Test di screening per Stress Ossidativo in una linea felina cella astrociti, G355-5
Summary
Un metodo di screening per individuare gli ambienti ossidativo cellulare è quello di misurare l'ossidazione delle CM-H2DCFDA. Una volta ossidato all'interno di una cella di CM-H2DCFDA cambiamenti da non fluorescente in un composto fluorescente. Questo cambiamento di fluorescenza viene misurata mediante citometria di flusso e indica il numero di cellule in un ambiente ossidativo.
Abstract
Un meccanismo spesso suggerito di virus danno neuronale indotto è lo stress ossidativo. Astrociti svolgono un ruolo importante nel controllo dello stress ossidativo del Sistema Nervoso Centrale (SNC). Astrociti aiutare a mantenere un ambiente omeostatico per i neuroni così come proteggere i neuroni da specie reattive dell'ossigeno (ROS). CM-H2DCFDA è una cellula-permeabile indicatore per la presenza di ROS. CM-H 2 DCFDA entra nella cellula come un non-fluorescenti composte, e diventa fluorescente dopo esterasi cellulari rimuovere i gruppi di acetato, e il composto viene ossidato. Il numero di cellule, misurato mediante citometria di flusso, che si trovano ad essere fluorescente verde è l'indicazione del numero di cellule che sono in uno stato ossidativo. CM-H 2 DCFDA è suscettibile di ossidazione da un gran numero di differenti ROS. Questa mancanza di specificità, per i quali ROS possono ossidare CM-H 2 DCFDA, rende questo composto un reggente prezioso per l'utilizzo nelle prime fasi di un'indagine patogenesi, in quanto questo test può essere usato per individuare un ambiente ossidativo cellulare, indipendentemente da quale ossigeno radicale o la combinazione di ROS sono responsabili per le condizioni di cellulare. Una volta stabilito che i ROS sono presenti dall'ossidazione di CM-H 2 DCFDA, poi ulteriori esperimenti possono essere eseguiti per determinare quale ROS o combinazione di Ross sono coinvolti nel processo di patogenesi particolare. I risultati di questo studio dimostrano che con l'aggiunta di perossido di idrogeno, un aumento della CM-H 2 DCFDA fluorescenza è stato rilevato rispetto ai controlli salina, indicando che questo test è un test importante per la rilevazione di un ambiente ossidativo all'interno G355-5 celle, un felina linea cellulare astrociti.
Protocol
Discussion
Un meccanismo spesso suggerito di virus danno neuronale indotto è lo stress ossidativo 1, 4, 7, 9, 13, 15, 16, 18-22, 27, 31. In sostanza, si propone che attraverso l'esposizione virale della glia (astrociti e microglia) radicali rilasciano ossigeno reattive come, idrossido, anione superossido, ossido nitrico, e / o perossido di idrogeno, che sono tossici per i neuroni. Allo stesso modo, lo stress ossidativo è stato anche suggerito come un importante meccanismo patologico in metanfetamine neurotossicit?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Ringraziamo Prodotti ReadiSorb per il loro generoso sostegno di questi studi.
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments (optional) |
|---|---|---|---|
| DMEM | Cellgro | 15-013-CV | |
| MEM Vitamins | Cellgro | 25-020-cl | 1% (v/v) |
| L-glutamine | Hyclone | 17-605E | 1% (v/v) |
| Non Essential Amino Acids | Hyclone | 25-025-cl | 1% (v/v) |
| FBS | Hyclone | SH30071.03 | 20% (v/v) |
| Essential Amino Acids | Cellgro | 25-030-cl | 0.2% (v/v) |
| 500ml vacuum filtration system | VWR | 87006-076 | |
| 15 ml conical tubes | Falcon | 352097 | |
| 75 cm2 tissue culture flasks | Falcon | 353136 | |
| 6 well tissue culture plate | Falcon | 353224 | |
| CM-H2DCFDA | Invitrogen | C6827 | |
| Propidium Iodide (PI) | Sigma | P4170-10mg | |
| Trypsin | Lonza | 17-160F | |
| H2O2 | Sigma | H6520 | |
| HyQ Antibiotic | Hyclone | SV30079.01 | 0.1% (v/v) |
| G355-5 cells | ATCC | CRL-2033 | Normal feline brain |
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