Drosophila Larvaların segmental Aksonlar içinde Sinaptik veziküller in vivo Görselleştirme
Summary
Bu protokol, canlı diseksiyonu tartışıyor.<em> Drosophila</em> Görüntüleme amacıyla mikrotübül parça GFP etiketli aksonal vezikül hareketi larvaları.
Abstract
Aksonal taşıma mekanizmaları nedenlerine açıklık uzun mesafe taşımacılığı hatalarına farklı nörolojik hastalıklar nasıl etkilediğini belirlemede çok önemli olduğunu göstermiştir. Bu temel süreç Hataları nöronal işleyişi ve gelişimi üzerinde zararlı etkileri olabilir. Biz, ortaya çıkarmak için tasarlanmış bir diseksiyon protokol geliştirdiler<em> Drosophila</em> Larva segmental sinirler gerçek zamanlı olarak aksonal taşıma görüntülemek için. Biz Hurd ve larva segmental sinirler immunolocalizatin için kullanılan Saxton (1996) tarafından yayınlanan bir canlı görüntüleme için bu protokol adapte var. Dikkatli diseksiyon ve uygun tampon koşulları disseke larvaların ömrünü maksimize etmek için kritik öneme sahiptir. Düzgün yapılmazsa, disseke larvaları fizyolojik şartlar altında 2-3 saat için sağlam vezikül taşıma göstermiştir. Biz UAS GAL4 yöntemi kullanın<sup> 1</sup> Ifade GFP-etiketli farklı nöronal GAL4 sürücülerini kullanarak, tek bir larva segmental sinirler akson veya birçok aksonlar içinde APP veya synaptotagmin vezikül. Diğer floresan etiketli işaretleyicileri, örneğin mitochrondria (MitoTracker) veya lizozomlar (LysoTracker), görüntülemeden önce larva uygulanan olabilir. GFP-vezikül hareket ve parçacık hareketi ayrı dalga boylarını kullanan eş zamanlı olarak görülebilir.
Protocol
Discussion
Drosophila larva segmental sinirler içinde sinaptik vezikül taşıma in vivo görüntüleme aksonal taşıma mekanizmaları çalışmak için güçlü bir araçtır. Daha önce larva sinirler içinde tekrarlar genişleme vezikül taşımacılığı 3 dinamiklerini nasıl etkilediğini aydınlatmak için genişletilmiş polyQ tekrarlar ifade taşıma dinamikleri değerlendirmek için bu protokolü kullandık. Bu protokolü kullanarak vezikül hareketinin hızı, video akışı bir kymograph…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
SG, Buffalo New York Devlet Üniversitesi ve John R. Oishei Vakfı fonları tarafından desteklenmektedir.
MK UB CURCA tarafından Öğrenci Araştırma Ödülü ile desteklenmiştir.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| 1 Pair Micro Dissection Scissors | Fine Scientific | Spring scissors – 6mm blade. 0.125 mm tip diameter | ||
| 2 Pair Forceps | Fischer Scientific | Fisherbrand Dissecting Micro-Adson serrated tip forceps | ||
| Box of Dissection Pins | Fine Scientific | Minutien Pins 0.1mm diameter |
References
- Brand, A. H., Perrimon, N. Targeted gene expression as a means of altering cell fates and generating dominant phenotypes. Development. 118, 401-415 (1993).
- Hurd, D. D., Saxton, W. M. Kinesin mutations cause motor neuron disease phenotypes by disrupting fast axonal transport in Drosophila. Genetics. 144, 1075-1085 (1996).
- Gunawardena, S., Her, L. S., Brusch, R. G., Laymon, R. A., Niesman, I. R., Gordesky-Gold, B., Sintasath, L., Bonini, N. M., Goldstein, L. S. Disruption of axonal transport by loss of huntingtin or expression of pathogenic polyQ proteins in Drosophila. Neuron. 40, 25-40 (2003).
