メソッドは、マウスにヒトの網膜芽細胞腫の腫瘍を伝播するために記述されています。腫瘍細胞は、直接免疫欠損マウスの眼に注入されています。二次腫瘍が正常に直接ヒト腫瘍および培養tumorspheresから採取した細胞の両方を使用して確立されている。
定義された幹細胞培地で培養網膜芽細胞腫の腫瘍細胞は、限られた時間のために栽培し、維持することができる主tumorspheresを生じさせる。元の腫瘍と比較すると、これらの培養tumorspheresは著しく異なる細胞の表現型を示すことができる。培養細胞は、新しい腫瘍を形成する能力を持っているデモは、その培養細胞モデルを元の腫瘍の生物学を確保することが重要です。
/ – –免疫欠損マウスここではRAG2を用いた in vivo でのヒト網膜芽細胞腫の腫瘍を伝播するためのプロトコルを提示する。低継代またはマウスの眼の硝子体腔内に直接注入されたばかりの収穫、人間の網膜芽細胞腫の腫瘍から得られた細胞の培養ヒト網膜芽細胞腫のtumorspheresは2-4週間以内に腫瘍を形成する。これらの腫瘍を採取し、どちらさらにin vivoでのマウスの目に継代またはin vitroで tumorspheresとして成長させることができる。伝播が正常に少なくとも三つの通路ため、さらに実験のための人間の網膜芽細胞腫の組織の継続的なソースを確立するために行われている。
ウェズリーS.ボンドとLalita Wadhwaは、共同最初の著者です。
ここに記載された技術は、彼らの眼内、硝子体内環境での伝搬の網膜芽細胞腫の腫瘍を促進する。眼内注射の技術は、網膜芽細胞腫由来細胞株1と同様に眼遺伝子治療2,3のためのウイルスベクターを提供するから腫瘍を作成するために、過去に使用されています。この手法は、これで正常に原発腫瘍と注射tumorspheresのだけでなく、異種移植片腫瘍のシリアル伝播から細胞を直接注入することにより、人間の網膜芽細胞腫の腫瘍を生成するために利用されている。腫瘍形成(通常は白色瞳孔)の目に見える証拠は、通常、最初に軌道を取り巻く世界および/または組織の眼内出血や膨満5〜8週間以内に開発した後、4週間以内に記載されています。注射されたマウスの少数派は、まぶたの永久閉鎖につながる、充血した目を傷つける。これらのケースでは、膨満は、腫瘍形成の唯一の徴候である。
確立された異種移植腫瘍の増殖が非常に成功した場合もマウス異種移植腫瘍の確立は、すべての人間の網膜芽細胞腫の腫瘍を持つ成功していない。この観察は、そのような差別やその他の未知の要因の侵襲性やレベルなどの原発腫瘍の特定の特性が、、マウス眼球の環境中に残留するためにこれらの腫瘍の能力に影響を与える可能性がありますことを示唆している。
人間の網膜芽細胞腫の腫瘍から取得することができる組織の量はかなり小さいです、そしてそのような限られた寿命、固形腫瘍の組織像の消失と細胞の表現型の変化として、 体外培養ヒト網膜芽細胞腫の細胞への能力に大きな制限があります。このプロトコルは、ヒトの腫瘍を伝播し、ヒト疾患のマウスモデルを確立するために比較的単純な方法を提供します。これは、in vitroおよび網膜芽細胞腫と患者の腫瘍外の長いメンテナンスの生物の in vivo実験におけるさらなるできます。
The authors have nothing to disclose.
このプロジェクトの資金は、研究と網膜の研究財団のためのクレイトン財団によって提供されます。
Name | Company | Catalog # | Comments |
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Phenylephrine HCl 2.5% | Bausch & Lomb | 053-11 | Ophthalmic solution |
30-ga Needle | BD | 305128 | Regular bevel |
10-mL Luer-Lock Syringe | BD | 309604 | |
3/10-cc Insulin Syringe | BD | 328431 | |
Alcohol swabs | BD | 326895 | |
6-Well Plate, Tissue Culture-Treated | BD | 353046 | |
Proparacaine HCl 0.5% | Butler AHS | 017239 | Ophthalmic solution |
Ketamine HCl 100mg/mL | Fort Dodge | 4402A | |
10-μL Hamilton Syringe | Hamilton Company | 7648-01 | |
32-ga Hamilton Needle | Hamilton Company | 7803-04 | Custom length – 0.5″ |
Neurobasal-A Media | Invitrogen | 10888-022 | |
B-27 Supplement Minus Vitamin A, 50X | Invitrogen | 12587-010 | |
RPMI-1640 Media | Mediatech | 10-040-CV | |
Non-essential Amino Acid Solution, 100X | Mediatech | 25-025-CI | |
L-Glutamine, 100X | Mediatech | 25-005-CI | |
Disposable #11 Scalpel | Miltex | 4-411 | |
Rodent Anesthesia Combo | n/a | n/a | In-house pharmacy formulation (ketamine 37.6 mg/mL, xylazine 1.92 mg/mL, acepromazine 0.38 mg/mL) |
Recombinant Human Epidermal Growth Factor (EGF) | STEMCELL Technologies | 02633 | Reconstitute at 10 μg/mL stock solution |
Recombinant Human Basic Fibroblast Growth Factor (bFGF) | STEMCELL Technologies | 02634 | Reconstitute at 10 μg/mL stock solution |
OMS-75 Operation Microscope | Topcon Medical Systems | OMS-75 | This model has been discontinued |
10% Formalin | VWR | 95042-908 |