In vivo visualisatie van synaptische blaasjes Binnen Drosophila larven Segmentale Axonen
Summary
Dit protocol gaat in op de live-dissectie van de<em> Drosophila</em> Larven in het kader van beeldvorming van de beweging van GFP gelabelde axonale blaasjes op microtubuli tracks.
Abstract
Het ophelderen van de mechanismen van axonaal transport heeft aangetoond dat het van groot belang zijn bij het bepalen hoe defecten in vervoer over lange afstand verschillende neurologische aandoeningen beïnvloeden. Defecten in deze essentiële proces kan nadelige gevolgen hebben op de neuronale werking en ontwikkeling. Hebben we een dissectie protocol dat is ontworpen om de bloot<em> Drosophila</em> Larvale segmentale zenuwen naar axonaal transport te bekijken in real time. We hebben dit protocol aangepast voor live beeldvorming van de ene gepubliceerd door Hurd en Saxton (1996) gebruikt voor immunolocalizatin van larvale segmentale zenuwen. Zorgvuldige dissectie en een goede buffer voorwaarden zijn van cruciaal belang voor het maximaliseren van de levensduur van de ontleed larven. Wanneer goed uitgevoerd, hebben ontleed larven zien robuuste blaasje vervoer voor 2-3 uur onder fysiologische omstandigheden. We gebruiken de UAS-GAL4 methode<sup> 1</sup> Uit te drukken GFP-gelabelde APP of synaptotagmin blaasjes binnen een axon of meerdere axonen in larvale segmentale zenuwen met behulp van verschillende neuronale GAL4 chauffeurs. Andere fluorescent gelabelde markers, bijvoorbeeld mitochrondriën (MitoTracker) of lysosomen (LysoTracker), ook kan worden toegepast op de larven voordat u deze bekijkt. GFP-blaasje beweging en deeltje beweging tegelijkertijd kunnen worden bekeken met behulp van aparte golflengten.
Protocol
Discussion
In vivo beeldvorming van synaptische vesicles vervoer in Drosophila larven segmentale zenuwen is een krachtig hulpmiddel voor het bestuderen van de mechanismen in het axonaal transport. We hebben eerder gebruikt dit protocol om het transport te evalueren dynamiek binnen de larvale zenuwen drukken uitgebreid polyQ herhalingen licht te werpen op hoe de uitbreiding van herhaalt de dynamiek van blaasje vervoer 3 beïnvloeden. Met behulp van dit protocol is de snelheid van het blaasje beweging ka…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
SG wordt ondersteund door middelen van de State University van New York in Buffalo en van John R. Oishei Foundation.
MK werd ondersteund door een Student Research Award van CURCA bij UB.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| 1 Pair Micro Dissection Scissors | Fine Scientific | Spring scissors – 6mm blade. 0.125 mm tip diameter | ||
| 2 Pair Forceps | Fischer Scientific | Fisherbrand Dissecting Micro-Adson serrated tip forceps | ||
| Box of Dissection Pins | Fine Scientific | Minutien Pins 0.1mm diameter |
References
- Brand, A. H., Perrimon, N. Targeted gene expression as a means of altering cell fates and generating dominant phenotypes. Development. 118, 401-415 (1993).
- Hurd, D. D., Saxton, W. M. Kinesin mutations cause motor neuron disease phenotypes by disrupting fast axonal transport in Drosophila. Genetics. 144, 1075-1085 (1996).
- Gunawardena, S., Her, L. S., Brusch, R. G., Laymon, R. A., Niesman, I. R., Gordesky-Gold, B., Sintasath, L., Bonini, N. M., Goldstein, L. S. Disruption of axonal transport by loss of huntingtin or expression of pathogenic polyQ proteins in Drosophila. Neuron. 40, 25-40 (2003).
