في التصور المجراة من الحويصلات متشابك ضمن محاور عصبية ذبابة الفاكهة القطاعي اليرقات
Summary
يناقش هذا البروتوكول تشريح حية<em> ذبابة الفاكهة</em> اليرقات لغرض التصوير حركة الحويصلات GFP محواري الموسومة على المسارات أنيبيب.
Abstract
توضيح آليات النقل محواري أثبتت أنها مهمة جدا في تحديد كيفية العيوب في وسائل النقل لمسافات طويلة تؤثر أمراض عصبية مختلفة. يمكن عيوب أساسية في هذه العملية لها آثار ضارة على أداء الخلايا العصبية والتنمية. قمنا بتطوير بروتوكول التشريح الذي تم تصميمه لفضح<em> ذبابة الفاكهة</em> الأعصاب قطعي اليرقات لعرض المحاور النقل في الوقت الحقيقي. وقد تكيفت على هذا البروتوكول لأننا نعيش من تصوير واحد نشرته هيرد وساكستون (1996) تستخدم لimmunolocalizatin الأعصاب قطعي اليرقات. تشريح دقيق والظروف المناسبة العازلة ذات أهمية حاسمة لتحقيق أقصى قدر من عمر اليرقات تشريح. عندما يوظف بشكل صحيح ، وقد أظهرت يرقات تشريح قوية حويصلة النقل لمدة 2-3 ساعات في ظل الظروف الفسيولوجية. نستخدم أسلوب UAS – GAL4<sup> 1</sup> للتعبير عن GFP الموسومة APP أو حويصلات synaptotagmin ضمن محور عصبي واحد أو العديد من المحاور في الأعصاب قطعي اليرقات باستخدام مختلف الخلايا العصبية GAL4 السائقين. علامات أخرى الموسومة fluorescently ، على سبيل المثال mitochrondria (MitoTracker) أو lysosomes (LysoTracker) ، يمكن أن ينطبق أيضا على اليرقات قبل المشاهدين. ويمكن الاطلاع GFP – حويصلة الحركة وحركة الجسيمات في وقت واحد باستخدام موجات منفصلة.
Protocol
Discussion
في مجال التصوير فيفو النقل حويصلة متشابك داخل الأعصاب يرقات ذبابة الفاكهة قطعي هو أداة قوية لدراسة آليات النقل في محواري. لقد اعتدنا في السابق على هذا البروتوكول لتقييم ديناميات النقل داخل الأعصاب اليرقات يكرر الإعراب عن توسيع polyQ لتوضيح كيفية توسيع ي…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
ويؤيد الأمين العام بأموال من جامعة ولاية نيويورك في بوفالو من مؤسسة جون وOishei ر.
وأيد عضو الكنيست من قبل الطلاب جائزة البحوث التي CURCA في UB.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| 1 Pair Micro Dissection Scissors | Fine Scientific | Spring scissors – 6mm blade. 0.125 mm tip diameter | ||
| 2 Pair Forceps | Fischer Scientific | Fisherbrand Dissecting Micro-Adson serrated tip forceps | ||
| Box of Dissection Pins | Fine Scientific | Minutien Pins 0.1mm diameter |
References
- Brand, A. H., Perrimon, N. Targeted gene expression as a means of altering cell fates and generating dominant phenotypes. Development. 118, 401-415 (1993).
- Hurd, D. D., Saxton, W. M. Kinesin mutations cause motor neuron disease phenotypes by disrupting fast axonal transport in Drosophila. Genetics. 144, 1075-1085 (1996).
- Gunawardena, S., Her, L. S., Brusch, R. G., Laymon, R. A., Niesman, I. R., Gordesky-Gold, B., Sintasath, L., Bonini, N. M., Goldstein, L. S. Disruption of axonal transport by loss of huntingtin or expression of pathogenic polyQ proteins in Drosophila. Neuron. 40, 25-40 (2003).
