Une fois oxydé dans une cellule, le CM-H2DCFDA changements de la non-fluorescente en un composé fluorescent. Ce changement de fluorescence est mesurée par cytométrie en flux et indique le nombre de cellules dans un milieu oxydant.
Abstract
Un mécanisme souvent suggéré de virus induit des lésions neuronales est le stress oxydatif. Les astrocytes ont un rôle important dans le contrôle du stress oxydatif du Système Nerveux Central (SNC). Les astrocytes aider à maintenir un environnement homéostatique des neurones ainsi que des neurones à partir de protéger les espèces réactives de l'oxygène (ERO). CM-H2DCFDA est un indicateur de cellules perméables à la présence des ROS. CM-H 2 DCFDA pénètre dans la cellule comme un composé non fluorescent, et devient fluorescent après estérases cellulaires éliminer les groupes acétate, et le composé est oxydé. Le nombre de cellules, mesurée par cytométrie en flux, qui sont jugés fluorescent vert est une indication du nombre de cellules qui sont dans un état d'oxydation. CM-H 2 DCFDA est sensible à l'oxydation par un grand nombre de différents ROS. Ce manque de spécificité, au sujet desquels les ROS peuvent s'oxyder CM-H 2 DCFDA, rend ce composé un régent précieux pour l'utilisation dans les premiers stades d'une enquête pathogenèse, comme ce test peut être utilisé pour dépister un environnement oxydatif cellulaire indépendamment de laquelle l'oxygène radicale ou une combinaison de ROS sont responsables des conditions cellulaires. Une fois qu'il a été établi que les ROS sont présents par oxydation du CM-H 2 DCFDA alors des expériences supplémentaires peuvent être effectuées pour déterminer les ROS ou combinaison de Ross sont impliqués dans le processus de pathogénie particulière. Les résultats de cette étude démontrent que grâce à l'ajout de peroxyde d'hydrogène une augmentation de la CM-H 2 DCFDA fluorescence n'a été détectée par rapport aux contrôles saline, ce qui indique que ce test est un test utile pour détecter un environnement oxydatif dans les cellules G355-5, un féline lignée d'astrocytes.
Protocol
Discussion
Un mécanisme suggère souvent de virus induit des lésions neuronales est le stress oxydatif 1, 4, 7, 9, 13, 15, 16, 18-22, 27, 31. Fondamentalement, il est proposé que l'exposition virale de la glie (astrocytes et microglie) radicaux communiqué réactives de l'oxygène tels que l'hydroxyde, l'anion superoxyde, l'oxyde nitrique, et / ou le peroxyde d'hydrogène, qui sont toxiques pour les neurones. De même, le stress oxydatif a également été suggéré comme un mécanisme majeur …
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Nous remercions les produits ReadiSorb pour leur généreux soutien de ces études.
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments (optional) |
|---|---|---|---|
| DMEM | Cellgro | 15-013-CV | |
| MEM Vitamins | Cellgro | 25-020-cl | 1% (v/v) |
| L-glutamine | Hyclone | 17-605E | 1% (v/v) |
| Non Essential Amino Acids | Hyclone | 25-025-cl | 1% (v/v) |
| FBS | Hyclone | SH30071.03 | 20% (v/v) |
| Essential Amino Acids | Cellgro | 25-030-cl | 0.2% (v/v) |
| 500ml vacuum filtration system | VWR | 87006-076 | |
| 15 ml conical tubes | Falcon | 352097 | |
| 75 cm2 tissue culture flasks | Falcon | 353136 | |
| 6 well tissue culture plate | Falcon | 353224 | |
| CM-H2DCFDA | Invitrogen | C6827 | |
| Propidium Iodide (PI) | Sigma | P4170-10mg | |
| Trypsin | Lonza | 17-160F | |
| H2O2 | Sigma | H6520 | |
| HyQ Antibiotic | Hyclone | SV30079.01 | 0.1% (v/v) |
| G355-5 cells | ATCC | CRL-2033 | Normal feline brain |
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