בשנת vivo ויזואליזציה של שלפוחית Synaptic בתוך האקסונים תסיסנית המגזרי הזחל
Summary
פרוטוקול זה דן חי דיסקציה של<em> תסיסנית</em> הזחלים לצורך הדמיה התנועה של שלפוחית GFP axonal מתויג על הפסים microtubule.
Abstract
הבהרת המנגנונים של תחבורה axonal הוכיח להיות חשוב מאוד בקביעת כיצד פגמים הובלה למרחקים ארוכים להשפיע על מחלות נוירולוגיות שונות. פגמים בתהליך זה חיוני יכול להיות השפעות מזיקות על ההתפתחות העצבית ואת תפקוד. פיתחנו פרוטוקול לנתיחה אשר נועד לחשוף את<em> תסיסנית</em> עצבים סגמנטלי הזחל כדי להציג תחבורה axonal בזמן אמת. אנחנו צריכים להתאים את פרוטוקול הדמיה לחיות מזו שפרסם Hurd ו סקסטון (1996) המשמש immunolocalizatin עצבים סגמנטלי הזחל. דיסקציה זהירה ותנאי חיץ תקין הם קריטיים עבור למקסם את תוחלת החיים של הזחלים גזור. כאשר נעשה כראוי, זחלים גזור הראו התחבורה שלפוחית חזקים 2-3 שעות בתנאים פיזיולוגיים. אנו משתמשים בשיטה כטב"מ-GAL4<sup> 1</sup> להביע את ה-GFP-tagged APP או שלפוחית synaptotagmin בתוך האקסון יחיד או אקסונים רבים עצבים סגמנטלי הזחל באמצעות שונות העצבית GAL4 הנהגים. סמנים מתויג fluorescently אחרים, למשל mitochrondria (MitoTracker) או lysosomes (LysoTracker), יכול להיות מיושם גם הזחלים לפני הצפייה. GFP-שלפוחית ותנועת החלקיקים ניתן לצפות בו זמנית באמצעות אורכי גל שונים.
Protocol
Discussion
בתחום ההדמיה vivo התחבורה שלפוחית סינפטית בתוך העצבים תסיסנית הזחל סגמנטלי הוא כלי רב עוצמה ללימוד מנגנוני בתחבורה axonal. השתמשנו בעבר בפרוטוקול זה על מנת להעריך את הדינמיקה בתוך התחבורה עצבים הזחל להביע מורחבת חוזר polyQ להבהיר כיצד התפשטות חוזרת להשפי…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
SG נתמכת על ידי קרנות מאוניברסיטת המדינה של ניו יורק ב באפלו ומ ג'ון ר Oishei קרן.
ח"כ נתמך על ידי פרס תלמיד מחקר על ידי CURCA ב UB.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| 1 Pair Micro Dissection Scissors | Fine Scientific | Spring scissors – 6mm blade. 0.125 mm tip diameter | ||
| 2 Pair Forceps | Fischer Scientific | Fisherbrand Dissecting Micro-Adson serrated tip forceps | ||
| Box of Dissection Pins | Fine Scientific | Minutien Pins 0.1mm diameter |
References
- Brand, A. H., Perrimon, N. Targeted gene expression as a means of altering cell fates and generating dominant phenotypes. Development. 118, 401-415 (1993).
- Hurd, D. D., Saxton, W. M. Kinesin mutations cause motor neuron disease phenotypes by disrupting fast axonal transport in Drosophila. Genetics. 144, 1075-1085 (1996).
- Gunawardena, S., Her, L. S., Brusch, R. G., Laymon, R. A., Niesman, I. R., Gordesky-Gold, B., Sintasath, L., Bonini, N. M., Goldstein, L. S. Disruption of axonal transport by loss of huntingtin or expression of pathogenic polyQ proteins in Drosophila. Neuron. 40, 25-40 (2003).
