ショウジョウバエ幼虫分節軸索内ではシナプス小胞の in vivo可視化で
Summary
このプロトコルではのライブ解剖について説明<em>ショウジョウバエ</emイメージングの目的微小管のトラック上にGFPタグ付き軸索小胞の動きのための>幼虫。
Abstract
軸索輸送のメカニズムを解明することは、長距離輸送の欠陥は、異なる神経疾患をどのように影響するかを決定する上で非常に重要であることが示された。この本質的なプロセスの欠陥は、ニューロンの機能と発達に有害な影響を持つことができます。我々は、公開するように設計されている解剖のプロトコルを開発している<em>ショウジョウバエ</emリアルタイムで軸索輸送を表示する>幼虫の分節神経。我々はハードと幼虫の分節神経のimmunolocalizatinに使用サクストン（1996）によって発行されたものからライブイメージングのためのこのプロトコルを適応している。慎重に解剖し、適切なバッファー条件は、解剖幼虫の寿命を最大化するために重要です。正常に完了したら、解剖幼虫は生理的条件下で2〜3時間のための堅牢な小胞輸送を示している。我々は、UAS – GAL4メソッドを使用します<sup> 1</sup>急行異なる神経GAL4ドライバーを使用して幼虫の分節神経の単一の軸索または多数の軸索内のAPPまたはシナプトタグミンベシクルGFP -タグ付けする。他の蛍光標識マーカー、例えばmitochrondria（MitoTrackerにより）またはリソソーム（LysoTracker）のために、また表示する前に、幼虫に適用することができます。 GFP -小胞の運動と粒子の動きは、別の波長を使用して同時に表示することができます。
Protocol
Discussion
ショウジョウバエ幼虫の分節神経内シナプス小胞輸送のin vivoイメージングで軸索輸送のメカニズムを研究するための強力なツールです。我々は以前、反復配列の拡張は、小胞輸送3のダイナミクスにどのように影響するかを解明するために、拡張polyQリピートを発現している幼虫の神経内輸送のダイナミクスを評価するためにこのプロトコルを使用している。この…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
SGは、ニューヨーク州立大学バッファロー校からとJohn R. Oishei財団からの資金によってサポートされています。
MKはUBでCURCAによって学生研究賞によってサポートされていました。
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| 1 Pair Micro Dissection Scissors | Fine Scientific | Spring scissors – 6mm blade. 0.125 mm tip diameter | ||
| 2 Pair Forceps | Fischer Scientific | Fisherbrand Dissecting Micro-Adson serrated tip forceps | ||
| Box of Dissection Pins | Fine Scientific | Minutien Pins 0.1mm diameter |
References
- Brand, A. H., Perrimon, N. Targeted gene expression as a means of altering cell fates and generating dominant phenotypes. Development. 118, 401-415 (1993).
- Hurd, D. D., Saxton, W. M. Kinesin mutations cause motor neuron disease phenotypes by disrupting fast axonal transport in Drosophila. Genetics. 144, 1075-1085 (1996).
- Gunawardena, S., Her, L. S., Brusch, R. G., Laymon, R. A., Niesman, I. R., Gordesky-Gold, B., Sintasath, L., Bonini, N. M., Goldstein, L. S. Disruption of axonal transport by loss of huntingtin or expression of pathogenic polyQ proteins in Drosophila. Neuron. 40, 25-40 (2003).
