إنشاء والدعوة للأورام الشبكية الإنسان في الفئران أن نقص المناعة
Summary
تم وصف طريقة لنشر أورام الشبكية الإنسان في الفئران. يتم حقن الخلايا السرطانية مباشرة في أعين الفئران نقص المناعة. وقد تم تأسيس الأورام الثانوية بنجاح باستخدام كل خلايا الأورام حصادها مباشرة من الإنسان وtumorspheres مثقف.
Abstract
زراعة خلايا ورم الشبكية في تعريف وسائل الاعلام الخلايا الجذعية تثير tumorspheres الأولية التي يمكن زراعتها والحفاظ عليها لفترة محدودة فقط. قد تكون هذه الظواهر tumorspheres مثقف يحمل الخلوية المختلفة بشكل ملحوظ بالمقارنة مع الأورام الأصلي. مظاهرة أن الخلايا المستنبتة لديها القدرة على تكوين أورام جديدة من المهم لضمان أن نموذج المثقف بيولوجيا الخلايا من الورم الأصلي.
هنا نقدم مشروع بروتوكول لنشر أورام الشبكية الإنسان في فيفو به Rag2 — / — الفئران نقص المناعة. مثقف tumorspheres الشبكية الإنسان للمرور منخفضة أو تم الحصول عليها من خلايا أورام الشبكية المقطوع حديثا الإنسان حقنه مباشرة في تجويف الجسم الزجاجي من العين الفئران شكل أورام في غضون 2-4 أسابيع. يمكن حصاده هذه الأورام وإما مزيد من passaged في أعين الفئران في الجسم الحي أو كما نمت tumorspheres في المختبر. وقد تم نشر نفذت بنجاح ما لا يقل عن ثلاثة مقاطع وبذلك مصدرا مستمرا للأنسجة الشبكية البشرية لمزيد من التجارب.
ويسلي S. بوند وادوا لاليتا والتعاون والعشرين من الكتاب.
Protocol
Discussion
أسلوب الموصوفة هنا يسهل انتشار الأورام الشبكية في أوساطهم ، intravitreal العين. وقد تم استخدام تقنية الحقن داخل المقلة في الماضي لخلق أورام من خطوط الخلايا الشبكية المشتقة من 1 وكذلك لتسليم ناقلات الفيروسية للعلاج بالجينات 2،3 العين. وقد تم الآن استخدام هذه التقنية بنجاح لإنتاج أورام الشبكية البشرية عن طريق الحقن المباشر للخلايا من الورم الرئيسي وحقن tumorspheres فضلا عن نشر سلسلة من الأورام طعم أجنبي. عادة ما يكون دليلا واضحا من تشكيل الورم (عادة leukocoria) وحظ لأول مرة في غضون 4 أسابيع ، وبعد ذلك نزيف داخل العين وانتفاخ و / أو الأنسجة المحيطة بها العالم على مدار تطوير غضون 5-8 أسابيع. وهناك أقلية من حقن الفئران تجرح العين حقن ، مما أدى إلى إغلاق الدائمين في الجفون. في هذه الحالات ، وانتفاخ هو العلامة الوحيدة على تشكيل الورم.
إنشاء أورام الفئران طعم أجنبي لم تكن ناجحة مع جميع أورام الشبكية الإنسان ، على الرغم من انتشار الاورام طعم أجنبي المنشأ غير ناجحة للغاية. هذه الملاحظة تشير إلى أن بعض الخصائص الأساسية للورم ، مثل الغزو ومستوى التمايز أو بعض العوامل الأخرى غير معروفة ، قد يكون التأثير على قدرة هذه الأورام أن تستمر في بيئة العين الفئران.
كمية من الأنسجة التي يمكن الحصول عليها من ورم الشبكية الإنسان هو صغير جدا ، وهناك قيود كبيرة على القدرة على خلايا الشبكية ثقافة الإنسان في المختبر مثل عمر محدود ، وفقدان الأنسجة الأورام الصلبة والتغيرات في النمط الظاهري الخلوية. هذا البروتوكول يوفر وسيلة بسيطة نسبيا لنشر الورم البشرية ووضع نموذج الفئران من الأمراض التي تصيب البشر. هذا يسمح كذلك في التجارب المختبرية والتجارب المجراة لبيولوجيا الشبكية ويعد الحفاظ على الورم خارج للمريض.
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
يتم توفير التمويل اللازم لهذا المشروع من قبل مؤسسة كلايتون للبحوث ومؤسسة البحوث الشبكية.
Materials
| Name | Company | Catalog # | Comments |
|---|---|---|---|
| Phenylephrine HCl 2.5% | Bausch & Lomb | 053-11 | Ophthalmic solution |
| 30-ga Needle | BD | 305128 | Regular bevel |
| 10-mL Luer-Lock Syringe | BD | 309604 | |
| 3/10-cc Insulin Syringe | BD | 328431 | |
| Alcohol swabs | BD | 326895 | |
| 6-Well Plate, Tissue Culture-Treated | BD | 353046 | |
| Proparacaine HCl 0.5% | Butler AHS | 017239 | Ophthalmic solution |
| Ketamine HCl 100mg/mL | Fort Dodge | 4402A | |
| 10-μL Hamilton Syringe | Hamilton Company | 7648-01 | |
| 32-ga Hamilton Needle | Hamilton Company | 7803-04 | Custom length – 0.5″ |
| Neurobasal-A Media | Invitrogen | 10888-022 | |
| B-27 Supplement Minus Vitamin A, 50X | Invitrogen | 12587-010 | |
| RPMI-1640 Media | Mediatech | 10-040-CV | |
| Non-essential Amino Acid Solution, 100X | Mediatech | 25-025-CI | |
| L-Glutamine, 100X | Mediatech | 25-005-CI | |
| Disposable #11 Scalpel | Miltex | 4-411 | |
| Rodent Anesthesia Combo | n/a | n/a | In-house pharmacy formulation (ketamine 37.6 mg/mL, xylazine 1.92 mg/mL, acepromazine 0.38 mg/mL) |
| Recombinant Human Epidermal Growth Factor (EGF) | STEMCELL Technologies | 02633 | Reconstitute at 10 μg/mL stock solution |
| Recombinant Human Basic Fibroblast Growth Factor (bFGF) | STEMCELL Technologies | 02634 | Reconstitute at 10 μg/mL stock solution |
| OMS-75 Operation Microscope | Topcon Medical Systems | OMS-75 | This model has been discontinued |
| 10% Formalin | VWR | 95042-908 |
References
- Chèvez-Barrios, P. Metastatic and Nonmetastatic Models of Retinoblastoma. Am. J. Pathol. 157, 1405-1412 (2000).
- Suber, M. L., Hurwitz, M. Y., Chèvez-Barrios, P., Hurwitz, R. L. Immune consequences of intraocular administration of modified adenoviral vectors. Hum. Gene Ther. 12, 833-838 (2001).
- Mallam, J. N., Hurwitz, M. Y., Mahoney, T., Chèvez-Barrios, P., Hurwitz, R. L. Efficient Gene Transfer into Retinal Cells Using Adenoviral Vectors: Dependence on Receptor Expression. Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 45, 1680-1687 (2004).
